一种简单快速检测金霉素的方法技术

本发明专利技术公开了一种简单快速检测金霉素的方法，属于抗生素检测技术领域。该方法在酸性缓冲溶液中加入表面活性剂PEI、金属离子Na+及待测溶液形成待测体系，采用荧光光度分析仪检测待测体系的荧光强度，在425nm处的荧光强度有增强，则待测溶液中含有CTC。本发明专利技术构建检测CTC的荧光增敏法简便、操作简单，不需要复杂的前处理过程、昂贵的仪器以及专业的技术操作人员，在保留快速检测的同时，解决了现有技术中检测方法稳定性差、难以现场检测和不易可视化的问题，且具有灵敏度高、准确度高、检测成本低的优点。的优点。的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种简单快速检测金霉素的方法


[0001]本专利技术属于抗生素检测
，具体涉及在弱酸条件下基于阳离子表面活性剂PEI和金属离子Na
+
协同荧光增敏检测金霉素的方法。

技术介绍

[0002]金霉素(chlortetracycline，CTC)是典型的四环素类抗生素，含有4个线性融合的四环核，对多种细菌具有良好的抗菌性能和治疗效果。作为一种细菌感染的候选药物，CTC除了治疗人类疾病外，还被广泛应用于畜牧业，用于预防肠道感染和促进生长速度、控制其生殖周期和繁育能力等。目前，环境中的CTC主要来源于畜禽养殖、医院、药厂排污等。CTC的滥用致使在动物性食品中大量残留，进一步通过食物链或食物网被人体吸收，不仅严重威胁人类健康，导致过敏、胃肠道紊乱、肝毒性等不良生理反应，而且更为严重的是造成环境污染，畜禽产品中残留较低浓度的CTC，容易诱导各种致病菌产生耐药性，不利于对人类和畜禽类疾病的治疗。欧盟和中国对动物源性食品中CTC的限量作了规定，其中CTC在肌肉中最高限值为100μg/kg(约0.19μmol/L)；肝脏中最高限值为300μg/kg(约0.58μmol/L)；肾脏中最高限值为600μg/kg(1.16μmol/L)；牛奶中最高限值为100μg/kg(0.19μmol/L)。
[0003]传统检测CTC的方法主要包括高效液相色谱法、酶联免疫分析法、胶体金免疫分析法、毛细管电泳法、免疫学方法等。虽然这些方法具有较高的灵敏度和可靠性、操作简便等优点，但需要较高的检测成本、复杂的前处理过程、昂贵的仪器以及专业的技术操作人员等，同时实验周期时间长、对样品纯度的要求较高，一些方法无法满足大批量样本快速筛查的需要，因而使用受到限制。因此开发一种简便快速，灵敏度高、准确度高、检测成本低的方法是非常有必要的。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种简单快速检测CTC的方法，在弱酸条件下基于阳离子表面活性剂PEI和金属离子Na
+
实现协同荧光增敏检测CTC。本专利技术所要解决的另一技术问题是提供一种定量检测CTC的方法。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0006]一种简单快速检测CTC的方法：在酸性缓冲溶液中加入表面活性剂PEI、金属离子Na
+
及待测溶液形成待测体系，采用荧光光度分析仪检测待测体系的荧光强度，在425nm处的荧光强度有增强，则待测溶液中含有CTC。
[0007]进一步的，酸性缓冲溶液为pH为6的醋酸缓冲溶液，醋酸缓冲溶液的浓度为20mmol/L。
[0008]进一步的，待测体系中的PEI浓度为0.80％，Na
+
浓度为0.5mmol/L。
[0009]一种定量检测CTC的方法，包括以下步骤：
[0010]1)在酸性缓冲溶液中加入表面活性剂PEI、金属离子Na
+
及不同标准浓度的CTC，以CTC浓度为横坐标，以相对荧光值为纵坐标作标准曲线及标准曲线方程；
[0011]2)在酸性缓冲溶液中加入表面活性剂PEI、金属离子Na
+
及待测溶液形成待测体系，采用荧光光度分析仪检测待测体系在425nm处的荧光强度，将测得的相对荧光值代入标准曲线方程中，得到待测溶液中的CTC浓度。
[0012]进一步的，相对荧光值为荧光强度F与F0的荧光值差(ΔF
425
)。
[0013]进一步的，标准曲线方程为：y＝47.879x
‑
0.3854。
[0014]进一步的，CTC的最低检出限为2.7nmol/L。
