一种重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法，包括以下步骤：S1、按照现有方法提取大肠杆菌SDB2基因组，设计PCR引物，以大肠杆菌SDB2基因组为模板进行PCR扩增；S2、将目标PCR产物与原核表达载体pET28a连接构建出重组质粒pET28a

【技术实现步骤摘要】
一种重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别涉及一种重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法。

技术介绍

[0002]复合多酚类物质是植物性饲料资源中广泛存在的一类抗营养因子，可通过与蛋白质、微量元素等形成络合物，降低养分的消化吸收；也可通过其有毒降解产物影响动物健康和种畜禽繁殖性能，降低畜产品品质等，导致其在工业饲料中的用量受限。漆酶(laccase)可以通过降解多酚类物质，改善植物性饲料资源的饲喂价值，提高植物性饲料资源在工业饲料中的用量，从而达到充分利用非常规饲料资源，降低饲料生产成本的目的。漆酶广泛存在于植物、动物、真菌和细菌中，能够催化氧化包括多酚类、芳胺类、羧酸类在内的250多种有机物发生氧化、聚合等反应，目前主要应用于染料脱色解毒、纸浆、纺织品漂白等领域。
[0003]本专利技术人在研究大肠杆菌的过程中，筛选出了一株野生大肠杆菌SDB2(保藏编号为CCTCC M 20221114)，经研究证实，该野生大肠杆菌SDB2能高效分泌漆酶，但因其安全性不明确、专一性差等缺陷，不利于漆酶的工业化生产，因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、按照现有方法提取大肠杆菌SDB2基因组，设计PCR引物，以大肠杆菌SDB2基因组为模板进行PCR扩增，得到目标PCR产物；其中，大肠杆菌SDB2的保藏编号为CCTCC M 20221114；S2、回收纯化目标PCR产物，将目标PCR产物与原核表达载体pET28a连接构建出重组质粒pET28a
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Lac；S3、将重组质粒pET28a
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Lac转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中培养，筛选出PCR鉴定为阳性的重组菌株BL21/pET28a
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Lac；S4、将重组菌株BL21/pET28a
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Lac接种到液体培养基中进行培养，得到的菌液再接种至诱导培养基中诱导漆酶基因表达；S5、诱导培养结束后离心收集菌体，菌体经悬浮、破碎、离心后得到漆酶蛋白。2.如权利要求1所述的重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法，其特征在于，所述诱导培养基的组成为：0.2～1mM/L的IPTG、1～10mM/L的CuCl2、1～10mM/L的MnSO4、1～10mM/L的FeSO4、1～10mM/L的CaCl2、0.1～2g/L的菜粕汁、0.1～2g/L的白芥子汁、0.1～2g/L的棉籽粕汁。3.如权利要求1所述的重组大肠杆菌高效表达漆酶的方法，其特征在于，所述PCR引物包括YfiH
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F引物和YfiH
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R引物，YfiH
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F引物和YfiH
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R引物的序列如下：YfiH
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F：CACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGAGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书八页序列表电子公布附图四页，
申请(专利权)人：四川省畜牧科学研究院，
类型：发明
国别省市：