一种核酸提取羧基磁珠的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，包括以下步骤:完成Fe3O4磁性微球的制备；完成Fe3O4磁性微球的包覆及改性；完成羧基磁珠的制备；该一种核酸提取羧基磁珠的制备方法,本发明专利技术采用化学共沉淀法制备Fe3O4磁性微球，制备工艺简单、时间短、易于操作、适用于大批量生产；本发明专利技术在Fe3O4磁性微球表面包覆SiO2壳层，克服了Fe3O4易氧化的缺点；减小磁性微球之间的磁偶极相互作用，阻止微球团聚；具有优良的生物相容性、亲水性、化学稳定性；制备的羧基磁珠在应用于病毒中的核酸提取时，性能优异。优异。优异。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸提取羧基磁珠的制备方法


[0001]本专利技术涉及核酸提取磁珠制备
，具体为一种核酸提取羧基磁珠的制备方法。

技术介绍

[0002]磁珠是一种具有超顺磁性的纳米颗粒，其主要结构为具有超顺磁性的中心磁核和具有功能性修饰的外层包覆材料。磁珠在外磁场的作用下能够迅速聚集，离开磁场后又可以恢复原来的状态，具有较强的磁响应性，可以使复杂的液固分离技术变得快捷简便。与传统的分离方法相比，把磁珠用于生化样品复杂组分的分离，能够实现分离和富集的同时进行，有效地提高了分离速度和富集效率，同时也使分析检测的灵敏度大大提升。近些年来，磁珠对核酸样本进行分离纯化方法在科学研究领域应用广泛，它主要是利用表面含有特殊修饰的磁珠对样本中的核酸进行富集提取，通过磁吸的方式进行磁分离后，洗脱得到纯化的核酸，该方法具有分离速度快、溶剂量小、回收率高、操作简单等特点。
[0003]纳米Fe3O4是目前应用最广泛的磁珠材料之一，具有超顺磁性、生物相容性、制备简单、表面易于修饰等特点。但是，由于纳米Fe3O4的纳米尺寸效应、磁偶极子引力等作用，磁性纳米粒子易于团聚，且化学稳定性不高易受氧化，表面基团不足，导致其难以直接应用到生物领域。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，以解决
技术介绍
中所提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，包括以下步骤：
[0006]步骤一；完成Fe3O4磁性微球的制备，其具体步骤如下：
[0007]子步骤一：将六水合氯化铁、七水合硫酸亚铁以及分散剂均匀分散在去离子水中，以300rmp/min的转速进行搅拌分散；
[0008]子步骤二：当其温度升至70摄氏度时，加入氨水，并再次升温至80摄氏度，持续1h后结束反应；
[0009]子步骤三：将制备的混合物用去离子水多次清洗后制得Fe3O4磁性微球；
[0010]步骤二：完成Fe3O4磁性微球的包覆及改性，其具体步骤如下：
[0011]子步骤一：将无水乙醇、硅包覆物、Fe3O4磁性微球混合搅拌30min，随后加入氨水，并将温度升高至60摄氏度；
[0012]子步骤二：上述操作持续1h，随后加入硅烷偶联剂，持续反应6h；
[0013]子步骤三：将制备完成的混合物用去离子水多次清洗，以此制得包覆、改性后的Fe3O4磁性微球；
[0014]步骤三：完成羧基磁珠的制备，其具体步骤如下：
[0015]子步骤一：将一定量的氢氧化钠溶解在去离子水中，随后加入羧基单位反应10min，制得混合溶液1；
[0016]子步骤二：将去离子水、分散剂、包覆、改性Fe3O4磁性微球加入三口烧瓶，以200rmp/min转速搅拌分散，制得混合溶液2；
[0017]子步骤三：将混合溶液1加入混合溶液2,当温度达到75摄氏度时加入引发剂，并再次升温至85摄氏度，恒温8h反应完成；
[0018]子步骤四：随后将混合物用去离子水多次清洗，以此制得羧基磁珠。
[0019]作为本专利技术的优选技术方案，所述六水合氯化铁与七水合硫酸亚铁质量比为3：1
‑
2，所述六水合氯化铁与七水合硫酸亚铁的总质量与去离子水的质量比为1:2
‑
4，所述氨水质量为溶液总体积的0.5
‑
2倍。
[0020]作为本专利技术的优选技术方案，所述分散剂可为PVP、REG、CMC中的一种或多种，所述分散剂质量是六水合氯化铁与七水合硫酸亚铁总质量的10％
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40％。
[0021]作为本专利技术的优选技术方案，所述硅包覆物为硅酸钠、正硅酸四乙酯，所述无水乙醇、硅包覆物、Fe3O4磁性微球的质量比为20
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40:1
‑
4:1。
[0022]作为本专利技术的优选技术方案，所述氨水的用量为溶液总体积的1
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10％，所述硅烷偶联剂的用量为磁核质量的5
‑
30％。
[0023]作为本专利技术的优选技术方案，所述氢氧化钠的质量是羧基单体的0.5
‑
1倍。
