一种美法仑杂质D的纯化方法技术

本发明专利技术公开一种美法仑杂质D的纯化方法，包括如下步骤：配制流动相A、流动相B、稀释剂、样品液；运用制备型高效液相色谱对样品液进行纯化，条件如下：流速：10mL/min～40mL/min；柱温：10C～30℃；进样量:1～5ml；检测波长：200nm～220nm；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；通过调节梯度洗脱中有机相的比例，进行梯度洗脱；取样品溶液，注入制备高效液相色谱仪中，然后按照面积归一法，以样品色谱图中各色谱峰峰面积百分比进行计算。本发明专利技术的梯度洗脱中有机相含量对美法仑杂质D的纯化有很大的影响。通过不同的比例组成进行梯度洗脱，可以达到美法仑杂质D与其他杂质的有效分离。杂质D与其他杂质的有效分离。杂质D与其他杂质的有效分离。

【技术实现步骤摘要】
一种美法仑杂质D的纯化方法


[0001]本专利技术涉及药物纯化
，特别涉及一种美法仑杂质D的纯化方法。

技术介绍

[0002]美法仑(Melphalan)是氮芥类化疗药物，别名:米尔法兰、L
‑
溶肉瘤素。是苯丙氨酸氮芥的左旋体，是一种烷化剂，由于其结构的物异性，使其可进入肿瘤细胞内而发生作用，导致细胞死亡，从而起到抗肿瘤作用。与其他烷化剂相同，与DNA及RNA发生交叉联结，导致肿瘤细胞死亡，为细胞周期非特异性药物。谷胱甘肽水平提高，药物运转减慢，DNA修复增强，可导致耐药性增加。可用与治疗多种肿瘤疾病，包括多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、慢性白血病以及甲状腺癌等。还可动脉灌注用于治疗恶性黑色素瘤、骨肉瘤及软组织肉瘤等肢体恶性肿瘤。
[0003]而药物中含有的杂质是影响药物纯度的主要因素，如药物中含有超过限量的杂质，就有可能使理化常数变动，外观性状产生变异，并影响药物的稳定性；杂质增多也必然使药物的含量偏低或活性降低，毒副作用显著增加。因此，杂质对照品的纯度对药物的质量控制起到关键性的作用。所以对于美法仑的原料和制剂的质量控制，必须有质量合格的杂质对照品。
[0004]目前，国内外研究多集中在临床应用和衍生物的合成上，对美法仑的杂质研究较少。本专利技术涉及的(S)
‑2‑
氨基
‑3‑
(4
‑
((2
‑
氯乙基)(2
‑
羟乙基)氨基)苯基)丙酸即美法仑杂质D作为美法仑的一个重要杂质对照品之一，目前无法检索到美法仑杂质D的相关纯化方法。而常规有机合成制得的美法仑杂质D粗品可能会有较高的初始纯度，但是该粗品含有大量的无机盐混杂，该样品由于含量虚高会产生较大的校正因子偏差，同时受到盐潮解吸收水汽的影响，该样品极易降解(式1)。
[0005][0006]如现合成的样品现制现测时检测纯度为97.8％。放置约15min后纯度下降至97.1％并观察到保留时间为4.2min的杂质峰面积增加约1％。而进一步放置3h后纯度明显下降，检测纯度值为91％，6h后纯度下降至88％，4.2min的降解产物则对应增加(如附图2)。甚至进一步延长实验时间至72小时后，溶液中的美法仑EP杂质D几乎完全分解，4.2min左右的降解杂质成为主产物。
[0007]随着美法仑杂质D放置时间的延长，主峰纯度持续降低，这极大限制了该样品的纯化和使用，同时对产品的纯化提出了较高的要求。本专利技术提供了一种针对美法仑杂质D的纯化的简单易行的方法。

