一种纯化非对称融合蛋白的方法技术

本发明专利技术提供了一种纯化非对称融合蛋白的方法，该方法包括平衡、上样、再平衡、淋洗、洗脱等步骤。本发明专利技术通过改进纯化条件，对样品pH、样品电导、淋洗液、洗脱液等进行考量和筛选，得到了适用于非对称融合蛋白的纯化工艺，工艺过程中各成分分离度好，去除杂质的效果较好，最终得到了纯度高、回收率高、稳定性好的非对称融合蛋白，有利于提高产品的质量控制水平及药物稳定性。稳定性。稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种纯化非对称融合蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种有效提纯非对称融合蛋白，减少杂质的纯化工艺。

技术介绍

[0002]细胞因子是小分子的蛋白质或糖蛋白，在特定条件下具有识别并杀死肿瘤细胞的能力而制备成药。但是细胞因子的药效往往与其剂量成比例，且分子量小，半衰期短，需要高剂量频繁地给药以维持一定的血药浓度才能确保抗肿瘤药效。但患者容易发生剂量限制性毒性和全身毒性。为降低毒性，人们研发出了抗体
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细胞因子融合蛋白。
[0003]抗体
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细胞因子融合蛋白是指由靶向性重组抗体或抗体片段与细胞因子组成的融合蛋白。理论上，抗体
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细胞因子融合蛋白与细胞因子相比：a.携带等量细胞因子的抗体
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细胞因子融合蛋白分子量更大，可以提高体内稳定性，延长半衰期，降低血清清除率；b.减少给药次数，减少DLT和全身毒性；c.细胞因子富集在病变部位提高了病变部位的药物浓度，更有效的发挥细胞因子的免疫调节作用；d.增加病变部位的免疫原性，与免疫抑制剂联用，增加免疫抑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化非对称融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)平衡：在层析柱中加入不小于1个柱体积的平衡缓冲液，所述平衡缓冲液含40
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60mM的钠盐溶液；(2)上样；(3)再平衡：在层析柱中加入不小于1个柱体积的平衡缓冲液，所述平衡缓冲液含40
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60mM的钠盐溶液；(4)淋洗：在层析柱中加入2
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12个柱体积的淋洗缓冲液，所述淋洗缓冲液含170
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300mM的钠盐溶液；(5)洗脱：在所述层析柱中加入2
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12个柱体积的洗脱缓冲液，所述洗脱缓冲液含310
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400mM的钠盐溶液；其中，平衡缓冲液、淋洗缓冲液和洗脱缓冲液的pH值为4.5
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5.5。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述(4)淋洗步骤中，在所述层析柱中加入2
‑
10个柱体积含175
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250mM钠盐的淋洗缓冲液；和/或，所述(5)洗脱步骤中，在所述层析柱中加入2
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10个柱体积含310
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370mM钠盐的洗脱缓冲液。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的方法，其特征在于，所述层析柱的填料选自Capto S ImpAct、Fractogel COO(M)、Nuvia HR
‑
S、Diamond SP Mustang中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述平衡缓冲液、淋洗缓冲液和洗脱缓冲液的缓冲体系中的钠盐溶液选自乙酸钠
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乙酸、氯化钠、柠檬酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠中的一种或多种。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴崇兵，顾海涛，姜晓玲，殷刘松，
申请(专利权)人：盛禾中国生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：