含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法技术

本申请涉及一种含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，包括以下步骤：A、向待测样品溶液加入透明质酸钠酶进行酶解；B、将酶解后的待测样品溶液直接进样至高效液相色谱仪中，采用CS

【技术实现步骤摘要】
含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法


[0001]本申请涉及医疗器械及检测分析领域，具体涉及一种护理液中微量双胍类防腐剂含量的检测方法，尤其涉及一种含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法。

技术介绍

[0002]目前市场上用于消毒防腐剂原料的活性成分有酚类、含碘类、酸类、醇类、胍类和季铵盐类等。胍类消毒剂及季铵盐类消毒剂具有化学性能稳定、毒副作用小、环境友好等特点，对细菌繁殖体和亲脂性病毒等具有杀灭或抑制作用。有研究指出，双胍类防腐消杀剂在低浓度下就具有良好的微生物消杀防腐效果。具体来说，在1个ppm的浓度下，双胍类防腐消杀剂就可以达到很好的防腐效果，同类的其它防腐剂起效浓度均在30个ppm以上。故而，双胍类防腐剂在眼科护理液中应用最为广泛。
[0003]临床应用的大部分滴眼液以及角膜接触镜的护理液中均含有防腐剂。研究发现长期滴用含有防腐剂的滴眼液可能引起角膜、结膜上皮细胞的毒性反应。由于角膜上皮具有屏障和维持眼表完整性的作用,其损伤将造成角膜糜烂甚至会导致失明。
[0004]聚六亚甲基双胍(PHMB)是常用的杀菌消毒剂，它是一种半透明无菌型树枝状固体，在水中能发生电离，亲水基部分具有强烈的正电性，吸附通常呈负电性的各种细菌、病毒，进入细胞膜内抑制膜内的脂质体合成，造成质体凋亡，达到最佳的杀菌效果。由于其具有无刺激、无毒性、稳定而高效的特点,在低浓度下用于防腐剂将会大大减少对眼表的损伤,在滴眼液中可能是一个很好的防腐剂。
[0005]目前医疗器械行业检测护理液中微量双胍类防腐剂含量主流方法为固相萃取
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高效液相色谱法。该方法的主要原理是利用固相萃取装置先将护理液中的双胍类防腐剂防腐剂富集在固相萃取柱上，舍弃护理液中的其他组分，然后用洗脱剂洗脱富集在固相萃取柱上的双胍类防腐剂，其次将双胍类防腐剂富集液用氮气吹干，最后用水复溶。该方法存在回收率(准确度)低、固相萃取重现性差、净化富集效果不理想和固相萃取柱流速低耗时长等一系列弊端。
[0006]现有利用高效液相色谱法对双胍类防腐剂进行检测大致有以下几种方式：
①
：采用ODS色谱柱(十八烷基硅烷键合硅胶填料，也可以称为C18色谱柱)，C18色谱柱根据待测物分子极性大小进行选择性分离，但该方法测得的峰宽通常较宽，而且峰形对称性不佳，此外聚六亚甲基双胍因带电与ODS色谱柱硅胶填料存在吸附问题，可能会对检测结果造成影响；
②
采用离子交换色谱柱，例如磺酸基阳离子交换键合硅胶色谱柱，该色谱柱工作原理是利用待测物电离后的电荷差异来选择性分离，而眼用护理液的配方中通常含有一定量的透明质酸钠等离子型化合物，离子型化合物成分的存在会对离子交换色谱柱检测双胍造成干扰，从而影响检测结果的准确性；此外离子色谱柱对pH值敏感，保留时间漂移严重，且价格昂贵，因此并不适合眼用护理液中双胍含量的检测。
[0007]因而，开发出一种用高效液相色谱仪直接进样，简化样品前处理，同时又经济、简便快捷、回收率(准确度)高、重现性好的适用于眼用护理液中双胍含量的检测方法很有必要。