[0024]作为本专利技术的优选技术方案，所述羧基单体为丙烯酸、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯中的一种或多种，所述羧基单体的质量为Fe3O4磁性微球的1
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5倍。
[0025]作为本专利技术的优选技术方案，所述分散剂选用柠檬酸钠，所述去离子水、柠檬酸钠、包覆、改性后Fe3O4磁性微球的质量比20
‑
50:0.2
‑
1:1。
[0026]作为本专利技术的优选技术方案，所述引发剂为过硫酸铵、过硫酸钾，所述引发剂用量是羧基单体的0.1％
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2％。
[0027]与现有技术相比，本专利技术提供了一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，具备以下有益效果：
[0028]1、该一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，采用化学共沉淀法制备Fe3O4磁性微球，制备工艺简单、时间短、易于操作、适用于大批量生产；
[0029]2、该一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，在Fe3O4磁性微球表面包覆SiO2壳层，克服了Fe3O4易氧化的缺点；减小磁性微球之间的磁偶极相互作用，阻止微球团聚；具有优良的生物相容性、亲水性、化学稳定性；制备的羧基磁珠在应用于病毒中的核酸提取时，性能优。
附图说明
[0030]图1为本专利技术制备的核酸提取羧基磁珠的SEM照片示意图；
[0031]图2为本专利技术核酸提取羧基磁珠对病毒的提取性能数据示意图。
具体实施方式
[0032]下面将结合本专利技术实施例以及附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于
本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0033]实施例一：一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，包括以下步骤：
[0034]步骤一；完成Fe3O4磁性微球的制备，其具体步骤如下：将1KG六水合氯化铁、0.6七水合硫酸亚铁以及0.3KG分散剂均匀分散在1L去离子水中，以300rmp/min的转速进行搅拌分散；当其温度升至70摄氏度时，加入1.2L氨水，并再次升温至80摄氏度，持续1h后结束反应；将制备的混合物用去离子水多次清洗后制得Fe3O4磁性微球；
[0035]步骤二：完成Fe3O4磁性微球的包覆及改性，其具体步骤如下：
[0036]子步骤一：将1.5L无水乙醇、100ml正硅酸四乙酯、100gFe3O4磁性微球混合搅拌30min，随后加入300ml氨水，并将温度升高至60摄氏度；：上述操作持续1h，随后加入15ml硅烷偶联剂，持续反应6h；将制备完成的混合物用去离子水多次清洗，以此制得包覆、改性后的Fe3O4磁性微球；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一；完成Fe3O4磁性微球的制备，其具体步骤如下：子步骤一：将六水合氯化铁、七水合硫酸亚铁以及分散剂均匀分散在去离子水中，以300rmp/min的转速进行搅拌分散；子步骤二：当其温度升至70摄氏度时，加入氨水，并再次升温至80摄氏度，持续1h后结束反应；子步骤三：将制备的混合物用去离子水多次清洗后制得Fe3O4磁性微球；步骤二：完成Fe3O4磁性微球的包覆及改性，其具体步骤如下：子步骤一：将无水乙醇、硅包覆物、Fe3O4磁性微球混合搅拌30min，随后加入氨水，并将温度升高至60摄氏度；子步骤二：上述操作持续1h，随后加入硅烷偶联剂，持续反应6h；子步骤三：将制备完成的混合物用去离子水多次清洗，以此制得包覆、改性后的Fe3O4磁性微球；步骤三：完成羧基磁珠的制备，其具体步骤如下：子步骤一：将一定量的氢氧化钠溶解在去离子水中，随后加入羧基单位反应10min，制得混合溶液1；子步骤二：将去离子水、分散剂、包覆、改性Fe3O4磁性微球加入三口烧瓶，以200rmp/min转速搅拌分散，制得混合溶液2；子步骤三：将混合溶液1加入混合溶液2,当温度达到75摄氏度时加入引发剂，并再次升温至85摄氏度，恒温8h反应完成；子步骤四：随后将混合物用去离子水多次清洗，以此制得羧基磁珠。2.根据权利要求1所述的一种核酸提取羧基磁珠的制备方法，其特征在于：步骤一中，所述六水合氯化铁与七水合硫酸亚铁质量比为3：1
‑
2，所述六水合氯化铁与七水合硫酸亚铁的总质量与去离子水的质量比为1:2
‑
4，所述氨水质量为溶液总体积的0.5
‑
2倍。3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王才宝，
申请(专利权)人：济凡生物科技常州有限公司，
类型：发明
国别省市：