【技术实现步骤摘要】
基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白纯化装置与方法
[0001]本专利技术涉及生物化学分析
，特别是涉及一种基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白纯化装置与方法。
技术介绍
[0002]蛋白质作为一类重要的生物大分子，是生命活动的主要承担者，在体内各个生命活动如营养代谢、酶催化、激素、免疫、遗传、变异等过程中均离不开蛋白质功能的发挥。鉴于蛋白质生物体内的重要作用，它已经成为众多领域的检测靶标。例如在体外诊断中，常见的体外诊断项目中有一半以上检测对象为蛋白质；在食品安全中，160多种食品含有可以导致过敏反应的食品过敏原，其中大于90％的过敏原都是蛋白质，根据国内食品标签标识管理规定，相应的蛋白质过敏原均应被检测并被标识；在生物医药领域，目前已经批准150多个蛋白质药物上市，400多种蛋白质药物处于临床研究阶段，3000多种处于临床前研究阶段。不论是体外诊断，还是食品安全与用药安全，这些都关乎大众健康与国计民生，相关领域蛋白质检验结果的准确可比则是保证大众健康与安全的基石。
[0003]结构上来看，蛋白质是一类由氨基...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白的纯化装置，它包括：第一六路选择阀(1)、第二六路选择阀(2)、第一四元比例阀(3)、第一泵(4)、分离柱(5)、阻尼器(6)、紫外检测器(7)、第二四元比例阀(8)、表面等离子共振光谱检测器(9)、第二泵(10)、第三泵(11)、二路选择阀(12)、收集器(13)、废液瓶(14)、六通阀(15)、控制器(16)和柱温箱(17)，第一六路选择阀(1)和第二六路选择阀(2)的出液孔分别与第一四元比例阀(3)中的一个进液孔相连，第一四元比例阀(3)的出液孔通过第一泵(4)与六通阀(15)的第一孔相连，六通阀(15)的第一孔依次与第二孔和分离柱(5)的进液口相连，样品通过进样针进入六通阀(15)的第四孔，第四孔依次与第三孔和装有定量环的第六孔相连，第六孔和第五孔相连，第五孔与废液瓶(14)相连，多余的样品经过第五孔进入废液瓶(14)，六通阀(15)的第一孔、第二孔、第三孔、第四孔、第五孔和第六孔在六通阀(15)的周边依次布置，分离柱(5)的出液口分成第一路和第二路，第一路依次与紫外检测器(7)和二路选择阀(12)相连，二路选择阀(12)的两个出液孔分别与收集器(13)和废液瓶(14)相连，第二路依次与阻尼器(6)和第二四元比例阀(8)中的一个进液孔相连，第二四元比例阀(8)中的出液孔与表面等离子共振光谱检测器(9)进样端相连，第二四元比例阀(8)中的另外两个进液孔分别与第二泵(10)和第三泵(11)相连，柱温箱(17)装在分离柱(5)的外面，用于保持分离柱子(5)的温度，控制器(16)分别与第一六路选择阀(1)、第二六路选择阀(2)、第一四元比例阀(3)、第一泵(4)、紫外检测器(7)、第二四元比例阀(8)、表面等离子共振光谱检测器(9)、第二泵(10)、第三泵(11)、二路选择阀(12)和六通阀(15)相连，控制器(16)控制着待分离纯化的蛋白质样品溶液的分离或纯化过程。2.如权利要求1所述的基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白的纯化装置，其特征在于：所述二路选择阀(12)包括：一个进液孔和两个出液孔，其中上述进液孔与紫外检测器(7)相连，上述两个出液孔分别选择性地与收集器(13)和废液瓶(14)之一相连。3.如权利要求2所述的基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白的纯化装置，其特征在于：所述第一六路选择阀(1)和第二六路选择阀(2)包括：一个出液孔和六个进液孔，出液孔分别选择性地与六个进液孔之一相通；所述第一四元比例阀(3)和第二四元比例阀(8)包括：一个出液孔和四个进液孔，出液孔分别选择性地与四个进液孔之一相通。4.如权利要求3所述的基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白的纯化装置，其特征在于：所述六通阀(15)包括：六个孔，第一孔与第一泵(4)相连，第二孔与分离柱(5)相连，第三孔与定量环相连，第四孔与进样针相连，第五孔与废液瓶(14)相连，第六孔与定量环相通，在流动相A、B、C和D向分离柱(5)进料时，第一孔与第二孔相连，第二孔与第三孔相连，第四孔与第五孔相连，流动相A、B、C和D送入分离柱(5)中，待分离纯化的蛋白质样品溶液进入定量环中；六通阀(15)旋转60
°
后，第一孔与第六孔相连，第二孔与第三孔相连，第四孔与第五孔相连，将待分离纯化的蛋白质样品溶液送入分离柱(5)；所述第一泵(4)为高压泵或蠕动泵；第二泵(10)和第三泵(11)为蠕动泵。5.如权利要求4所述的基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白的纯化装置，其特征在于：所述分离柱(5)为纯化柱或色谱柱；所述收集器(13)为盘式旋转收集器，样品管放置在转盘上，将目标活性蛋白被收集到样品管中。6.用权利要求5所述的基于表面等离子共振的免疫亲和活性蛋白的纯化装置来收集蛋白的方法，其特征在于：包括：
(一)、样品溶液的准备将待分离纯化的蛋白质样品溶液采用紫外分光光度法粗测总蛋白浓度，根据总蛋白浓度进行稀释或离心浓缩，将待分离纯化的蛋白质样品溶液溶解在磷酸盐、醋酸盐缓冲溶液或水中，使其总蛋白浓度为(1～5)mg/mL，其中有机溶剂含量不高于5％；(二)、抗体偶联首先将目标蛋白的单克隆抗体偶联到表面等离子共振光谱检测器(9)的检测芯片上，上述目标蛋白的单克隆抗体与目标蛋白的亲和力不高于10
‑5M
‑1，先用pH为(4.0～5.5)的10mM醋酸钠缓冲溶液将目标蛋白的单克隆抗体稀释至(10～50)μg/mL后备用；检测芯片为购置的商品化芯片，检测芯片的金箔表面已经固定有羧甲基葡聚糖，上述羧甲基葡聚糖经过NHS/EDC活化并催化发生酯化反应后，与上述目标蛋白的单克隆抗体上的氨基发生共价结合，从而保证目标蛋白的单克隆抗体偶联到金箔表面；(三)、再生溶液的筛选为了使检测芯片多次重复使用，在用表面等离子共振光谱检测器(9)检测目标蛋白后，目标蛋白附着在检测芯片表面上，需用再生溶液对检测芯片进行清洗，选择至少三种浓度的再生溶液，再生...
【专利技术属性】
技术研发人员：武利庆，罗世闻，张宁，刘亚辉，杨彬，翟睿，王晶，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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