一种利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法技术

本发明专利技术提供一种利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法，包括：S1，采用升汞溶液对细叶远志种子或细叶远志外植体进行消毒3～5次，每次消毒时间为1～3min，消毒完成后，用无菌水清洗并干燥，将干燥的细叶远志种子或细叶远志外植体放置于培养基上培养，获得无菌苗或无菌细叶远志外植体；S2，将无菌苗或无菌细叶远志外植体置于诱芽培养基上培养，得到丛生芽；S3，将丛生芽接种到生根培养基中培养，得到生根幼苗；S4，生根幼苗移植到土壤。本发明专利技术采用升汞溶液每次短时间消毒，消毒多次的方法，较常规一次长时间的消毒方法，大大减少了升汞对细叶远志种子或远细叶志外植体活力的损伤，从而一定程度上降低了组培苗的生产成本。度上降低了组培苗的生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法


[0001]本专利技术涉及药用植物组织培养领域，具体涉及一种药典规定的基源药材细叶远志(Polygala tenuifolia Willd.)快速组培扩繁成苗的方法。

技术介绍

[0002]细叶远志(Polygala tenuifolia Willd.)，别名小草、细草、小鸡腿，其根皮为药材远志，具有安神益智、交通心肾的功效，可用于治疗失眠多梦、健忘惊悸，也具有去痰止咳、治痰多咳嗽等功效。同时，远志和酸枣仁搭配使用，对治疗失眠有极佳的效果。现代药理学研究证明，远志中的有效成分对于机体抗疲劳、抗抑郁等方面具有显著功效。
[0003]细叶远志虽然分布广泛，但由于近年来远志无序采挖严重，野生细叶远志资源逐渐减少。虽然目前山西、陕西等远志道地产区大力推广细叶远志人工种植，但由于技术上的局限性，人工种植的细叶远志种质资源逐年退化，极大制约了细叶远志种植业和远志药材产业的发展。因此，收集保护野生细叶远志种质资源，进而对现有的细叶远志种植品种进行改良，对促进细叶远志种植业和中药材产业发展意义重大。而野生细叶远志种子收集困难，成活率低，而采用采挖的方式对野生资源进行收集保护不仅破坏环境，而且由于细叶远志为直根系植物，根深可达1～2米，因此采挖难度极大。植物组织培养技术是很多现代分子育种手段的基础，然而在育种时对种子或外植体的消毒操作非常关键，目前基本是采用升汞溶液一次性消毒，由于种子或外植体在升汞溶液中连续浸泡时间长，对组织活力损伤较大，大大影响种子萌发率，增加了育种成本。
专利
技术实现思路

