高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用技术

本发明专利技术涉及高通量测序技术领域，尤其是涉及高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用。(1)本发明专利技术能够通过一步多重PCR和一步产物磁珠纯化步骤即可完成文库制备，大大缩短了高通量测序文库的操作步骤和实验时间。由于不需要使用更多的PCR和纯化试剂，可以更大地降低实验成本。在减少PCR和磁珠纯化步骤的同时，降低了实验过程中样本多次加样和多次纯化带来的气溶胶污染，可以提高检测结果的准确性。(2)本发明专利技术含有双端标签序列，可以比只有单端标签序列的文库进行更严格的数据拆分质控，从而能降低拆分样本的数据污染，提高数据质控的准确性。(3)本发明专利技术制备的文库含有5

【技术实现步骤摘要】
高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用


[0001]本专利技术涉及高通量测序
，尤其是涉及高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用。

技术介绍

[0002]高通量测序(Next Generation Sequencing,NGS)技术由于可以对样本进行高通量、并行大规模测序，相比传统的一代测序、qPCR等技术，可以同时对更多基因组区域进行研究，且灵敏度更高、成本更低。扩增子测序(Amplicon Sequencing)方法是测序文库制备的一种，相比常规的杂交捕获文库则不需要经过基因组片段化、末端修复、3
’
加A尾、连接接头、探针杂交捕获、目标区域富集和产物纯化等繁琐的过程。研究者可以通过更短的时间、更低的成本，只对需要研究的基因区域进行扩增，即可获得目标区域文库产物，进行快速的高通量测序。
[0003]杂交捕获文库制备的原理是人工设计探针(DNA探针或者RNA探针)，探针可以和目标区段部分或者全部互补。将样本和探针混合，探针会将目标区段捕获，未设计探针的区段会被洗脱丢弃，之后通过变性(一般是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.扩增子文库的制备方法，其特征在于，使用多重PCR方法对样本中的目标扩增区域进行扩增，而后仅经过一步纯化获得扩增子文库；所述多重PCR使用的引物对包括如下上游引物和下游引物：上游引物的核苷酸序列从5
’
端至3
’
端依次为：5
’‑
正向接头序列
‑
标签序列1
‑
正向测序引物序列
‑
目标片段扩增的特异性正向引物序列
‑3’
；下游引物的核苷酸序列从5
’
端至3
’
端依次为：5
’‑
反向接头序列
‑
标签序列2
‑
反向测序引物序列
‑
目标片段扩增的特异性反向引物序列
‑3’
；所述标签序列1和标签序列2为互相不同的6～10bp的核苷酸片段。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述正向接头序列如SEQ ID No：1所示；所述反向接头序列如SEQ ID No：2所示。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述正向测序引物序列如SEQ ID No：3所示；所述反向测序引物序列如SEQ ID No：4所示。4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述上游引物和/或下游引物的5
’
端具有磷酸化修饰。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述同一样本的目标扩增区域的数量≥1。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述同一样本中目标扩增区域的数量＞1，不同目标扩增区域所使用的上游引物和下游引物具有相同的标签序列组合。7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，不同样本所使用的上游引物和下游引物具有不同的标签序列组合。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述样本包括来源于全血、血浆、唾液、组织、福尔马林固定样本、石蜡包埋样本或穿刺样本中的DNA样本或RNA样本。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多重PCR反应程序依次包括：98℃下反应5min循环1次；98℃下反应10s，60℃下反应15s，72℃下反应20s，并循环30次；72℃下反应5min，循环1次；4℃下保温，循环1次；所述多重PCR反应的体系包括，PCR反应预混液、引物混合物、DNA模板和无酶水。10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述目标扩增区域来源于以下(a)或(b)：(a)肿瘤或癌症的致病基因；(b)SNP多态性相关基因；优选地，所述肿瘤包括胃肠间质瘤、脑胶质瘤或少突胶质细胞；优选地，所述癌症包括甲状腺癌、肠癌、肺癌或乳腺癌；优选地，所述SNP多态性相关基因包括化疗药物靶向基因、微卫星不稳定相关基因或遗传病相关基因。11.甲状腺癌相关基因的多重PCR引物对，其特征在于，所述多重PCR引物对应用于权利要求1～10任一项所述制备方法，用于制备甲状腺癌相关基因扩增子文库；所述多重PCR引物对靶向基因为BRAF基因和/或TERT基因；
优选地，靶向BRAF基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：5或SEQ ID No：6所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：7或SEQ ID No：8所示反向引物中至少一条；优选地，靶向TERT基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：9或SEQ ID No：10所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：11或SEQ ID No：12所示反向引物中至少一条。12.肠癌相关基因的多重PCR引物对，其特征在于，所述多重PCR引物对应用于权利要求1～10任一项所述制备方法，用于制备肠癌相关基因扩增子文库；所述多重PCR引物对靶向基因为第二外显子NRAS基因、第三外显子NRAS基因、第四外显子NRAS基因、第二外显子HRAS基因、第三外显子HRAS基因、第二外显子KRAS基因、第三外显子KRAS基因、第四外显子KRAS基因、第八外显子TP53基因、第九外显子PIK3CA基因或第二十外显子PIK3CA基因中的至少一种；优选地，靶向第二外显子NRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：13或SEQ ID No：14所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：15或SEQ ID No：16所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第三外显子NRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：17或SEQ ID No：18所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：19或SEQ ID No：20所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第四外显子NRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：21或SEQ ID No：22所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：23或SEQ ID No：24所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第二外显子HRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：25或SEQ ID No：26所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：27或SEQ ID No：28所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第三外显子HRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：29或SEQ ID No：30所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：31或SEQ ID No：32所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第二外显子KRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：33或SEQ ID No：34所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：35或SEQ ID No：36所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第三外显子KRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：37或SEQ ID No：38所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：39或SEQ ID No：40所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第四外显子KRAS基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：41或SEQ ID No：42所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：43或SEQ ID No：44所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第八外显子TP53基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：45或SEQ ID No：46所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：47或SEQ ID No：48所示反向引物中至少一条；