[0015]相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0016](1)本专利技术构建检测CTC的荧光增敏法简便、操作简单，在保留快速检测的同时，解决了现有技术中检测方法稳定性差、难以现场检测和不易可视化的问题。
[0017](2)本专利技术快速检测CTC的荧光增敏法既可适用于肉眼观察其荧光颜色变化，且具有灵敏度高、准确度高、检测成本低等优点，并且不需要复杂的前处理过程、昂贵的仪器以及专业的技术操作人员。
[0018](3)本专利技术构建的荧光增敏法具有良好的选择性，其他四环素类抗生素、氟喹诺酮类抗生素、大环内脂类抗生素受干扰小，使用该方法检测CTC时，可以排除样品中其他抗生素的干扰，结果更加可靠。
[0019](4)本专利技术在实际水样的检测中具有良好的加标回收率，准确度高，检测结果可靠。
附图说明
[0020]图1是基于PEI的荧光增敏法检测CTC的可行性分析图；
[0021]图2是不同pH值对CTC荧光强度的影响光谱图以及pH3
‑
6时PEI对CTC荧光强度的影响光谱图；A图中pH3
‑
6的缓冲液为20mmol/L的醋酸，pH7
‑
10的缓冲液为20mmol/L的BR，B图中pH3
‑
6的缓冲液为20mmol/L的醋酸(含0.80％PEI)；
[0022]图3是不同表面活性剂对CTC荧光强度的影响光谱图；其中，缓冲液为醋酸(20mmol/L，pH＝6)，CTC的浓度为10μmol/L，表面活性剂的浓度为0.8％；
[0023]图4是不同浓度的PEI对体系荧光影响的折线图；其中，缓冲液为醋酸(20mmol/L，pH＝6)，CTC的浓度为10μmol/L；
[0024]图5是不同金属离子对CTC荧光强度的影响光谱图；其中，缓冲液为含有0.8％PEI的醋酸(20mmol/L，pH＝6)，CTC的浓度为10μmol/L，金属离子的浓度为200μmol/L；
[0025]图6是不同浓度的NaCl对体系荧光影响的折线图；其中，缓冲液为含有0.8％PEI的醋酸(20mmol/L，pH＝6)，CTC的浓度为10μmol/L；
[0026]图7是不同浓度的CTC对体系影响的荧光光谱图以及CTC浓度与体系荧光强度差值(ΔF
425
)的线性关系曲线图；
[0027]图8是本专利技术检测方法的特异性分析图；图中，CTC浓度为5μmol/L，其他不同抗生素的浓度均为10μmol/L。
具体实施方式
[0028]下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条
件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。以下实施例中如无特殊说明，实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0029]实施例1
[0030]本实施例提供的基于聚乙烯亚胺的荧光增敏法检测金霉素，可实现简单快速定量检测CTC，其原理(图1)是：在弱酸性条件(pH6)下，向含有PEI的待测体系中加入弱荧光物质CTC，在345nm激发时，425nm处出现较强的荧光发射带。在弱酸性条件下，P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种简单快速检测金霉素的方法，其特征在于：在酸性缓冲溶液中加入表面活性剂PEI、金属离子Na
+
及待测溶液形成待测体系，采用荧光光度分析仪检测待测体系的荧光强度，在425nm处的荧光强度有增强，则待测溶液中含有CTC。2.根据权利要求1所述的简单快速检测金霉素的方法，其特征在于，酸性缓冲溶液为pH为6的醋酸缓冲溶液，醋酸缓冲溶液的浓度为20mmol/L。3.根据权利要求1所述的简单快速检测金霉素的方法，其特征在于，待测体系中的PEI浓度为0.80％，Na
+
浓度为0.5mmol/L。4.一种定量检测金霉素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)在酸性缓冲溶液中加入表面活性剂PEI、金属离子Na
+
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李胎花，钱美汝，王雪，王安琪，戴晶，韩建刚，金龙，李威，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：