异亮氨酸核糖体开关及其应用制造技术

本发明专利技术公开了异亮氨酸核糖体开关及其应用，属于基因工程领域。本发明专利技术提供了一种核糖体开关突变文库构建的方法，成功构建了突变文库，并从文库中筛选筛选获得能够响应环境中的异亮氨酸，并受异亮氨酸负调控以实现对特定基因抑制作用的基因调控元件。应用本发明专利技术筛选的表达强度不同的核糖体开关IleRS，在10～60mM的含异亮氨酸的环境中，对egfp表达的抑制率能达到20％以上。达到20％以上。达到20％以上。

【技术实现步骤摘要】
异亮氨酸核糖体开关及其应用


[0001]本专利技术涉及异亮氨酸核糖体开关及其应用，属于基因工程领域。

技术介绍

[0002]谷氨酸棒杆菌作为一种公认的食品安全生产菌，被广泛用于氨基酸、有机酸、醇类等化学品的工业发酵生产。随着对动态代谢工程的深入研究，越来越多的调控工具被用于谷氨酸棒杆菌代谢途径的优化与改造，以有效地生产高附加值的化学品。核糖体开关作为一种非编码RNA顺式调控元件，具有响应时间短、代谢负担小、特异性高等特点，已被用于细菌代谢工程。天然的核糖体开关可响应的配体种类较少，限制了其在动态调控基因表达中的应用，需要对核糖体开关的配体特异性进行改造以获得能够响应目的代谢物的核糖体开关。
[0003]核糖体开关是具有调节基因表达功能的RNA片段，位于mRNA的5
’‑
UTR区，通常含有两个结构域，一个是结合配体的适体结构域，另一个是调节基因表达的表达平台，适体结构域结合配体后，促使表达平台发生构象变化，影响下游基因的转录终止或翻译起始，从而调控基因表达。但是，目前在微生物体内发现的响应氨基酸的天然核糖体开关种类较少，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.负响应异亮氨酸的核糖体开关，具有SEQ ID NO.1～4任一所示的核苷酸序列。2.含有权利要求1所述核糖体开关的重组质粒。3.根据权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒还含有组成型启动子P
tacM
；所述组成型启动子P
tacM
位于所述核糖体开关的上游。4.根据权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，以pDTW107为出发质粒，依次含有组成型启动子P
tacM
、所述核糖体开关和编码荧光蛋白的基因。5.含有权利要求2～4任一所述重组质粒的重组微生物细胞。6.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，应用权利要求2～4任一所述的重组质粒表达目的基因；所述目的基因包括但不限于苏氨酸脱水酶基因ilvA或乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：史锋，项幼和，李永富，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：