一种快速脱除叶绿素的方法技术

本发明专利技术属于提取物纯化技术领域，具体涉及一种快速脱除叶绿素的方法，包括以下步骤：(1)制备净化柱：将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，得到净化柱；(2)脱色：取待脱色液，上步骤(1)的净化柱脱除叶绿素，收集流出液，即得到脱色提取物。本发明专利技术采用串联技术将将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，实现了一步法净化，从而大大缩短净化时间，可大幅提高前处理速率和效率。速率和效率。速率和效率。

【技术实现步骤摘要】
一种快速脱除叶绿素的方法


[0001]本专利技术属于提取物纯化
，具体涉及一种快速脱除叶绿素的方法。

技术介绍

[0002]目前天然产物提取分离领域中，叶绿素对其他目标组分常常会造成干扰，从而影响提取物的纯度和含量测定。专利技术人在进行普通金花茶叶、四季金花茶叶、阿拉伯婆婆纳地上部分分离时，通过化学反应显色时发现，上述几种植物中主要含有黄酮类、萜类、香豆素类成分。TLC分析时，黄酮类成分在UV254nm、365nm下可见黄色明亮斑点；萜类成分通过10％硫酸
‑
甲醇、110℃加热后，可见光下可见紫
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紫红色斑点；香豆素类通过喷洒三氯化铁溶液，可见光下可见蓝色斑点。
[0003]在进行对上述植物进行系统性提取分离纯化时，出现叶绿素类化合物干扰，具体表现在提取物的中等极性馏分各部位均为绿色
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墨绿色，TLC分析时在可见光下斑点展开后从TLC板原点到前锋，均呈现绿色色带，UV365nm从TLC板原点到前锋，均呈现红色，因其在紫外及可见光下出现深色带状色带，干扰了其他物质的检识(可见光检识、紫外检识、化学反应显色检识)。且常规除叶绿素类化合物需多次反复使用硅胶柱层析，将导致其它非叶绿素类物质不可逆吸附在硅胶填料中，造成损失。
[0004]通过本脱除叶绿素的方法后，专利技术人从普通金花茶叶、四季金花茶叶中分离、纯化得到了高纯度的槲皮素、根皮素、多羟基二氢黄酮等黄酮类成分；OctylOleanolate、α
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spinasterol、Camellenodiol等三萜类成分；loliolide、iso
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loliolide、dethdrovomofoliol等倍半萜类成分。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提出了一种快速脱除叶绿素的方法。
[0006]本专利技术的技术方案为：
[0007]一种快速脱除叶绿素的方法，包括以下步骤：
[0008](1)制备净化柱：将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，得到净化柱；
[0009](2)脱色：取待脱色液，上步骤(1)的净化柱脱除叶绿素，收集流出液，即得到脱色提取物。
[0010]进一步地，步骤(1)中，所述四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱的柱长的比值为3:(3
‑
5):3。
[0011]进一步地，步骤(1)中，所述层析硅胶固相萃取柱中，硅胶填料的粒径为300
‑
400目。
[0012]进一步地，步骤(2)中，上柱前，先使用有机溶剂润洗净化柱1
‑
2次。
[0013]进一步地，所述叶绿素为132‑
hydroxypheophorbideAethylester、pheelophyll
‑
α、17c
‑
ethoxyphaeophorbidea中的一种或多种。
[0014]进一步地，所述待脱色液包括植物的乙醇提取物、二氯甲烷提取物或乙酸乙酯提取物。
[0015]进一步地，所述待脱色液的制备方法包括以下步骤：取金花茶叶依次浸泡于体积浓度为95％、80％、50％乙醇中，收集合并所有浸提液，低温减压蒸馏得到总浸膏；总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，减压浓缩，分别得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物；取乙酸乙酯提取物，采用硅胶柱层析法，以不同体积比的石油醚、乙酸乙酯混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，得到不同馏分，取其中深绿色馏分作为待脱色液。
[0016]进一步地，所述石油醚、乙酸乙酯混合液中，石油醚和乙酸乙酯的体积比为40:1
‑
0:1。
[0017]进一步地，所述待脱色液的制备方法包括以下步骤：取金花茶叶依次浸泡于体积浓度为95％、80％、50％乙醇中，收集合并所有浸提液，低温减压蒸馏得到总浸膏；总浸膏依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚提取物、二氯甲烷提取物、乙酸乙酯提取物；取二氯甲烷提取物，采用硅胶柱层析法，以不同体积比的石油醚、二氯甲烷、甲醇混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，得到不同馏分，取其中深绿色馏分作为待脱色液。
[0018]进一步地，所述石油醚、二氯甲烷、甲醇混合液中，所石油醚、二氯甲烷、甲醇的体积比为20:1:0
‑
0:10:1。
[0019]本专利技术的有益效果为：
[0020](1)本专利技术采用串联技术将将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，实现了一步法净化，从而大大缩短净化时间，可大幅提高前处理速率和效率。
[0021](2)本专利技术对叶绿素类物质特异性去除较高，克服了传统活性炭吸附叶绿素等方法对非叶绿素类物质造成损失。
附图说明
[0022]图1为实施例2中待脱色液叶绿素的HPLC图谱；
[0023]图2为实施例2中脱色提取物的HPLC图谱，其中a为132‑
hydroxypheophorbideAethyl ester，b为pheelophyll
‑
α，c为17c
‑
ethoxyphaeophorbidea；
[0024]图3为UV365nm下除叶绿素前后TLC薄层层析色谱图，其中Ⅰ为除叶绿素前TLC薄层层析色谱图，Ⅱ为除叶绿素后TLC薄层层析色谱图；
[0025]图4为可见光下除叶绿素前后TLC薄层层析色谱图，其中Ⅲ为除叶绿素前TLC薄层层析色谱图，Ⅳ为除叶绿素后TLC薄层层析色谱图；
[0026]图5为实施例4中待脱色液叶绿素的HPLC图谱，其中d为chlorophylla；
[0027]图6为实施例4中流出液A的HPLC图谱，其中d为chlorophylla；
[0028]图7为实施例4中流出液B的HPLC图谱，其中d为chlorophylla；
[0029]图8为实施例4中流出液C的HPLC图谱，其中d为chlorophylla；
[0030]图9为实施例4中流出液D的HPLC图谱，其中d为chlorophylla。
具体实施方式
[0031]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施
例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0032]实施例1
[0033]净化柱的制备：
[0034](1)分别制备四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱。
[0035]其中，所述四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱的制备方法为：取固相萃取空柱，在柱管底部压入筛板，填装2
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5g四烷基硅烷键合硅胶填本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备净化柱：将四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱自上而下依次串联，得到净化柱；(2)脱色：取待脱色液，上步骤(1)的净化柱脱除叶绿素，收集流出液，即得到脱色提取物。2.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述四烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱、八烷基硅烷键合硅胶固相萃取柱和层析硅胶固相萃取柱的柱长的比值为3:(3
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5):3。3.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述层析硅胶固相萃取柱中，硅胶填料的粒径为300
‑
400目。4.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：步骤(2)中，上柱前，先使用有机溶剂润洗净化柱1
‑
2次。5.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述叶绿素为132‑
hydroxypheophorbide A ethyl ester、pheelophyll
‑
α、17c
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ethoxyphaeophorbide a中的一种或多种。6.如权利要求1所述的一种快速脱除叶绿素的方法，其特征在于：所述待脱色液包括植物的乙醇提取物、二氯甲烷提取物或乙酸乙酯提取物...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨克迪，马思远，梁淑燕，谭璐，葛利，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：