优选地，靶向第九外显子PIK3CA基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：49或SEQ ID No：50所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：51或SEQ ID No：52所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第二十外显子PIK3CA基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：53或SEQ ID No：54所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：55或SEQ ID No：56所示反向引物中至少一条。13.肺癌相关基因的多重PCR引物对，其特征在于，所述多重PCR引物对应用于权利要求1～10任一项所述制备方法，用于制备肺癌相关基因扩增子文库；所述多重PCR引物对靶向基因为第二十外显子HER2基因、第十八外显子EGFR基因、第十九外显子EGFR基因、第二十外显子EGFR基因或第二十一外显子EGFR基因中的至少一种；优选地，靶向第二十外显子HER2基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：57或SEQ ID No：58所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：59或SEQ ID No：60所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第十八外显子EGFR基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：61或SEQ ID No：62所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：63或SEQ ID No：64所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第十九外显子EGFR基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：65或SEQ ID No：66所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：67或SEQ ID No：68所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第二十外显子EGFR基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：69或SEQ ID No：70所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：71或SEQ ID No：72所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第二十一外显子EGFR基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：73或SEQ ID No：74所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：75或SEQ ID No：76所示反向引物中至少一条。14.胃肠间质瘤相关基因的多重PCR引物对，其特征在于，所述多重PCR引物对应用于权利要求1～10任一项所述制备方法，用于制备胃肠间质瘤相关基因扩增子文库；所述多重PCR引物对靶向基因为第十二外显子PDGFRA基因、第十八外显子PDGFRA基因、第九外显子KIT基因、第十一外显子KIT基因、第十三外显子KIT基因、第十四外显子KIT基因、第十七外显子KIT基因或第十八外显子KIT基因中的至少一种；优选地，靶向第十二外显子PDGFRA基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：77或SEQ ID No：78所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：79或SEQ ID No：80所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第十八外显子PDGFRA基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：81或SEQ ID No：82所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：83或SEQ ID No：84所示反向引物中至少一条；优选地，靶向第九外显子KIT基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：85或SEQ ID No：86所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：87或SEQ ID No：88所示反向引物中至少一条；
IDNo：182所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：183或SEQ ID No：184所示反向引物中至少一条；优选地，靶向rs2228001的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：185或SEQ IDNo：186所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：187或SEQ ID No：188所示反向引物中至少一条；优选地，靶向rs924607的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：189或SEQ ID No：190所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：191或SEQ ID No：192所示反向引物中至少一条；优选地，靶向rs1142345的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：193或SEQ ID No：194所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：195或SEQ ID No：196所示反向引物中至少一条；优选地，靶向rs4880的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：197或SEQ ID No：198所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：199或SEQ ID No：200所示反向引物中至少一条；优选地，靶向rs1045642的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：201或SEQ IDNo：202所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：203或SEQ ID No：204所示反向引物中至少一条。17.微卫星不稳定相关基因的多重PCR引物对，其特征在于，所述多重PCR引物对应用于权利要求1～10任一项所述制备方法，用于制备微卫星不稳定相关基因扩增子文库；所述多重PCR引物对靶向基因包括ACVR2A基因、RBM14
‑
RBM4基因、MRE11基因、PPP1CC基因、TAOK3基因、UBAC2基因、BTBD7基因、RYR3基因、IFT140基因、SULF2基因、DIDO1基因、PRR5
‑
ARHGAP8基因、EIF4E3基因或SEC31A基因中的至少一种；优选地，靶向ACVR2A基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：205或SEQ ID No：206所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：207或SEQ ID No：208所示反向引物中至少一条；优选地，靶向RBM14
‑
RBM4基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：209或SEQ ID No：210所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：211或SEQ ID No：212所示反向引物中至少一条；优选地，靶向MRE11基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：213或SEQ IDNo：214所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：215或SEQ ID No：216所示反向引物中至少一条；优选地，靶向PPP1CC基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：217或SEQ IDNo：218所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：219或SEQ ID No：220所示反向引物中至少一条；优选地，靶向TAOK3基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：221或SEQ IDNo：222所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：223或SEQ ID No：224所示反向引物中至少一条；优选地，靶向UBAC2基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：225或SEQ IDNo：226所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：227或SEQ ID No：228所示
