一种抗RCP抗体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗RCP抗体及其制备方法，所述抗RCP抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含：由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR1，由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR2，由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR3；所述轻链可变区包含：由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR1，由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR2，由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR3。本发明专利技术提供的抗RCP抗体，具有生物学功能，可以减弱巨噬细胞吞噬功能，本发明专利技术中的RCP抗体可用于构建狼疮样小鼠。抗体可用于构建狼疮样小鼠。抗体可用于构建狼疮样小鼠。

【技术实现步骤摘要】
一种抗RCP抗体及其制备方法


[0001]本专利技术属于抗体
，具体涉及一种抗RCP抗体及其制备方法。

技术介绍

[0002]系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是以多系统及器官损伤并伴随大量自身抗体产生为特征的全身性自身免疫性疾病。本病在我国患病人数高达910万，多发于青年女性，病情进展快，如得不到控制可很快进展为多器官衰竭，5年生存率仅为73％，是危害人类生命的主要死亡疾病之一。
[0003]SLE作为自身免疫性疾病，自身抗体的研究对揭示其发病机制具有重要意义。临床研究的证据揭示，许多自身抗体的出现可早于疾病的发生，文献报道在SLE疾病的诊断之前、甚至在SLE首发症状之前5年，患者血清中即可检测出多种自身抗体，如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗Sm抗体等。至今在SLE患者中已检测到上百种自身抗体，多数自身抗体有助于疾病诊断，一些自身抗体具致病性并和狼疮肾炎相关，如抗dsDNA抗体和抗C1q抗体等。
[0004]SLE患者中细胞凋亡增多，凋亡细胞可以通过MAPK(包括JNK、p38及ERK1/2)信号通路，影响巨噬细胞的吞噬功能。正常情况下，凋亡细胞能被巨噬细胞及时清除以保持平衡。否则，积聚的凋亡细胞会引起炎症及自身免疫反应。早期凋亡细胞可表达“被清除”信号，如磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)等。当凋亡细胞清除受损时，多余的凋亡细胞会发生继发性凋亡，并且释放危险信号来损害免疫系统。这些危险信号包括了核抗原、DNA、RNA等，从而激活NFr/>‑
κB通路及炎症小体来促进炎症，促使IL
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6及IL
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1β的产生增加，继而激活T、B淋巴细胞，进一步使针对这些抗原的自身抗体产生增加。
[0005]体内细胞的凋亡及吞噬处理是一个有机的过程，维持着组织的完整与稳定。这个过程的失控可以引起异常的炎症反应与自身抗体的产生增多。RCP与巨噬细胞的内吞功能相关。Rab蛋白为鸟苷
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5'
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三磷酸酶(GTPase)，能将细胞碎片及分解产物运输到细胞内目标小室去，从而调控真核细胞内物质的运输。Rab11为Rab蛋白家族中的一员，能与其相互作用蛋白(FIP)相结合，其中FIP包括两种类型：1型与2型。FIP1型能与Rab11相结合，形成Rab11FIP1，即RCP。RCP可以参与FcγR介导的吞噬作用，从而参与吞噬过程。
[0006]现有小鼠抗RCP抗体不具有生物学功能，无法产生影响巨噬细胞吞噬功能的作用。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种抗RCP抗体，为具有生物活性的抗RCP抗体，可以减弱巨噬细胞吞噬功能，本专利技术中的RCP抗体可用于构建狼疮样小鼠。
[0008]本专利技术第一方面提供了一种抗RCP抗体，一种抗RCP抗体，所述抗RCP抗体包含重链可变区和轻链可变区；
[0009]所述重链可变区包含：
[0010]由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR1，
[0011]由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR2，
[0012]由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR3；
[0013]所述轻链可变区包含：
[0014]由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR1，
[0015]由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR2，
[0016]由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR3。
[0017]本专利技术第二方面提供了一种核酸分子，所述的核酸分子编码如上所述的抗RCP抗体序列。
[0018]本专利技术第三方面提供了一种生物学表达载体，所述的生物学表达载体包含如上所述的核酸分子。
[0019]本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞包含如上所述的生物学表达载体。
[0020]本专利技术第五方面提供了一种抗RCP抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0021]对RCP isoform 2蛋白进行原核表达，收集表达的融和蛋白RCP
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ECD
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His并纯化；
[0022]将纯化后的融和蛋白RCP
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ECD
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His用于免疫小鼠；
[0023]获取免疫小鼠的脾脏中的B淋巴细胞的总RNA，并进行反转录扩增得到cDNA序列，特异性扩增小鼠轻链抗体可变区基因、轻链抗体恒定区基因、重链抗体可变区基因、重链抗体恒定区基因；
[0024]将所述小鼠轻链抗体可变区基因、轻链抗体恒定区基因、重链抗体可变区基因、重链抗体恒定区基因与载体连接得到连接产物，将所述连接产物进行转化构建噬菌体展示文库；
[0025]从所述噬菌体展示文库淘选获得抗RCP抗体序列；
[0026]利用所述抗RCP抗体序列构建抗体蛋白表达载体，并进行诱导表达和纯化，得到抗RCP抗体。
[0027]本专利技术第二方面提供了一种上述抗RCP抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0028]对RCP isoform 2蛋白进行原核表达，收集表达的融和蛋白RCP
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ECD
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His并纯化；
[0029]将纯化后的融和蛋白RCP
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ECD
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His免疫小鼠；
[0030]获取免疫小鼠脾脏组织的RNA，以其为模板反转成cDNA
[0031]获取免疫羊驼的外周血淋巴细胞的总RNA，并进行反转录扩增得到cDNA序列，特异性扩增小鼠轻链抗体可变区基因、轻链抗体恒定区基因、重链抗体可变区基因、重链抗体恒定区基因；
[0032]将所述小鼠轻链抗体可变区基因、轻链抗体恒定区基因、重链抗体可变区基因、重链抗体恒定区基因与载体连接得到连接产物，将所述连接产物进行转化构建噬菌体展示文库；
[0033]从所述噬菌体展示文库淘选获得抗RCP抗体序列；
[0034]利用所述抗RCP抗体序列构建抗体蛋白表达载体，并进行诱导表达和纯化，得到抗RCP抗体。
[0035]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：本专利技术实施例提供的抗RCP抗体具有生物学功能，可以减弱巨噬细胞吞噬功能，本专利技术实施例提供的RCP抗体可用于构建狼疮样小鼠。
[0036]说明书附图
[0037]图1为重组FIP蛋白的SDS
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PAGE鉴定分析结果图；
[0038]图2为纯化抗RCP抗体的SDS
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PAGE分析结果图；
[0039]图3为抗RCP抗体和Isotype组干预RAW264.7后吞噬功能的变化结果图。
具体实施方式
[0040]在本文中，由「一数值至另一数值」表示的范围，是一种避免在说明书中一一列举该范围中的所有数值的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗RCP抗体，其特征在于，所述抗RCP抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含：由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR1，由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR2，由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列组成的重链互补决定区HCDR3；所述轻链可变区包含：由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR1，由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR2，由SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列组成的轻链互补决定区LCDR3。2.一种核酸分子，其特征在于，所述的核酸分子编码权利要求1所述的抗RCP抗体序列。3.一种生物学表达载体，其特征在于，所述的生物学表达载体包含权利要求2中所述的核酸分子。4.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求3所述的生物学表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶俊娜，周卓超，游懿君，孙悦，王凡，杨程德，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：