技术实现思路

[0008]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种美法仑杂质D的纯化方法。本专利技术提供一种美法仑杂质D的制备纯化路线，为美法仑原料药及其制剂的杂质分析及研究提供了便利，为美法仑的生产和用药安全提供检测方法及判定依据
[0009]为了实现上述目的，本专利技术提供一种美法仑杂质D的纯化方法，包括如下步骤：
[0010]步骤S1：配制流动相A、流动相B、稀释剂、样品液；
[0011]步骤S2：运用制备型高效液相色谱对样品液进行纯化，
[0012]条件如下：流速：10mL/min～40mL/min；柱温：10C～30℃；进样量:1～5ml；检测波长：200nm～220nm；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；
[0013]步骤S3：通过调节梯度洗脱中有机相的比例，进行梯度洗脱：
[0014]步骤S4：取样品溶液，注入制备高效液相色谱仪中，然后按照面积归一法，以样品色谱图中各色谱峰峰面积百分比进行计算。
[0015]优选的，所述步骤S3中洗脱梯度为：
[0016]在0到6min阶段，流动相A:流动相B为95:5～80:20；
[0017]在6到12min阶段，流动相A:流动相B为80:20～70:30；
[0018]在12min到18min阶段，流动相A:流动相B为70:30～60:40；
[0019]在18min到24min阶段，流动相A:流动相B为60:40～60:40；
[0020]在24min到26min阶段，流动相A:流动相B为60:40～5:95；
[0021]在26min到30min阶段，流动相A:流动相B为5:95～5:95。优选的，所述步骤S1中的流动相A选自经0.22um微孔过滤膜过滤的超纯水。
[0022]优选的，所述步骤S1中的流动相B选自色谱级乙睛。
[0023]优选的，所述步骤S1中的样品液的配制：称取美法仑杂质D，加稀释剂超声溶解至澄清溶液。
[0024]优选的，所述步骤S1中的稀释剂选自超纯水。
[0025]优选的，所述步骤S2中的流速：25ml/min；柱温：25℃；检测波长：210nm。
[0026]采用本专利技术的技术方案，具有以下有益效果：
[0027]在本技术专利技术中，梯度洗脱中有机相含量对美法仑杂质D的纯化有很大的影响。通过不同的比例组成进行梯度洗脱，可以达到美法仑杂质D与其他杂质的有效分离。最后确认梯度洗脱为在0到6min，流动相A:B为95:5～80:20；在6到12min，流动相A:B为80:20～70:30；在12min到18min，流动相A:B为70:30～60:40；在18min到24min，流动相A:B为60:40～60:40；在24min到26min，流动相A:B为60:40～5:95；在26min到30min，流动相A:B为5:95～5:95此梯度条件下进行洗脱，美法仑杂质D能分离出更多的杂质，仍能保持较好的分离度，分离度均大于1.5，符合要求。并且该梯度条件下，将单次纯化量由10mg/ml增加至100mg/ml，同样能得纯度≥95％的美法仑杂质D产品，样品峰与其他杂质分离度为1.61，符合要求，该方法操作简单，成本低。相较于目前国内外对美法仑杂质D纯化研究的空缺，本专利技术能为
美法仑杂质D对照品的产品质量提供良好的方法。进而有效控制美法仑产品质量，为美法仑原料药及其制剂的杂质分析及研究提供便利，为美法仑的生产和要用安全提供检测方法和判断依据。
附图说明
[0028]图1为本专利技术单次进样100mg/ml的制备纯化液相图。
[0029]图2为现制样品初始检测与放置0min、15min、3h、6h后的色谱纯度图。
具体实施方式
[0030]以下结合附图和具体实施例，对本专利技术进一步说明。
[0031]实施例1：
[0032]美法仑杂质D的纯化方法：
[0033]1)色谱条件：
[0034]仪器：制备高效液相色谱仪；
[0035]色谱柱：MorphlingTMAQ
‑
C18，250*30mm，5um；
[0036]柱温：25℃；
[0037]流速：25ml/min；
[0038]检测波长：210nm；
[0039]流动相A：经0.22um微孔过滤膜过滤的超纯水；
[0040本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种美法仑杂质D的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1：配制流动相A、流动相B、稀释剂、样品液；步骤S2：运用制备型高效液相色谱对样品液进行纯化，条件如下：流速：10mL/min～40mL/min；柱温：10C～30℃；进样量:1～5ml；检测波长：200nm～220nm；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；步骤S3：通过调节梯度洗脱中有机相的比例，进行梯度洗脱；步骤S4：取样品溶液，注入制备高效液相色谱仪中，然后按照面积归一法，以样品色谱图中各色谱峰峰面积百分比进行计算。2.根据权利要求1所述的美法仑杂质D的纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中的流动相A选自经0.22um微孔过滤膜过滤的超纯水。3.根据权利要求2所述的美法仑杂质D的纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中的流动相B选自色谱级乙睛。4.根据权利要求3所述的美法仑杂质D的纯化方法，其特征在于，所述步骤S1中的样品液的配制：...

【专利技术属性】
技术研发人员：李吉平，邱富强，陈斌，徐阳进，李洋，
申请(专利权)人：深圳振强生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：