技术实现思路

[0008]当眼用护理液包括透明质酸钠时，可通过向眼用护理液中添加透明质酸钠酶进行酶解，以尽量避免透明质酸钠发生电离，影响检测结果的准确性。但是，本申请专利技术人在反复实验中发现，向待测样品溶液添加透明质酸钠酶以后，若检测条件不当时，会导致后续进行HPLC测试时基线不稳，并出现杂质峰，影响检测结果的准确度。
[0009]基于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种准确度高且重现性好的含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法。
[0010]为了解决上述技术问题，本申请提供下述技术方案。
[0011]本申请提供了一种含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，包括以下步骤：
[0012]A、向待测样品溶液加入透明质酸钠酶进行酶解；
[0013]B、将酶解后的待测样品溶液直接进样至高效液相色谱仪中，采用CS
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C18色谱柱，以pH值为3.5～6.0的缓冲盐溶液与乙腈作为流动相进行洗脱，检测双胍类防腐剂含量。
[0014]作为优选方案，所述双胍类防腐剂为聚六亚甲基双胍或其盐。
[0015]作为优选方案，步骤A中，所述酶解的条件为：在40℃下酶解4
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6小时。
[0016]作为优选方案，步骤B中，所述缓冲盐溶液的pH值为4.0～4.5。
[0017]作为优选方案，所述缓冲盐溶液选自磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、醋酸钠及其水合物、甲酸铵、乙酸铵中的至少一种。
[0018]作为优选方案，步骤B中，所述pH值为3.5～6.0的缓冲盐溶液与乙腈的体积比为90：10～84：16。更优选该体积比为88:12。
[0019]作为优选方案，所述检测方法中，与待测样品溶液直接接触的容器均为塑料制品，优选地均为PP。在一种具体实施方式中，与待测样品溶液直接接触的容器包括容量瓶。
[0020]作为优选方案，步骤B中，所述色谱条件还包括：
[0021]流动相的流速为0.5～1.5mL/min；
[0022]柱温为25～35℃；
[0023]运行时间为20min；
[0024]进样量为90～110μL。
[0025]作为进一步优选方案，所述色谱条件还包括：
[0026]流动相的流速为1mL/min；
[0027]柱温为30℃；
[0028]运行时间为20min；
[0029]进样量为100μL。
[0030]作为优选方案，步骤B中，所述检测采用的检测器为紫外检测器(VWD)。
[0031]与现有技术相比，本专利技术积极效果在于：
[0032]1)本专利技术基于隐形眼镜护理液中含有透明质酸钠，会对微量双胍类防腐剂的检测
造成影响，因此通过将待测溶液先加入透明质酸酸钠酶进行酶解后，再采用高效液相色谱对双胍类防腐剂进行检测，从而避免了透明质酸钠对检测结果的干扰(透明质酸钠高粘度对色谱柱和高效液相色谱仪造成不可逆的损坏)；且在进行高效液相色谱检测中，通过特定采用CS
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C18色谱柱、乙腈和pH值为3.0～6.0的缓冲盐溶液组成的流动相，有效避免了由于加入透明质酸钠酶而出现的杂质峰对检测结果的影响，进而实现了隐形眼镜护理液中微量双胍类防腐剂的准确检测。
[0033]2)本专利技术微量双胍类防腐剂的检测方法具有灵敏度高、线性良好，回收率高，分析时间短，所用耗材常规易得，经济高效的优点。
附图说明
[0034]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
[0035]图1显示根据实施例1方法得到的聚六亚甲基双胍线性方程；
[0036]图2显示根据实施例1方法测定空白溶液的高效液相色谱图；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、向待测样品溶液加入透明质酸钠酶进行酶解；B、将酶解后的待测样品溶液直接进样至高效液相色谱仪中，采用CS
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C18色谱柱，以pH值为3.5～6.0的缓冲盐溶液与乙腈作为流动相进行洗脱，检测双胍类防腐剂含量。2.根据权利要求1所述的含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，其特征在于，所述双胍类防腐剂为聚六亚甲基双胍或其盐。3.根据权利要求1所述的含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，其特征在于，步骤A中，所述酶解的条件为：在40℃下酶解4
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6小时。4.根据权利要求1所述的含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，其特征在于，步骤B中，所述缓冲盐溶液的pH值为4.0～4.5。5.根据权利要求1或4所述的含透明质酸钠的眼用护理液中的微量双胍类防腐剂的检测方法，其特征在于，所述缓冲盐溶液选自磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、醋酸钠及其水合物、甲酸铵、乙酸铵中的至少一种。6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐敏，朱新宇，张柳青，顾鹏鹏，
申请(专利权)人：珠海溪谷医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：