反向引物中至少一条；优选地，靶向BTBD7基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：229或SEQ IDNo：230所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：231或SEQ ID No：232所示反向引物中至少一条；优选地，靶向RYR3基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：233或SEQ IDNo：234所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：235或SEQ ID No：236所示反向引物中至少一条；优选地，靶向IFT140基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：237或SEQ IDNo：238所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：239或SEQ ID No：240所示反向引物中至少一条；优选地，靶向SULF2基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：241或SEQ IDNo：242所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：243或SEQ ID No：244所示反向引物中至少一条；优选地，靶向DIDO1基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：245或SEQ IDNo：246所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：247或SEQ ID No：248所示反向引物中至少一条；优选地，靶向PRR5
‑
ARHGAP8基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：249或SEQ ID No：250所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：251或SEQ ID No：252所示反向引物中至少一条；优选地，靶向EIF4E3基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：253或SEQ IDNo：254所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：255或SEQ ID No：256所示反向引物中至少一条；优选地，靶向SEC31A基因的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ ID No：257或SEQ IDNo：258所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：259或SEQ ID No：260所示反向引物中至少一条。18.乳腺癌相关基因的多重PCR引物对，其特征在于，所述多重PCR引物对应用于权利要求1～10任一项所述制备方法，用于制备乳腺癌相关基因扩增子文库；所述多重PCR引物对靶向基因包括BRCA2基因和/或BRCA1基因；优选地，所述BRCA2基因的靶点包括以下(a01)～(a37)中至少一个：(a01)chr13:32315492～32315690，(a02)chr13:32319114～32319288，(a03)chr13:32324870～32325091，(a04)chr13:32325073～32325283，(a05)chr13:32326128～32326359，(a06)chr13:32329362～32329550，(a07)chr13:32332313～32332491，(a08)chr13:32332595～32332832，(a09)chr13:32332946～32333135，(a10)chr13:32333343～32333568，(a11)chr13:32336489～32336663，(a12)chr13:32336794～32336998，(a13)chr13:32337163～32337342，(a14)chr13:32337504～32337684，(a15)chr13:32337823～32338008，(a16)chr13:32338254～32338485，(a17)chr13:32338520～32338728，(a18)chr13:32338881～32339058，(a19)chr13:32339292～32339472，(a20)chr13:32339658～32339834，
(a21)chr13:32340028～32340214，(a22)chr13:32340340～32340557，(a23)chr13:32341059～32341234，(a24)chr13:32346698～32346897，(a25)chr13:32354979～32355184，(a26)chr13:32357741～32357916，(a27)chr13:32362601～32362785，(a28)chr13:32363332～32363519，(a29)chr13:32370472～32370648，(a30)chr13:32376576～32376773，(a31)chr13:32379406～32379648，(a32)chr13:32380048～32380237，(a33)chr13:32394788～32394968，(a34)chr13:32398530～32398709，(a35)chr13:32398909～32399133，(a36)chr13:32399241～32399447，(a37)chr13:32399445～32399677；优选地，所述BRCA1基因的靶点包括以下(b01)～(b38)中至少一个：(b01)chr17:43044256～43044522，(b02)chr17:43044697～43044871，(b03)chr17:43044897～43045155，(b04)chr17:43045323～43045498，(b05)chr17:43045611～43045802，(b06)chr17:43047558～43047733，(b07)chr17:43050907～43051152，(b08)chr17:43057004～43057212，(b09)chr17:43063247～43063507，(b10)chr17:43063838～43064012，(b11)chr17:43067563～43067810，(b12)chr17:43070673～43070947，(b13)chr17:43071060～43071243，(b14)chr17:43074383～43074557，(b15)chr17:43076370～43076561，(b16)chr17:43082283～43082458，(b17)chr17:43086844～43087058，(b18)chr17:43090892～43091125，(b19)chr17:43091359～43091598，(b20)chr17:43091774～43091997，(b21)chr17:43092090～43092274，(b22)chr17:43092403～43092591，(b23)chr17:43092907～43093114，(b24)chr17:43093254～43093452，(b25)chr17:43093536～43093797，(b26)chr17:43093913～43094148，(b27)chr17:43094326～43094508，(b28)chr17:43094594～43094772，(b29)chr17:43094930～43095107，(b30)chr17:43095871～43096101，(b31)chr17:43097229～43097414，(b32)chr17:43099761～43099943，(b33)chr17:43104129～43104342，(b34)chr17:43104812～43104994，(b35)chr17:43106416～43106644，(b36)chr17:43115895～43116131，(b37)chr17:43124952～43125208，(b38)chr17:43125274+43125520；优选地，靶向(a01)chr13:32315492～32315690的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：261或SEQ ID No：262所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：263或SEQ IDNo：264所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a02)chr13:32319114～32319288的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：265或SEQ ID No：266所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：267或SEQ IDNo：268所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a03)chr13:32324870～32325091的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：269或SEQ ID No：270所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：271或SEQ IDNo：272所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a04)chr13:32325073～32325283的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如
