一种EV71-CA16二价灭活疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种EV71

【技术实现步骤摘要】
一种EV71
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CA16二价灭活疫苗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于疫苗制备
，具体涉及一种EV71
‑
CA16二价灭活疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]手足口病是一种由肠道病毒引起的急性传染病，多发生于婴幼儿，且近二十年来的全年发病率不断上升，并已形成严重的流行病学趋势。手足口病可引起手、足、口腔等部位的疱疹，少数患儿会引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症，个别重症患儿如果病情发展快，甚至会导致死亡。
[0003]引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中以柯萨奇病A16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71)最为常见。目前，EV71疫苗已上市应用，但CA16疫苗研究进展仍较缓慢，现有的CA16单价疫苗抗原含量、吸附率和回收率均较低，不能发挥出免疫有效性。尽管，CA16所致手足口病的症状较轻，但是近年来CA16引起的发病人数正在逐步上升，亦可引发少量重症病例。EV71疫苗虽然已经有效地降低了手足口病重症和死亡的发生率，但其缺乏交叉保护性，不能抵抗包括CA16在内的其他病原体引起的手足口病。为了能够全面控制儿童手足口病的发生发展，CA16也应该成为重点关注的对象。
[0004]目前，现有技术中也存在大量EV71与CA16二价疫苗的研究，如现有技术“EV71与CA16双价灭活疫苗诱导小鼠免疫原性研究”(王轩,高帆,毛群颖,等.EV71与CA16双价灭活疫苗诱导小鼠免疫原性研究[J].微生物学免疫学进展,2014,42(2):1r/>‑
1)中公开了一种EV71与CA16双价灭活疫苗，并对其诱导的免疫原性进行了研究，虽然其得到的EV71与CA16双价灭活疫苗可诱导与单价疫苗相似的中和抗体应答水平，但其制备得到的疫苗免疫原性相对较低，且稳定性较差。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种EV71
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CA16二价灭活疫苗及其制备方法和应用，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗较EV71或CA16单价疫苗具有更稳定有效的免疫反应，可以诱导更高的血清抗体水平。
[0006]本专利技术提供了一种EV71
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CA16二价灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：
[0007]将EV71单价病毒原液和CA16单价病毒原液分别与佐剂混合吸附，分别得到EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物；
[0008]将所述EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物混合搅拌，将得到的混合物与保护剂混合，得到所述EV71
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CA16二价灭活疫苗。
[0009]优选的，所述佐剂包括氢氧化铝，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗中佐剂的质量浓度为0.25～1.0mg/mL。
[0010]优选的，所述保护剂包括甘氨酸，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗中甘氨酸的质量浓度为3～10mg/mL。
[0011]优选的，所述搅拌的时间为30min。
[0012]优选的，所述与保护剂混合前，还包括：以缓冲液对得到的混合物稀释。
[0013]优选的，所述缓冲液包括PBS缓冲液，所述PBS缓冲液的浓度为2mM，pH值为7.00～7.40。
[0014]本专利技术还提供了一种EV71
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CA16二价灭活疫苗，采用上述技术方案所述的制备方法制备得到。
[0015]优选的，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗中EV71抗原和CA16抗原的含量均为500～2000U/mL。
[0016]优选的，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗中EV71抗原和CA16抗原的剂量均为100～400U/剂。
[0017]本专利技术还提供了上述技术方案所述的制备方法制备得到的EV71
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CA16二价灭活疫苗在制备预防手足口病的试剂盒中的应用。
[0018]有益效果：
[0019]本专利技术提供了一种EV71
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CA16二价灭活疫苗的制备方法，本专利技术采用将含有EV71抗原与含有CA16抗原的单价病毒原液分别吸附佐剂后再混合的方式进行配制，可以提高疫苗中EV71抗原和CA16抗原的含量，使得EV71和CA16的抗原吸附率、回收率大大提高，且EV71
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CA16二价病毒抗原可以引起相应中和抗体的阳转及上调，诱导更高的血清抗体水平，具有更稳定有效的免疫反应。且采用上述制备方法得到的EV71
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CA16二价灭活疫苗具有接种量小，不良反应少，免疫后可诱导高水平抗体应答的优点。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0021]图1为实施例1和对比例1～3中EV71
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CA16二价灭活疫苗的抗原回收率；
[0022]图2为实施例1和对比例1～3中EV71
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CA16二价灭活疫苗上清游离抗原的OD值；
[0023]图3为实施例1和对比例1～3中EV71
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CA16二价灭活疫苗免疫小鼠血清中CA16中和抗体效价(GMT值)统计结果；
[0024]图4为实施例1和对比例1～3中EV71
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CA16二价灭活疫苗免疫小鼠血清中EV71中和抗体效价(GMT值)统计结果；
[0025]图5为实施例1中EV71
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CA16二价灭活疫苗和对比例4中EV71单价灭活疫苗免疫小鼠血清中EV71中和抗体效价(GMT值)统计结果；
[0026]图6为为实施例1中EV71
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CA16二价灭活疫苗和对比例5中CA16单价灭活疫苗免疫小鼠血清中CA16中和抗体效价(GMT值)统计结果。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供了一种EV71
‑
CA16二价灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：
[0028]将EV71单价病毒原液和CA16单价病毒原液分别与等量佐剂混合吸附，分别得到EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物；
[0029]将所述EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物混合搅拌，将得
到的混合物与保护剂混合，得到所述EV71
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CA16二价灭活疫苗。
[0030]本专利技术将EV71单价病毒原液和CA16单价病毒原液分别与佐剂混合吸附，得到EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物。本专利技术对所述混合吸附的过程没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的方式混合吸附即可。本专利技术所述EV71单价病毒原液和CA16单价病毒原液均优选为灭活后的病毒原液。本专利技术所述EV71单价病毒原液中含有肠道病毒71型，所述肠道病毒71型的病毒株本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种EV71
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CA16二价灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将EV71单价病毒原液和CA16单价病毒原液分别与佐剂混合吸附，分别得到EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物；将所述EV71单价病毒佐剂吸附产物和CA16单价病毒佐剂吸附产物混合搅拌，将得到的混合物与保护剂混合，得到所述EV71
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CA16二价灭活疫苗。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述佐剂包括氢氧化铝，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗中佐剂的质量浓度为0.25～1.0mg/mL。3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述保护剂包括甘氨酸，所述EV71
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CA16二价灭活疫苗中甘氨酸的质量浓度为3～10mg/mL。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌的时间为30min。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述与保护剂混合前还包...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘碧云，杨二霞，姜莉，张浩然，张志伟，陈良宇，吉媛，
申请(专利权)人：艾美康淮生物制药江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：