[0004]本专利技术根据现在细叶远志产业及种苗繁殖技术的不足，提供了一种利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法，生产工艺简单、生产周期较短、可短期提供充足优质的细叶远志种苗。
[0005]本专利技术通过以下技术方案实现：
[0006]一种利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法，包括如下步骤：
[0007]S1，采用升汞溶液对细叶远志种子进行消毒3～5次，每次消毒时间为1～3min，消毒完成后，用无菌水清洗并干燥，将干燥的细叶远志种子放置于培养基上培养，获得无菌苗；或者，采用升汞溶液对细叶远志外植体进行消毒3～5次，每次消毒时间为1～3min，消毒完成后，用无菌水清洗并干燥，得到无菌细叶远志外植体；
[0008]S2，将无菌苗或无菌细叶远志外植体置于诱芽培养基上培养，得到丛生芽；
[0009]S3，将丛生芽接种到生根培养基中培养，得到生根幼苗；
[0010]S4，生根幼苗移植到土壤。
[0011]优选的，S1中，细叶远志种子用无菌水清洗后，向清洗后的细叶远志种子中加入无水乙醇，加入无水乙醇后部分细叶远志种子沉于无水乙醇底部，部分细叶远志种子浮在无水乙醇上层，将浮在无水乙醇上层的细叶远志种子和无水乙醇去除，将沉于无水乙醇底部
的细叶远志种子干燥；其中，加入无水乙醇至去除无水乙醇两操作之间的间隔时间为20～60s。
[0012]优选的，S1中，所述培养基为改良1/2MS培养基，组分包括：1300～1500mg/L硝酸钾、190～220mg/L磷酸二氢钾、130～150mg/L硫酸镁、200～240mg/L氯化钙、1200～1400mg/L尿素和20～30g/L蔗糖，不包括硝酸铵。
[0013]优选的，S2中，所述诱芽培养基配方包括培养基、1～2mg/L ZR和10g/L蔗糖。
[0014]进一步的，S2中，所述培养基为改良1/2MS培养基，组分包括：硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、尿素和蔗糖，不包括硝酸铵。
[0015]优选的，S3中，所述生根培养基包括：培养基、0.5～1mg/L NAA、1～2mg/LIBA和3.33～5g/L蔗糖。
[0016]进一步的，S3中，所述培养基为改良1/2MS培养基，组分包括：硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、尿素和蔗糖，不包括硝酸铵。
[0017]优选的，S1中，所述细叶远志外植体为细叶远志茎段。
[0018]优选的，S2中，培养条件为：温度为25℃
±
2℃，空气相对湿度为70％～80％，光照2000
‑
3000LX。
[0019]优选的，S3中，培养条件为：温度为25℃
±
2℃，空气相对湿度为70％～80％，光照2000～3000LX。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
[0021]本专利技术为了促进对野生远志种质资源的保护，研发了一种细叶远志快速组培扩繁成苗的新方法。本专利技术采用升汞溶液每次短时间消毒，消毒多次的方法，较常规一次长时间的消毒方法，大大减少了升汞对细叶远志种子或远细叶志外植体活力的损伤，从而一定程度上降低了组培苗的生产成本。
[0022]进一步的，本专利技术较常规种子消毒方法增加了无水乙醇，利用无水乙醇的快速挥发特性，大大减少了细叶远志种子干燥的时间，同时无水乙醇快速浸泡，对细叶远志种子的萌发率影响极小，但对整体消毒效果有极大的提升，大大降低了种子的污染率。并且，利用饱满的细叶远志种子密度大于无水乙醇密度、干瘪的细叶远志种子密度小于无水乙醇密度的特点，完成对细叶远志种子品质的快速区分，获得了品质较高的种子。
[0023]进一步的，本专利技术对1/2MS培养基进行改良，MS培养基里培养的无菌苗存在叶片尖端枯萎的现象，采用了改良培养基后，此现象得到了改善(图6)。且MS培养基里使用的试剂硝酸铵为易爆品，危险性大，且价格昂贵，用尿素替代硝酸铵，不仅增加了试验操作安全性能，同时修改培养基关键元素比例后发现，植物生长状况更好。
[0024]进一步的，本专利技术在诱导生芽阶段使用的激素仅为ZR(玉米素核苷)，而现有技术中的诱导生芽培养基使用6
‑
BA(6
‑
苄基腺嘌呤)和IAA(吲哚乙酸)，从组分上来讲，本专利技术更为简单。并且，本专利技术采用ZR诱导远志产生丛生芽的效果优于6
‑
BA和IAA，丛生芽的产生率达到99.8％。此外，本专利技术在诱导丛生芽的同时，茎两端切口处可分化出愈伤组织(图4(a)，箭头所指)，这些愈伤组织同样可以用于诱导丛生芽。
[0025]进一步的，本专利技术在诱导生根阶段使用的激素为IBA(吲哚丁酸)和NAA，两种激素共同使用，生出的不定根数目多，且粗壮有力。
附图说明
[0026]图1为实施例1中远志种子浮在0.1％升汞(a)上层，沉于无水乙醇(b)底。
[0027]图2为实施例1～3和对比例1～4铺板5天后统计的平板萌发和污染情况。
[0028]图3为实施例1～3和对比例1～4铺板5天后平板的状况。
[0029]图4为实施例4和对比例6诱芽培养基培养30天后丛生芽生长状况：(a)为实施例4本专利技术诱芽培养基培养30天后丛生芽生长状况，箭头所指位置为愈伤组织；(b)为文献报道的诱导培养基1；(c)为文献报道的诱导培养基2。
[0030]图5为生根培养基培养本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，采用升汞溶液对细叶远志种子进行消毒3～5次，每次消毒时间为1～3min，消毒完成后，用无菌水清洗并干燥，将干燥的细叶远志种子放置于培养基上培养，获得无菌苗；或者，采用升汞溶液对细叶远志外植体进行消毒3～5次，每次消毒时间为1～3min，消毒完成后，用无菌水清洗并干燥，得到无菌细叶远志外植体；S2，将无菌苗或无菌细叶远志外植体置于诱芽培养基上培养，得到丛生芽；S3，将丛生芽接种到生根培养基中培养，得到生根幼苗；S4，生根幼苗移植到土壤。2.根据权利要求1所述的利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法，其特征在于，S1中，细叶远志种子用无菌水清洗后，向清洗后的细叶远志种子中加入无水乙醇，加入无水乙醇后部分细叶远志种子沉于无水乙醇底部，部分细叶远志种子浮在无水乙醇上层，将浮在无水乙醇上层的细叶远志种子和无水乙醇去除，将沉于无水乙醇底部的细叶远志种子干燥；其中，加入无水乙醇至去除无水乙醇两操作之间的间隔时间为20～60s。3.根据权利要求1所述的利用细叶远志快速组培扩繁成苗的方法，其特征在于，S1中，所述培养基为改良1/2MS培养基，组分包括：1300～1500mg/L硝酸钾、190～220mg/L磷酸二氢钾、130～150mg/L硫酸镁、200～240mg/L氯化钙、1200～1400mg/L尿素和20～30g/L蔗糖，不包括硝酸铵。4.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘帅，张红，徐杨玉，牛俊峰，陈娟，许宗仁，刘慧丽，梁宗锁，孙玉姣，
申请(专利权)人：陕西科技大学陕西师范大学广东农垦热带农业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：