一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法，属于多糖提取技术领域。本发明专利技术的红米米糠非淀粉多糖的制备方法包括如下步骤：采用碾米机碾磨红米米糠，无水乙醇除脂；热水浸提；利用大孔吸附树脂除去色素，Sevag溶液除去蛋白质；然后再利用乙醇沉淀多糖，复溶后透析除去单糖、寡糖等小分子杂质；利用DEAE 52Cellulose进一步分离纯化多糖组分，各组分透析脱盐、冻干后即得到高纯度的红米米糠非淀粉多糖。该方法可在糖链结构上最大程度的保护多糖的糖链完整性，获得高产率的万级重均分子量的红米米糠多糖；丰富红米米糠多糖的应用途径。径。径。

【技术实现步骤摘要】
一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法，属于多糖提取


技术介绍

[0002]红米是我国产量最高的有色米，红米中的总酚、蛋白质、黄酮类物质、γ
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氨基丁酸等活性物质的含量显著高于白米，具有提高机体抗氧化力、改善动脉粥样硬化、降低胆固醇、抗癌、降血糖、减肥、抗炎等作用。
[0003]植物多糖具有一定的抗氧化性、降血糖、降血脂作用，是一种天然的具有生理活性的物质，且目前已经证实米糠多糖的抗氧化、抗肿瘤、降血糖等生理活性。红米米糠资源丰富，研究其多糖提取纯化方法、解析多糖结构与功能、拓宽多糖的应用渠道十分必要。
[0004]在进行红米米糠多糖结构与生理活性的研究与红米多糖的实际应用时，需要尽可能减少对于多糖链状结构中的糖苷键、基团等的破坏，一是为了增加红米米糠多糖应用途径，多糖发挥不同生理活性的结构有所差别，根据应用的目的，既可以利用较完整的红米米糠多糖，又可以利用酶等手段对多糖进行特异性降解，从而得到特定的多糖片段，以达到相对应的使用目的；二是有利于对红米米糠多糖的初始结构与生理活性进行解析，为了使提取出的多糖的结构和功能，更接近其存在于红米中原始形态，通过实验尽可能地还原其在红米中的原始结构和生物活性，从而探究红米米糠非淀粉水溶性多糖对红米生理活性的贡献；三是提高多糖产率，多糖以较大的分子量存在，在相同的醇沉、透析条件下，更多的多糖留存于样液中，多糖产率增大。但是在提取、纯化过程中就加入超声、酶等辅助手段，会导致多糖的分子量发生锐减，在相同的醇沉条件下有部分多糖无法沉淀，在相同的透析条件下，部分多糖碎片会游离出透析袋外，造成产率降低。
[0005]现有技术中多糖的提取方法涉及超声辅助提取法、微波辅助提取法、酶辅助提取等方法，而超声波实际上是一种多糖降解手段，极易使得多糖链断裂。酶辅助提取法中的淀粉酶会对“Glc
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(1,4)
‑
Glc”结构具有裂解作用，使得含有此类结构的多糖链发生断裂；难以获得万级分子量以上的多糖组分。