SEQ IDNo：273或SEQ ID No：274所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：275或SEQ IDNo：276所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a05)chr13:32326128～32326359的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：277或SEQ ID No：278所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：279或SEQ IDNo：280所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a06)chr13:32329362～32329550的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：281或SEQ ID No：282所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：283或SEQ IDNo：284所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a07)chr13:32332313～32332491的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：285或SEQ ID No：286所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：287或SEQ IDNo：288所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a08)chr13:32332595～32332832的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：289或SEQ ID No：290所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：291或SEQ IDNo：292所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a09)chr13:32332946～32333135的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：293或SEQ ID No：294所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：295或SEQ IDNo：296所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a10)chr13:32333343～32333568的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：297或SEQ ID No：298所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：299或SEQ IDNo：300所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a11)chr13:32336489～32336663的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：301或SEQ ID No：302所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：303或SEQ IDNo：304所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a12)chr13:32336794～32336998的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：305或SEQ ID No：306所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：307或SEQ IDNo：308所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a13)chr13:32337163～32337342的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：309或SEQ ID No：310所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：311或SEQ IDNo：312所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a14)chr13:32337504～32337684的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：313或SEQ ID No：314所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：315或SEQ IDNo：316所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a15)chr13:32337823～32338008的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：317或SEQ ID No：318所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：319或SEQ IDNo：320所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a16)chr13:32338254～32338485的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：321或SEQ ID No：322所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：323或SEQ IDNo：324所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a17)chr13:32338520～32338728的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如
SEQ IDNo：325或SEQ ID No：326所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：327或SEQ IDNo：328所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a18)chr13:32338881～32339058的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：329或SEQ ID No：330所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：331或SEQ IDNo：332所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a19)chr13:32339292～32339472的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：333或SEQ ID No：334所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：335或SEQ IDNo：336所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a20)chr13:32339658～32339834的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：337或SEQ ID No：338所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：339或SEQ IDNo：340所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a21)chr13:32340028～32340214的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：341或SEQ ID No：342所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：343或SEQ IDNo：344所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a22)chr13:32340340～32340557的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：345或SEQ ID No：346所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：347或SEQ IDNo：348所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a23)chr13:32341059～32341234的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：349或SEQ ID No：350所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：351或SEQ IDNo：352所示反向引物中至少一条；优选地，靶向(a24)chr13:32346698～32346897的多重PCR引物对包括，核苷酸序列如SEQ IDNo：353或SEQ ID No：354所示正向引物中至少一条，和核苷酸序列如SEQ ID No：355或SEQ IDNo：356所示反向引...

【专利技术属性】
技术研发人员：相学平，范贤，杨金龙，杜江丽，郑云飞，张文静，牛红梅，王诺，
申请(专利权)人：杭州布平医学检验实验室有限公司，
类型：发明
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