一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法，其包括如下步骤：将攻击性退役雄性CD1小鼠置于双腔笼的右腔；将雄性C57BL/6小鼠放置左侧腔室中，作为CSDS小鼠；在适应环境24小时后，将左腔CD1小鼠引进右侧腔，待CD1小鼠攻击5分钟后再分隔开，每日更换CSDS小鼠，使每只CSDS小鼠每日接受不同CD1鼠的攻击，造模10天后进行咳嗽激发试验及行为学检测，验证慢性焦虑模型是否成功；确定慢性焦虑模型成功造模后，每日给予0.1M柠檬酸超声雾化2小时暴露，连续7

【技术实现步骤摘要】
一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法。

技术介绍

[0002]在临床实践中，慢性咳嗽是一种持续时间长、心理及经济负担重的疾病。许多肺内和肺外疾病都会伴随慢性咳嗽，这使诊断和治疗更具挑战性。目前普遍认为，成人任何病因的慢性咳嗽都可认为是一种咳嗽高敏状态，其特征是通常由低阈值的温度、机械及化学暴露引起的持续性咳嗽。持续性慢性咳嗽的巨大负担导致人们认识到咳嗽高敏综合征是成人的一种独特临床疾病。涉及外周和中枢神经通路的独特机制被认为在这种高敏反应中起作用，并可以推动了抑制咳嗽(镇咳)药物的发现。临床上发现慢性咳嗽咳诱导患者出现焦虑状态，而焦虑同样可以导致患者咳嗽敏感性增加，且焦虑与慢性咳嗽患者的生活质量下降和咳嗽严重程度增加相关，然而其中的病理生理及神经机制尚不明确。
[0003]现有的焦虑动物模型是通过物理性刺激(如束缚、电击或冷水游泳等)或采用社交挫败应激的方法造模。本专利技术人之前研发的小鼠咳嗽高敏模型通过使小鼠反复暴露于咳嗽刺激物(柠檬酸)环境下而成功造模，然而，由于小鼠本身在非焦虑状态下接受咳嗽刺激物暴露，导致该模型仅表现出咳嗽敏感性增高，但并无表现出焦虑样行为。为了更好地理解焦虑对咳嗽高敏影响的机制及后续药物的研发，目前亟需一种焦虑相关性咳嗽高敏的动物模型以进行相关的研究，但目前尚无该类动物模型的研发。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法，该模型能够既表现出显著的焦虑样行为，也表现出显著的咳嗽高敏感性。
[0005]为了实现以上专利技术目的，本专利技术提供了一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法，其包括如下步骤：
[0006](1)将攻击性退役雄性CD1小鼠置于双腔笼的右腔；将雄性C57BL/6小鼠放置左侧腔室中，作为慢性社交挫败应激CSDS小鼠；
[0007](2)在适应环境24小时后，将左腔CD1小鼠引进右侧腔，待CD1小鼠攻击5分钟后再分隔开，每日更换CSDS小鼠，使每只CSDS小鼠每日接受不同CD1鼠的攻击，造模10天后进行咳嗽激发试验及行为学检测，验证慢性焦虑模型是否成功；
[0008](3)确定慢性焦虑模型成功造模后，每日给予0.1M柠檬酸超声雾化2小时暴露，连续7
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10天，再进行咳嗽敏感性检测、旷场试验、高架十字迷宫试验。
[0009]优选地，所述C57BL/6小鼠为8至10周龄。
[0010]优选地，所述咳嗽激发试验包括生理盐水咳嗽激发试验、柠檬酸咳嗽激发试验、辣椒素咳嗽激发试验。
[0011]更优选地，所述柠檬酸咳嗽激发试验中，采用浓度为0.4M的柠檬酸溶液。
[0012]更优选地，所述辣椒素咳嗽激发试验中，采用浓度为0.1M的辣椒素溶液。
[0013]优选地，所述行为学检测包括旷场试验、高架十字迷宫试验。
[0014]优选地，步骤(3)中，所述咳嗽敏感性检测包括使用0.4M柠檬酸溶液、0.1M辣椒素溶液中的至少一种来检测小鼠咳嗽敏感性。
[0015]优选地，所述方法还包括获取小鼠肺泡灌洗液以评估气道炎症情况并对肺组织进行组织病理学检测以评估肺部炎症情况。
[0016]本专利技术在通过慢性社交挫败应激(CSDS)进行慢性焦虑造模，并在慢性焦虑的基础上给予咳嗽刺激物暴露，成功构建小鼠焦虑相关性咳嗽高敏模型，该模型既表现出显著的焦虑样行为，也表现出显著的咳嗽高敏感性，且其咳嗽敏感性显著高于非焦虑组，表现出了焦虑相关性的咳嗽敏感性增高。该模型与临床现象接近，可作为焦虑相关性咳嗽高敏感性病理生理学研究的良好动物模型。
[0017]与现有技术相比，本专利技术提供的焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型与临床实际具有良好的贴合性，符合临床现象，即同等咳嗽刺激物暴露下，慢性焦虑显著增加咳嗽敏感性。该模型为后续的病理生理学等基础研究提供了物质基础。
附图说明
[0018]图1示出了本专利技术的动物模型构建技术路线示意图。
