枳术颗粒指纹图谱及含量测定的检测方法技术

本申请提供了枳术颗粒指纹图谱建立方法及其成分含量测定方法，采用高效液相色谱法，通过合理选择色谱条件，实现枳术颗粒指纹图谱的建立，且所述方法具有简便、灵敏度高、分析速度快、专属性强等优势，从而可用于枳术颗粒的质量控制，也为进一步研究枳术颗粒的化学成分和质量标准提供依据。本申请实现枳术颗粒中7种化学成分含量的测定，首次将多波长的方法引入测定枳术颗粒，实现了对枳术颗粒中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、川陈皮素、白术内酯Ⅲ的同时含量测定，方法操作简便、快速、专属性强，具有优异的稳定性、重现性和准确度等特点，有利于本发明专利技术枳术颗粒的含量测定及质量控制，同步实现三味组方药在制剂中的质量监测。量监测。量监测。

【技术实现步骤摘要】
枳术颗粒指纹图谱及含量测定的检测方法


[0001]本专利技术涉及中药分析
，具体涉及中成药枳术颗粒指纹图谱及含量测定的检测方法。

技术介绍

[0002]中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱及其特征成分含量检测将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。
[0003]枳术颗粒制剂进行严格的质量控制，对于保证制剂的安全性、有效性及稳定性具有重要意义。枳术颗粒由麸炒枳实、麸炒白术、荷叶三味药组成，本法建立了在开展指纹图谱研究同时进行含量测定，同步实现三味组方药在制剂中的质量监测，完善了制剂质量控制方法。
[0004]枳术颗粒为南京中山制药有限公司的独家产品，由麸炒枳实、麸炒白术、荷叶三味药组成，具有健脾消食，行气化湿的功效，临床上对脾胃虚弱，食少不化，脘腹胀满等病症有较好的疗效。枳术颗粒系利用现代提取方法由枳术丸改剂型来的国家四类中药创新药，具有疗效明确、方便服用等特点。
[0005]现有技术中，关于枳术颗粒的研究报道很少，未有指纹图谱及含量测定同步进行，全面检测三味组方药质量的报道，采用现有方法进行检测，均无法实现多组分的有效分离和准确定量。本专利技术在现有技术的基础上，本研究主要针对其主要成分的指纹图谱及含量测定进行研究，可以更好的控制产品质量。

