一种复合佐剂、疫苗及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种复合佐剂、疫苗及制备方法，属于疫苗技术领域；所述复合佐剂包括以下质量份的组分：CpG

【技术实现步骤摘要】
一种复合佐剂、疫苗及制备方法


[0001]本专利技术属于疫苗
，具体涉及一种复合佐剂、疫苗及制备方法。

技术介绍

[0002]近年来，随着免疫学研究的不断深入及基因工程技术的迅速发展,活载体疫苗、DNA疫苗和蛋白质疫苗等新型疫苗的研究取得了可喜的进步。这些新型疫苗纯度高、特异性强，但免疫原性弱，诱导机体产生的免疫应答不够强，因此，应用佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答就显得尤为重要。
[0003]现有佐剂包括铝盐佐剂和新型CpG
‑
ODN佐剂。其中，铝盐佐剂成本低、使用方便，是生物制品生产中应用最广的一种佐剂。目前常用的铝佐剂主要为氢氧化铝佐剂(aluminum hydroxide adjuvant)。氢氧化铝作为疫苗佐剂有很多优点，除了增强免疫应答，还具有非常坚实的安全性数据。氢氧化铝虽然可以有效地诱导体液免疫应答，但是它对细胞免疫无明显作用，难以诱导细胞免疫应答。新型CpG
‑
ODN佐剂是未来最具前景的疫苗佐剂技术之一。CpG
‑
ODN为非甲基化的短核昔酸(胞嘧啶和鸟嘌呤，CpG)为基序的寡脱氧核普酸(ODN)短序列，是迄今发现的人和动物的强烈免疫刺激因子。CpG
‑
ODN不仅可增强疫苗的体液免疫应答，还可大大增强其细胞免疫应答。
[0004]目前，CpG
‑
ODN和氢氧化铝是已被临床证明安全有效的两类佐剂，二者能够增强疫苗的免疫原性，提高免疫应答率，刺激机体形成更有效的免疫保护。但是将CpG
‑
ODN和氢氧化铝用于疫苗制备时，疫苗的抗原稳定性还有待提高。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种复合佐剂、疫苗及制备方法，本专利技术的复合佐剂能够提高疫苗的抗原稳定性。
[0006]本专利技术提供了一种复合佐剂，包括以下质量份的组分：CpG
‑
ODN(5～100)
×
10
‑3份、氢氧化铝0.2～1.2份和甘氨酸1～5份。
[0007]本专利技术还提供了一种疫苗，包括抗原、上述方案所述的复合佐剂和药学上可接受的辅料。
[0008]优选的，所述药学上可接受的辅料包括PBS缓冲液；所述疫苗中CpG
‑
ODN的浓度为5～100μg/mL；所述疫苗中氢氧化铝的浓度为0.2～1.2mg/mL；所述疫苗中甘氨酸的浓度为1～5mg/mL。
[0009]优选的，所述疫苗中CpG
‑
ODN的浓度为50～75μg/mL；所述疫苗中氢氧化铝的浓度为0.4～0.8mg/mL；所述疫苗中甘氨酸的浓度为2～4mg/mL。
[0010]优选的，所述疫苗还包括解离液；所述解离液以10mL计，包括以下组分：10mM的PBS 8.55mL、体积浓度为20％的二乙醇胺溶液1.25mL和体积浓度为10％的曲拉通溶液200μl；所述二乙醇胺溶液和曲拉通溶液的溶剂分别为浓度为10mM的PBS。
[0011]优选的，所述抗原包括EV71灭活病毒。
[0012]优选的，所述疫苗中EV71灭活病毒的浓度为1000U/mL。
[0013]本专利技术还提供了上述方案所述疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0014]将抗原、上述方案所述的复合佐剂和药学上可接受的辅料混合，得到疫苗。
[0015]优选的，所述将抗原、上述方案所述的复合佐剂和药学上可接受的辅料混合包括：
[0016]将抗原、CpG
‑
ODN、甘氨酸和部分药学上可接受的辅料进行第一混合，得到第一混合物；
[0017]将氢氧化铝和剩余药学上可接受的辅料第二混合，得到第二混合物；
[0018]将所述第一混合物和第二混合物混合，得到疫苗。
[0019]本专利技术还提供了上述方案所述疫苗或者所述的制备方法制备得到的疫苗在制备预防肠道病毒的生物制品中的应用。