[0019]图2示出了本专利技术的动物模型构建实验研究时间流程图。
[0020]图3示出了包含盐水对照组、柠檬酸对照组和焦虑实验组的动物模型构建技术路线示意图。
[0021]图4示出了柠檬酸雾化造模及咳嗽激发试验流程示意图。
[0022]图5示出了盐水对照组、柠檬酸对照组和焦虑实验组三组小鼠行为学分析结果。其中，A：从左至右依次为盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠旷场试验(OFT)轨迹图；B：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠旷场试验(OFT)统计结果(总路程)；C：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠旷场试验(OFT)统计结果(中央区域活动路程)；D：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠旷场试验(OFT)统计结果(中央区域活动时间占比)；E：从左至右依次为盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠高架十字迷宫试验(EPM)轨迹图；F：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠高架十字迷宫试验(EPM)的统计结果(小鼠在开放臂活动时间占比)；G：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(CSDS)三组小鼠高架十字迷宫试验(EPM)的统计结果(小鼠进入开放臂次数)。
[0023]图6示出了盐水对照组、柠檬酸对照组和焦虑实验组三组小鼠咳嗽敏感性检测结果。其中，A：盐水对照组(NS control)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(Anxiety model)三组小鼠在雾化暴露期间咳嗽敏感性随时间变化图，纵坐标为咳嗽次数；B
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E：分别依次为末次暴露后盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Con)、焦虑实验组(Anx)三组小鼠的自发咳嗽(B)及生理盐水(C)、0.4M柠檬酸溶液(D)、0.1M辣椒素溶液(E)诱导的咳嗽敏感性，纵坐标为咳嗽次数。
[0024]图7示出了盐水对照组、柠檬酸对照组和焦虑实验组三组小鼠肺泡灌洗液(BALF)
细胞计数及细胞分类。其中，A：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Con)、焦虑实验组(Anx)三组小鼠肺泡灌洗液细胞总数(BALFTCS)；B：盐水对照组(NS)、柠檬酸对照组(Control)、焦虑实验组(Anxietymodel)三组小鼠肺泡灌洗液细胞分类结果，纵坐标为BALF细胞比例(％)。
[0025]图8示出了盐水对照组、柠檬酸对照组和焦虑实验组三组小鼠气管病理炎症评分。其中，A：盐水对照组(NS)的气管切片(左)及方框部分的放大视图(右)；B：柠檬酸对照组(Con)的气管切片(左)及方框部分的放大视图(右)；C：焦虑实验组(Anx本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种焦虑相关性咳嗽高敏小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将攻击性退役雄性CD1小鼠置于双腔笼的右腔；将雄性C57BL/6小鼠放置左侧腔室中，作为慢性社交挫败应激CSDS小鼠；(2)在适应环境24小时后，将左腔CD1小鼠引进右侧腔，待CD1小鼠攻击5分钟后再分隔开，每日更换CSDS小鼠，使每只CSDS小鼠每日接受不同CD1鼠的攻击，造模10天后进行咳嗽激发试验及行为学检测，验证慢性焦虑模型是否成功；(3)确定慢性焦虑模型成功造模后，每日给予0.1M柠檬酸超声雾化2小时暴露，连续7
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10天，再进行咳嗽敏感性检测、旷场试验、高架十字迷宫试验。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述C57BL/6小鼠为8至10周龄。3.根据权利要求1所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖克方，林明通，黄楚琴，陈哲，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院广州呼吸中心，
类型：发明
国别省市：