热敏型UDG酶突变体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及热敏型UDG酶突变体及其制备方法与应用。本发明专利技术提供的突变体将如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中的第74位甘氨酸突变为丝氨酸，突变后序列为SEQ ID NO.2。与SEQ ID NO.1所示的野生型UDG酶相比，该突变体能够发挥正常的去污染能力，热稳定性较野生型降低，95℃5min可完全失活。本发明专利技术基于大肠杆菌K

【技术实现步骤摘要】
热敏型UDG酶突变体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及热敏型UDG酶突变体及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]UDG酶(尿嘧啶
‑
DNA糖基化酶)可选择性水解单链或双链DNA中的尿嘧啶
‑
糖苷键，切除尿嘧啶并在DNA中产生无碱基位点，该核苷酸链在高温或高pH条件下极易水解断裂。
[0003]PCR反应最常见、最主要的污染物是PCR产物，防污染qPCR试剂盒以dUTP取代dTTP，所以其PCR产物都是含有dU的DNA链；在PCR开始前增加50℃的保温步骤，UDG酶即可将反应体系中已有的U
‑
DNA污染物中的尿嘧啶碱基降解，并在随后变性步骤下DNA链断裂，消除由于污染DNA产生的扩增，从而保证扩增结果的特异性、准确性。
[0004]早期研究的UDG酶野生型UDG酶较为耐热，需要95℃处理长时间处理才能失活，即使95℃5～10min处理仍会残留有少量的活性，导致逆转录或PCR扩增产生的含dU碱基的DNA产物降解，进而干扰接下来的PCR反应。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.UDG酶突变体，其特征在于，具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。2.编码权利要求1所述UDG酶突变体的核酸。3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，其核酸序列如SEQ ID NO:3所示。4.含有权利要求2或3所述核酸的载体。5.转化或转染权利要求4所述载体的宿主。6.权利要求1所述UDG酶突变体的制备方法，其特征在于，包括培养权利要求5所述的宿主，获得含有UDG酶突变体的培养物。7.权利要求1所述的UDG酶突变体、权利要求2或...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓雷，杨俊华，赵巧辉，李桂林，付光宇，杨增利，
申请(专利权)人：郑州伊美诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：