[0020]本专利技术提供了一种复合佐剂，包括以下质量份的组分：CpG
‑
ODN(5～100)
×
10
‑3份、氢氧化铝0.2～1.2份和甘氨酸1～5份。本专利技术的复合佐剂中CpG
‑
ODN和氢氧化铝具有优异的抗体效价提高能力，甘氨酸能够提高抗原的稳定性。将EV71灭活病毒与本专利技术的复合佐剂混合后，EV71灭活病毒在4℃条件下保存180天，EV71灭活病毒的含量仅下降了5％～7％，而无甘氨酸组EV71灭活病毒的含量下降10％～20％。本专利技术的氢氧化铝和CpG
‑
ODN分别和EV71灭活病毒混合后免疫动物后，血清抗体效价较无氢氧化铝佐剂组高30％～50％(图2)，较无CpG
‑
ODN组高30％～60％(图4)，使病毒抗原的免疫学效果得到显著增强。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为试验例1中1000U EV71灭活病毒的吸附效率及免疫动物血清抗体效价比较结果；
[0023]图2为试验例1中皮内免疫小鼠血清抗体效价检测结果；
[0024]图3为试验例2中CpG
‑
ODN的吸附效率及免疫动物血清抗体效价比较结果；
[0025]图4为试验例2中血清抗体效价趋势图；
[0026]图5为实施例1～5以及对比例1中抗原含量的比较结果；
[0027]图6为血清抗体效价检测结果。
具体实施方式
[0028]本专利技术提供了一种复合佐剂，包括以下质量份的组分：CpG
‑
ODN(5～100)
×
10
‑3份、氢氧化铝0.2～1.2份和甘氨酸1～5份。
[0029]在本专利技术中，所述复合佐剂优选为皮内免疫佐剂。
[0030]本专利技术还提供了一种疫苗，包括抗原、上述方案所述的复合佐剂和药学上可接受的辅料。
[0031]在本专利技术中，所述药学上可接受的辅料包括PBS缓冲液；所述PBS缓冲液的浓度优选为2mmol/L；所述PBS缓冲液的pH值优选为7～7.5。
[0032]在本专利技术中，所述疫苗中CpG
‑
ODN的浓度优选为5～100μg/mL，优选为25～75μg/mL，最优选为50μg/mL。
[0033]在本专利技术中，所述疫苗中氢氧化铝的浓度优选为0.2～1.2mg/mL，更优选为0.4～1.0mg/mL，最优选为0.6～0.8mg/mL。
[0034]在本专利技术中，所述疫苗中甘氨酸的浓度优选为1～5mg/mL，更优选为2～4mg/mL，最优选为3mg/mL。
[0035]在本专利技术中，所述抗原优选包括EV71灭活病毒。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合佐剂，其特征在于，包括以下质量份的组分：CpG
‑
ODN(5～100)
×
10
‑3份、氢氧化铝0.2～1.2份和甘氨酸1～5份。2.一种疫苗，其特征在于，包括抗原、权利要求1所述的复合佐剂和药学上可接受的辅料。3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括PBS缓冲液；所述疫苗中CpG
‑
ODN的浓度为5～100μg/mL；所述疫苗中氢氧化铝的浓度为0.2～1.2mg/mL；所述疫苗中甘氨酸的浓度为1～5mg/mL。4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗中CpG
‑
ODN的浓度为50～75μg/mL；所述疫苗中氢氧化铝的浓度为0.4～0.8mg/mL；所述疫苗中甘氨酸的浓度为2～4mg/mL。5.根据权利要求2～4任意一项所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还包括解离液；所述解离液以10mL计，包括以下组分：10mM的PBS 8.55mL、体积浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨二霞，张志伟，姜莉，刘碧云，陈璐，徐华，田华平，
申请(专利权)人：艾美康淮生物制药江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：