技术实现思路

[0006]本申请的目的在于提供一种枳术颗粒指纹图谱建立方法及其成分含量测定方法，能够得到枳术颗粒的指纹图谱，能够分离25个共有峰，指认其中11个色谱峰，并能够同时测定枳术颗粒中至少7种化学成分的含量，可用于枳术颗粒的质量控制。具体技术方案如下：
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一种枳术颗粒指纹图谱的建立方法，所述方法包括：
[0008](1)枳术颗粒供试品溶液制备：取质量为M1的枳术颗粒，以体积为V1的体积分数为50
‑
100％的甲醇为溶剂进行提取，得到供试品溶液；其中，M1:V1＝1g:(10
‑
50)mL；当采用本申请供试品溶液的制备方法，结合本申请的高效液相色谱法的色谱条件，有利于在较短的分析时间内获得较多的特征峰，能够全面地从化学成分的角度建立枳术颗粒的指纹图谱，从而能够快速、准确、全面、可信地建立枳术颗粒的指纹图谱，可用于枳术颗粒的质量控制。
[0009](2)混合对照品溶液的制备：精密称取芸香柚皮苷、荷叶碱、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、桔皮素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ对照品，置于容量瓶中，用50
‑
100％的甲醇定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；本申请中，所述体积分数为50
‑
100％的甲醇是指体积分数为50
‑
100％的甲醇水溶液。
[0010](3)采用高效液相色谱检测所述供试品溶液，得到枳术颗粒的色谱图；
[0011]色谱条件包括：
[0012]色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
[0013]流动相：A相为体积分数为0.05
‑
0.15％的磷酸水溶液，B相为乙腈；
[0014]洗脱程序：采用体积分数25
‑
90％A相，10
‑
75％B相，梯度洗脱；
[0015]流速：0.8
‑
1.2mL/min；
[0016]柱温：30
‑
40℃；
[0017]进样体积：10
‑
20μL；
[0018]检测波长：220
±
5nm；
[0019]采用本申请的色谱条件，能够使枳术颗粒中各化学成分获得更好的分离效果。
[0020](4)将步骤(3)得到的枳术颗粒的色谱图，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析，得到枳术颗粒的指纹图谱。
[0021]进一步的，步骤(1)中，所述提取为超声提取，提取时间为20
‑
60min，提取功率为150
‑
200W，提取频率为30
‑
50kHz。
[0022]进一步的，步骤(2)混合对照品溶液的制备：精密称取芸香柚皮苷、荷叶碱、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、桔皮素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ对照品，加100％的甲醇制成含芸香柚皮苷50
±
5μg/mL、荷叶碱50
±
5μg/mL、柚皮苷100
±
5μg/mL、橙皮苷50
±
5μg/mL、新橙皮苷100
±
5μg/mL、柚皮素50
±
5μg/mL、橙皮素50
±
5μg/mL、川陈皮素50
±
5μg/mL、桔皮素50
±
5μg/mL、白术内酯Ⅲ50
±
5μg/mL、白术内酯Ⅱ50
±
5μg/mL的对照品溶液；
[0023]优选的，制成含芸香柚皮苷50μg/mL、荷叶碱50μg/mL、柚皮苷100μg/mL、橙皮苷50μg/mL、新橙皮苷100μg/mL、柚皮素50μg/mL、橙皮素50μg/mL、川陈皮素50μg/mL、桔皮素50μg/mL、白术内酯Ⅲ50μg/mL、白术内酯Ⅱ50μg/mL的对照品溶液。
[0024]进一步的，步骤(3)所述洗脱程序为：
[0025][0026]本专利技术的第二个目的是提供一种枳术颗粒对照指纹图谱建立方法，所述方法包括：
[0027]取批次数量为R的枳术颗粒，按照前述枳术颗粒指纹图谱的建立方法，分别得到各
批枳术颗粒的指纹图谱；将R批枳术颗粒的指纹图谱采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析，得到枳术颗粒对照指纹图谱；所述R≥15。
[0028]本申请对所述中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析时的参数设置不做限定，只要能够实现本申请的目的即可。将所述R批枳术颗粒的指纹图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析，可按照均值法或者中位数法得到枳术颗粒的对照指纹图谱。
[0029]本专利技术的第三个目的是提供采用前述的建立方法得到的枳术颗粒对照指纹图谱。
[0030]进一步的，所述枳术颗粒对照指纹图谱包括25个共有峰，指认11个色谱峰，其中10号峰为芸香柚皮苷，保留时间为31.796min，11号峰为荷叶碱，保留时间为32.878min，12号峰为柚皮苷，保留时间为35,722min，13号峰为橙皮苷，保留时间为37.937min，14号峰为新橙皮苷，保留时间为40.877min，18号峰为柚皮素，保留时间为51.926min，19号峰为橙皮素，保留时间为53.147min，22号峰为川陈皮素，保留时间为57.817min，23号峰为桔皮素，保留时间为60.025min，24号峰为白术内酯Ⅲ，保留时间为60.482min，25号峰为白术内酯Ⅱ，保留本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枳术颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述方法包括：(1)枳术颗粒供试品溶液制备：取质量为M1的枳术颗粒，以体积为V1的体积分数为50
‑
100％的甲醇为溶剂进行提取，得到供试品溶液；其中，M1:V1＝1g:(10
‑
50)mL；(2)混合对照品溶液的制备：精密称取芸香柚皮苷、荷叶碱、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、桔皮素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ对照品，置于容量瓶中，用50
‑
100％的甲醇定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；(3)采用高效液相色谱检测所述供试品溶液，得到枳术颗粒的色谱图；色谱条件包括：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：A相为体积分数为0.05
‑
0.15％的磷酸水溶液，B相为乙腈；洗脱程序：采用体积分数25
‑
90％A相，10
‑
75％B相，梯度洗脱；流速：0.8
‑
1.2mL/min；柱温：30
‑
40℃；进样体积：10
‑
20μL；检测波长：220
±
5nm；(4)将步骤(3)得到的枳术颗粒的色谱图，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析，得到枳术颗粒的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取为超声提取，提取时间为20
‑
60min，提取功率为150
‑
200W，提取频率为30
‑
50kHz。3.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，步骤(2)混合对照品溶液的制备：精密称取芸香柚皮苷、荷叶碱、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、桔皮素、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ对照品，加100％的甲醇制成含芸香柚皮苷50
±
5μg/mL、荷叶碱50
±
5μg/mL、柚皮苷100
±
5μg/mL、橙皮苷50
±
5μg/mL、新橙皮苷100
±
5μg/mL、柚皮素50
±
5μg/mL、橙皮素50
±
5μg/mL、川陈皮素50
±
5μg/mL、桔皮素50
±
5μg/mL、白术内酯Ⅲ50
±
5μg/mL、白术内酯Ⅱ50
±
5μg/mL的对照品溶液，优选的，制成含芸香柚皮苷50μg/mL、荷叶碱50μg/mL、柚皮苷100μg/mL、橙皮苷50μg/mL、新橙皮苷100μg/mL、柚皮素50μg/mL、橙皮素50μg/mL、川陈皮素50μg/mL、桔皮素50μg/mL、白术内酯Ⅲ50μg/mL、白术内酯Ⅱ50μg/mL的对照品溶液。4.根据权利要求1或2所述的建立方法，其特征在于，步骤(3)所述洗脱程序为：
5.一种枳术颗粒对照指纹图谱建立方法，其特征在于，所述方法包括：取批次数量为R的枳术颗粒，按照权利要求1
‑
4中任一项所述枳术颗粒指纹图谱的建立方法，分别得到各批枳术颗粒的指纹图谱；将R批枳术颗粒的指纹图谱采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件分析，得到枳术颗粒对照指纹图谱；所述R≥15。6.采用权利要求5所述的建立方法得到的枳术颗粒对照指纹图谱。7.根据权利要求6所述的枳术颗粒对照指纹图谱，其特征在于，所述枳术颗粒对照指纹图谱包括25个共有峰，指认11个色谱峰，其中10号峰为芸香柚皮苷，保留时间为31.796min，11号峰为荷叶碱，保留时间为32.878min，12号峰为柚皮苷，保留时间为35,722min，13号峰为橙皮苷，保留时间为37.937min，14号峰为新橙皮苷，保留时间为40.877min，18号峰为柚皮素，保留时间为51.926min，19号峰为橙皮素，保留时间为53.147min，22号峰为川陈皮素，保留时间为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海丽，李诗琪，赵开军，彭雲，
申请(专利权)人：南京中山制药有限公司，
类型：发明
国别省市：