包涵体蛋白的复性方法技术

本发明专利技术公开了包涵体蛋白的复性方法，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术包括如下步骤：S1：获取包涵体，包涵体洗涤、溶解、过滤，获得含有包涵体蛋白的变性液；S2：蛋白纯化；S3：蛋白浓缩；S4：透析；S5：分子筛柱对透析液洗脱纯化，得到复性蛋白。解决现有的包涵体复性方法操作繁琐，易形成无活性聚集体的问题。本发明专利技术公开的复性方法针对二硫键小于等于2个的蛋白进行复性，具有复性效率高、适用于大多数的包涵体蛋白的优点。白的优点。白的优点。

【技术实现步骤摘要】
包涵体蛋白的复性方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及包涵体蛋白的复性方法。

技术介绍

[0002]基因工程技术发展至今，外源蛋白表达系统已从大肠杆菌原核表达系统扩大到酵母、昆虫细胞、植物、哺乳动物细胞等真核表达系统。相比其它的表达系统，大肠杆菌表达系统不仅遗传背景透彻、容易培养、基因工程操作简单且效率高、繁殖速度快、成本低，而且外源蛋白表达水平更高；基于以上特点，大肠杆菌仍然是目前应用最广泛的重组蛋白表达系統。
[0003]包涵体是外源基因在宿主细胞尤其是原核细胞(如大肠杆菌)中高效表达时，形成的一种由膜包裹的或无膜裸露的高密度、不溶性的蛋白质颗粒，明显区别于细胞质中的其他组分。包涵体含有90％上的重组蛋白，还有部分的外膜蛋白、脂质体、RNA聚合酶、核糖体元件和脂多糖等；包涵体可改变大肠杆菌的光散射性质，在光学显微镜下观察可见，多为圆形、卵圆形或不定形等。
[0004]包涵体的形成机制仍然不是很清晰，总体来说，主要是由于异源蛋白的高速表达、蛋白合成时的环境、缺少分子伴侣以及蛋白肽链的氨基酸组成等原因所致。异本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.包涵体蛋白的复性方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：制备含有包涵体蛋白的变性液；S2：Ni柱孵育后的变性液倒入层析柱，依次缓冲液C冲洗、梯度洗脱，得到纯化后的包涵体溶液；S3：包涵体溶液加入浓缩管后，离心，浓缩管置于氢氧化钠溶液中浸泡，得到包涵体浓缩液；S4：将包涵体浓缩液装入含有缓冲液E的透析袋中透析，得到透析液；S5：利用分子筛柱对透析液洗脱纯化后、处理后得到复性蛋白。2.根据权利要求1所述的包涵体蛋白的复性方法,其特征在于，S1中具体包括如下步骤：S11：培养宿主细胞，诱导表达后收集菌体，菌体破碎、收集沉淀；S12：将沉淀用缓冲液A重悬，4℃、12000rpm离心10min，收集沉淀；S13：重复S12；S14：采用含1％Triton X100、2
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6M尿素的重悬液重悬，洗涤沉淀，静置10min,4℃、12000rpm离心10min；S15：用缓冲液B重悬，室温溶解12
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16h，过滤后获得含有包涵体蛋白的变性液。3.根据权利要求1所述的包涵体蛋白的复性方法,其特征在于，层析柱倒入Ni柱孵育后的变性液之前需要进行层析柱预处理，层析柱预处理的具体步骤为：层析柱空柱管装入Ni
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NTA，依次用无内毒素水清洗5CV、缓冲液C清洗5CV。4.根据权利要求1所述的包涵体蛋白的复性方法,其特征在于，梯度洗脱程序为：20mM咪唑溶液洗脱10CV、50mM咪唑溶液洗脱10CV、100mM咪唑溶液洗脱10CV、200mM咪唑溶液洗脱10CV、500mM咪唑溶液洗脱10CV。5.根据权利要求1所述的包涵体蛋白的复性方法,其特征在于，浓缩管倒入包涵体溶液之前需要进行浓缩管预处理，浓缩管预处理的具体步骤为：B1：浓缩管中倒入无内毒素水，4℃、5000rpm离心5
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【专利技术属性】
技术研发人员：修朝阳，张强，陈英华，高强，郑保富，
申请(专利权)人：合肥欧创基因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：