一种长效人重组胰高血糖素样肽-1及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种长效人重组胰高血糖素样肽

【技术实现步骤摘要】
一种长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1及其应用


[0001]本专利技术涉及一种长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1及其应用，属于基因构建


技术介绍

[0002]胰高血糖素样肽
‑
1 (GLP
‑
1) 是一种由 30 或 31个氨基酸组成的肽激素，源自胰高血糖素原肽的组织特异性翻译后加工。它由肠内分泌L细胞和孤束核内的某些神经元在食物消耗后产生和分泌。初始产物 GLP
‑
1 (1
‑
37) 易被酰胺化和蛋白水解裂解，从而产生两种截短且等效的生物活性形式，GLP
‑
1 (7
‑
36) 酰胺和 GLP
‑
1 (7
‑
37)。活性 GLP
‑
1 由两个α
‑
螺旋组成，分别位于氨基酸的13
‑
20位和24
‑
35位，被一个连接区隔开。
[0003]GLP
‑
1一旦分泌，会对蛋白水解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1，其特征在于：将野生型GLP
‑
1进行变异改造，使其不被DPP
‑
4酶剪切，将包含一个或多个CTP的序列连接到变异型GLP
‑
1的N端或/和C端；所述的GLP
‑
1野生型的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述的GLP
‑
1变异型的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述的CTP的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。2.一种基于权利要求1所述的长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1的制备方法，其特征在于：具体方法为：使用基因合成技术构造变异型人胰高血糖素样肽
‑
1（GLP
‑
1）的嵌合基因含有HCGβ羧基末端肽（CTP）的序列，其中CTP可以Ⅰ）一个在C端；Ⅱ）一个在N端；Ⅲ）两个在C端；Ⅳ) 两个在N端；
Ⅴ
）两个其中一个在N端，另外一个在C端；
Ⅵ
）三个在C端；
Ⅶ
）三个在N端；
Ⅷ
）三个其中一个在N端，另外两个在C端；
Ⅸ
）三个其中两个在N端，另外一个在C端，这些嵌合基因将被测序并克隆到真核表达载体中，将构建的含有GLP
‑
1和CTP序列的载体转染到CHO细胞中，然后选择稳定的克隆，收集稳定克隆的培养基，纯化GLP
‑
1 变体。3.根据权利要求2所述的一种长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1的制备方法，其特征在于，所述变异型嵌合基因的构建包括如下步骤：（S1）构建GLP
‑1‑
CTP；（S2）构建GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP；（S3）构建GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP
‑
CTP；（S4）构建CTP
‑
GLP
‑
1；（S5）构建CTP
‑
CTP
‑
GLP
‑
1；（S6）构建CTP
‑
CTP
‑
CTP
‑
GLP
‑
1；（S7）构建CTP
‑
GLP
‑1‑
CTP；（S8）构建CTP
‑
GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP；（S9）构建CTP
‑
CTP
‑
GLP
‑1‑
CTP。4.根据权利要求3所述一种长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1的制备方法，其特征在于：所述的步骤（S1）包括如下步骤：所述的GLP
‑1‑
CTP是HCGβ序列和GLP
‑
1序列的基因被用作模板，其构建方法分三步进行：（1）引物1和引物2以HCGβ基因作为模板，引物1包含GLP
‑
1序列的后4个基码和CTP 5
′
端序列的前4个基码，引物2包含CTP 3
′
端序列的后4个基码和一个限制位点的反义基码；（2）引物3和引物4以GLP
‑
1基因作为模板，引物3包含GLP
‑
1 序列的前4个基码和一个限制位点，引物4包含GLP
‑
1序列的后4个基码和CTP 5
′
端序列的前4个基码的反义基码；（3）以（1）和（2）反应的基因产物用作引物2和引物3的模板，用于放大GLP
‑1‑
CTP；所述的步骤（S2）包括如下步骤：所述的GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP是HCGβ序列和GLP
‑1‑
CTP序列的基因被用作模板，其构建方法分三步进行：（1）引物1和引物2以HCGβ基因作为模板，引物1包含CTP 3
′
端序列后4个基码和CTP 5
′
端序列的前4个基码，引物2包含CTP 3
′
端序列的后4个基码和一个限制位点的反义基码；（2）引物3和引物4以GLP
‑1‑
CTP基因作为模板，引物3包含GLP
‑
1 序列的前4个基码和一个限制位点，引物4包含CTP 3
′
端序列后4个基码和CTP 5
′
端序列的前4个基码的反义基码；（3）以（1）和（2）反应的基因产物用作引物2和引物3的模板，用于放大GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP；所述的步骤（S3）包括如下步骤：所述的GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP
‑
CTP是HCGβ序列和GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP序列的基因被用作模板，其构建方法分三步进行：（1）引物1和引物2以HCGβ基因作为模板，引物1包含CTP 3
′
端序列后4个基码和CTP 5
′
端序列的前4个基码，引物2包含CTP 3
′
端序列的后4个基码和一个限制位点的反义基码；（2）引物3和引物4以GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP基因作为模板，引物3包含GLP
‑
1序列的前4个基码和一个限制位点，引物4包含CTP 3
′
端序列的后4个基码和CTP 5
′
端序列的前4个基码的反义基码；（3）以（1）和（2）反应的基因产物用作引物2和引物3的模板，用于放大GLP
‑1‑
CTP
‑
CTP
‑
CTP。
5.根据权利要求3所述一种长效人重组胰高血糖素样肽
‑
1的制备方法，其特征在于：所述的步骤（S4）包括如下步骤：所述的CTP
‑
GLP
‑
1是HCGβ序列和GLP
‑
1序列的基因被用作模板，其构建方法分三步进行：（1）引物1和引物2以HCGβ基因作为模板，引物1包含CTP 5
′
端序列的前4个基码和一个限制位点，引物2包含CTP 3
′
端序列的后4个基码和GLP
‑
1序列的前4个基码的反义基码；（2）引物3和引物4以GLP
‑
1基因作为模板...

【专利技术属性】
技术研发人员：巴萨姆法瑞斯，
申请(专利权)人：上海延立药业有限公司，
类型：发明
国别省市：