本发明专利技术公开一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法，所述方法步骤包括配置蛋白定量稀释液和染料，将药物蛋白参考品用蛋白定量稀释液进行稀释得到标准曲线溶液，将低浓度蛋白药物、标准曲线溶液与染料进行混合，随后进行避光加热使蛋白变性，最后进行避光冷却后，再进行荧光测量，拟合标准曲线，得到药物蛋白的浓度；本发明专利技术与现有技术相比，在进行低浓度蛋白药物测定时，仍保持较高的测定准确度，且测定颜色的稳定性良好，不受各种干扰试剂的影响。试剂的影响。试剂的影响。
【技术实现步骤摘要】
一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法
[0001]本专利技术涉及生物
，具体来说是一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法。
技术介绍
[0002]蛋白浓度测定是生物技术中的一项基本实验内容，它是进行SDS
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PAGE电泳、Western Blot、Elisa、蛋白酶活性测定、蛋白二维电泳、蛋白质谱、蛋白分子量测定、蛋白测序等实验的基本前提，比较常见的蛋白浓度测定方法包括BCA法、Bradford法和Lowry法。
[0003]根据汪家政的蛋白质技术手册一书所述，BCA法基于双缩脲原理，在实验中通常需要加入低浓度的还原试剂(DTT，巯基乙醇等)，以保持蛋白的稳定，避免蛋白的变性和沉淀，但是还原试剂存在会导致BCA法中的二价铜被还原，吸收值明显增加，从而测定的蛋白样品浓度明显偏高；Bradford法在实验中与蛋白混合后，必须在10分钟内完成吸收值的测量，否则随着时间的延长，染料复合体以及蛋白
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染料复合体会逐渐沉降，导致吸收值明显降低，这样在做大量蛋白样品定量时，它所具有的缺点就更加明显，同时也容易受到蛋白样品溶液中存在的各种离子或非离子或两性去污试剂的干扰；Lowry法适用于脂类含量较高的样品的测定，也能够耐受较高浓度的去污试剂，但易受硫酸铵、Tris、甘氨酸和各种硫醇的影响，而且颜色深浅随不同蛋白而产生变化，标准曲线不是严格的直线形式，且专一性较差。
[0004]以上三种用于蛋白浓度测定方法，要么受蛋白氨基酸组成成分的影响，不同蛋白的变异系数较大，而且颜色的稳定性也较差；要么受各种干扰试剂的影响，蛋白浓度与吸收值得线性关系不好；要么受蛋白溶液中所添加还原试剂的影响，蛋白浓度测定的结果产生偏差，均不适用于低浓度蛋白的测定。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于解决现有技术的不足，提供一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法。
[0006]为了实现上述目的，设计一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法，其中所述方法的具体步骤如下：
[0007]S1.配制蛋白定量稀释液和染料；
[0008]S2.将药物蛋白参考品用蛋白定量稀释液进行稀释得到标准曲线溶液；
[0009]S3.将低浓度蛋白药物、标准曲线溶液与染料进行混合，随后进行避光加热使蛋白变性；
[0010]S4.避光冷却后，再进行荧光测量，拟合标准曲线，得到药物蛋白的浓度。
[0011]本专利技术还包括如下优选的技术方案：
[0012]进一步，所述步骤S1中蛋白定量稀释液的制备步骤如下：
[0013]S11.取18mL去离子水加入到干净的50mL离心管中；
[0014]S12.取2mL的NanoOrange Protein Quantitation diluent溶液，加入到S11中的
50mL离心管中，涡旋混匀。
[0015]进一步，所述步骤S1中染料工作液的制备步骤如下：
[0016]S13.将NangOrange Protein Quantitation reagent溶液在室温中放置30min，用漩涡混匀器混匀；
[0017]S14.取10mL蛋白定量稀释液，加入到干净的15mL离心管内，离心管用锡箔纸避光；
[0018]S15.取出40μLNanoOrange Protein Quantitation reagent溶液，加入到S14中的15mL离心管中，涡旋混匀，得到染料工作液。