技术实现思路

[0006][技术问题][0007]现有技术红米米糠非淀粉多糖提取过程中容易造成的糖苷键断裂、多糖链断裂，造成多糖碎片无法醇沉、被透析除去等，导致多糖信息丢失、产率较低、应用受限的问题。并且还存在纯化步骤不完全造成的多糖纯度不高，或操作方法不当，对多糖链造成二次降解，影响结构表征、生理活性研究与实际应用的问题。
[0008][技术方案][0009]为了能同时兼顾降低对多糖链的降解作用、多糖的高纯度与高产率，同时减少不必要的步骤降低成本与制样时间，本专利技术提供了一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法，具体是采用热水浸提红米米糠水溶性多糖，旨在降低剧烈的提取方式对于多糖链状结构的降
解破坏作用，同时经过热水提取、脱色、除蛋白、透析、阴离子交换柱层析分离纯化、透析脱盐、冻干得到高纯度的红米米糠非淀粉水溶性多糖组分；其中，为保证多糖产率准确性与多糖的高纯度，本专利技术将透析操作贯穿于多糖的纯化步骤中，在利用盐溶液洗脱阴离子交换柱后，多糖溶液中也存在着大量的盐类，使得多糖的有效浓度降低，透析有利于除去样品中的盐类，提高样品浓度。
[0010]本专利技术的目的是提供一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0011](1)红米米糠粉碎、脱脂、烘干、过筛；
[0012](2)将步骤(1)过筛后的红米米糠与水混合在50℃～90℃恒温条件下浸提，离心、取上清液旋蒸浓缩；
[0013](3)在步骤(2)浓缩后的多糖溶液中加入大孔吸附树脂，搅拌、抽滤、得多糖抽滤液；
[0014](4)在步骤(3)获得的多糖抽滤液中加入Sevag试剂，搅拌、然后转移至分液漏斗中，静置分层，弃去下层有机相，得多糖溶液；然后再向多糖溶液中加入无水乙醇，静置，离心、弃去上清液，沉淀物烘干，即得纯化米糠非淀粉多糖；
[0015](5)将步骤(4)得到的纯化米糠非淀粉多糖与水复溶，于透析袋中透析；并将透析液旋蒸浓缩，然后过DEAE 52Cellulose柱，洗脱分离，收集分离液；
[0016](6)将步骤(5)收集得到的分离液经过组分测定，合并相同洗脱峰为同一组分；
[0017](7)将步骤(6)合并得到的各组分离液分别旋蒸浓缩，透析脱盐，冷冻干燥，即得。
[0018]在一种实施方式中，步骤(1)所述红米米糠通过以下方式获得：利用JGMJ8098精米研磨机，按照每30g红米碾磨30s，对红米进行米糠脱离；脱离的红米米糠粉末中无白色物质。
[0019]在一种实施方式中，步骤(1)所述脱脂是将红米米糠与无水乙醇按照料液比为1:17(g/ml)，在顶置式机械搅拌器辅助下搅拌4～6h除去脂肪和部分色素，重复2次。
[0020]在一种实施方式中，步骤(1)所述过筛是将烘干后的红米米糠粉碎后80～100目筛。
[0021]在一种实施方式中，步骤(2)所述浸提的时间为4～8h，优选为5h；浸提的温度优选为60℃～70℃。
[0022]在一种实施方式中，步骤(2)所述红米米糠与水的料液比为1：20～50。
[0023]在一种实施方式中，步骤(2)所述离心是在4000～6000rpm离心20～35min。
[0024]在一种实施方式中，步骤(3)所述大孔吸附树脂为AB
‑
8大孔吸附树脂。
[0025]在一种实施方式中，步骤(4)所述Sevag试剂为三氯甲烷和正丁醇按照4:1的体积比混合得到的混合液。
[0026]在一种实施方式中，步骤(4)所述多糖抽滤液与Sevag试剂的体积比为2～5:1。
[0027]在一种实施方式中，步骤(4)所述多糖抽滤液中加入Sevag试剂，搅拌、然后转移至分液漏斗中，静置分层，弃去下层有机相，得多糖溶液的具体步骤如下：将Sevag试剂与多糖溶液按照1:5的体积比混合，利用顶置式机械搅拌器410rpm搅拌25min，混合液置于分液漏斗中静置10min，留存上清液，再将上清液重复除蛋白4次。
[0028]在一种实施方式中，步骤(4)中所述多糖溶液中加入无水乙醇，其中多糖溶液与无
水乙醇的体积比为1:4。
[0029]在一种实施方式中，步骤(4)所述烘干的温度为45～60℃。
[0030]在一种实施方式中，步骤(5)所述透析袋中透析是指在截留分子量为3500Da的透析袋中透析60～72h。
[0031]在一种实施方式中，步骤(5)所述过DEAE 52Cellulose柱，洗脱分离具体是以超纯水、0.1mol/L NaCl溶液、0.2mol/L NaCl溶液、0.4mol/L NaCl溶液、0.8mol/L NaCl溶液、1.0mol/L NaCl溶液为洗脱液，各浓度梯度的洗脱液的体积均为100ml，4ml/管承接洗脱液。
[0032]在一种实施方式中，步骤(7)所述透析脱盐，是将各组分旋蒸浓本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红米米糠非淀粉多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)红米米糠粉碎、脱脂、烘干、过筛；(2)将步骤(1)过筛后的红米米糠与水混合在50℃～90℃恒温条件下浸提，离心、取上清液旋蒸浓缩；(3)在步骤(2)浓缩后的多糖溶液中加入大孔吸附树脂，搅拌、抽滤、得多糖抽滤液；(4)在步骤(3)获得的多糖抽滤液中加入Sevag试剂，搅拌、然后转移至分液漏斗中，静置分层，弃去下层有机相，得多糖溶液；然后再向多糖溶液中加入无水乙醇，静置，离心、弃去上清液，沉淀物烘干，即得纯化米糠非淀粉多糖；(5)将步骤(4)得到的纯化米糠非淀粉多糖与水复溶，于透析袋中透析；并将透析液旋蒸浓缩，然后过DEAE 52Cellulose柱，洗脱分离，收集分离液；(6)将步骤(5)收集得到的分离液经过组分测定，合并相同洗脱峰为同一组分；(7)将步骤(6)合并得到的各组分离液分别旋蒸浓缩，透析脱盐，冷冻干燥，即得。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述脱脂是将红米米糠与无水乙醇按照料液比为1:17；g/ml，在顶置式机械搅拌器辅助下搅拌4～6h除去脂肪和部分色素，重复2次。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵建伟，李雪超，金征宇，田耀旗，周星，陈龙，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：