[0019]进一步，所述步骤S3中避光加热具体步骤包括将配置好的样品放入恒温金属浴95℃温度下避光孵育10min。
[0020]进一步，所述步骤S4中避光冷却具体步骤包括将避光加热后的样品取出后放置室温避光自然冷却20min，再12000rpm短暂离心10s。
[0021]本专利技术同现有技术相比，其优点在于：在进行低浓度蛋白药物测定时，仍保持较高的测定准确度，且测定颜色的稳定性良好，不受各种干扰试剂的影响。
附图说明
[0022]图1为第一种参数拟合的标准曲线图。
[0023]图2为第二种参数拟合的标准曲线图。
[0024]图3为第三种参数拟合的标准曲线图。
具体实施方式
[0025]为了使本领域技术人员更好地理解本专利技术，下面结合附图对本专利技术进行进一步说明。
[0026]具体操作步骤如下；
[0027]1.仪器设备：
[0028]本专利技术采用的仪器设备包括多功能酶标仪、恒温金属浴、漩涡混匀器、离心机、移液器。
[0029]2.试剂和耗材:
[0030]2.1.耗材包括1.5mL离心管；15mL离心管；50mL离心管；20μL，200μL以及1000μL的枪头；黑色96孔酶标板。
[0031]2.2.试剂包括去离子水；参考品；NanoOrange Protein Quantitation reagent；NanoOrange Protein Quantitation diluent。
[0032]3.溶液配置：
[0033]3.1.蛋白定量稀释液的制备(可等比例配置不同体积的稀释液)：
[0034]取18mL去离子水加入到干净的50mL离心管内；再取2mLNanoOrange Protein Quantitation diluent，加到上述50mL离心管中，涡旋混匀，蛋白定量稀释液每次实验室温保存，有效期24h。
[0035]3.2.染料工作液的制备(可等比例配置不同体积的稀释液)：
[0036]将NanoOrange Protein Quantitation reagent在室温中放置30min，用漩涡混匀器混匀，取10mL蛋白定量稀释液，加入到干净的15mL离心管内，离心管用锡箔纸避光，再取
40μLNanoOrange Protein Quantitation reagent，加到上述15mL离心管中，涡旋混匀，得到染料工作液，染料工作液，现配现用。
[0037]4.样品的准备：
[0038]4.1.200μg/mL参考品溶液的制备：
[0039]用蛋白定量稀释液将参考品进行稀释，得到200μg/mL标准品溶液，每个样品需要200μL 200μg/mL的参考品溶液，其中200μg/mL的参考品溶液，现配现用，配置参考品溶液具体参见表1：
[0040]表1
[0041][0042]4.2.20μg/mL参考品溶液的制备:
[0043]取200μL制备的参考品溶液加入1800μL的蛋白定量稀释液，涡旋混匀。
[0044]4.3.6μg/mL参考品溶液的制备：
[0045]取300μL制备的20μg/mL参考品溶液加入700μL的蛋白定量稀释液，涡旋混匀。
[0046]4.4.标准曲线溶液的制备：
[0047]标准曲线溶液的制备具体参见表2：...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下:S1.配制蛋白定量稀释液和染料；S2.将药物蛋白参考品用蛋白定量稀释液进行稀释得到标准曲线溶液；S3.将低浓度蛋白药物、标准曲线溶液与染料进行混合，随后进行避光加热使蛋白变性；S4.避光冷却后，再进行荧光测量，拟合标准曲线，得到药物蛋白的浓度。2.如权利要求1所述的一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法，其特征在于S1中蛋白定量稀释液的制备步骤如下：S11.取18mL去离子水加入到干净的50mL离心管中；S12.取2mL的NanoOrange Protein Quantitation diluent溶液，加入到S11中的50mL离心管中，涡旋混匀。3.如权利要求1所述的一种测定蛋白药物低浓度静脉输注溶液中药物浓度的方法，其特征在于S1中染料工作液的制备步骤如...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢晋，张伟，赵国凤，张程，
申请(专利权)人：宁波甲贝医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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