一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的方法，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术首次提出了灰茶尺蠖VGSC基因C3037T突变是灰茶尺蠖对联苯菊酯产生抗药性的分子标记，建立了快速检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗性的分子标记方法。本发明专利技术特异性引物分别位于两个外显子区域，既可用于检测DNA模板，又可用于检测RNA模板。本发明专利技术所述标记的特异性强，稳定性高，可以快速区分灰茶尺蠖田间种群是否存在C3037T突变及该位点突变是否纯合，为灰茶尺蠖对拟除虫菊酯类的田间抗性提供一种快速的分子检测手段，同时为茶园合理使用杀虫剂提供科学依据。学依据。学依据。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的方法。

技术介绍

[0002]灰茶尺蠖隶属于鳞翅目尺蛾科，该虫适生区范围广，在我国各主要茶区均有分布。由于其食性强、繁殖速度快，经常在局部茶园暴发成灾，对茶叶产量、品质和茶园生态造成严重影响，也是茶园中主要的食叶性害虫。目前，化学防治是该害虫的主要防治方法。我国有效期内茶园用农药，联苯菊酯为登记数量最高的有效成分。联苯菊酯是一类新型拟除虫菊酯类农用杀虫剂品种，具有击倒作用强、广谱、高效、快速、长残效等特点，以触杀作用和胃毒作用为主，无内吸作用。由于该类药剂对鳞翅目害虫具有较强的杀虫活性，且多且对哺乳动物和非目标动物安全，因而在多个农业国家和地区的灰茶尺蠖防治中得到了广泛的应用。
[0003]在茶园害虫防治过程中合理选择农药产品并减量使用是非常必要的。同时，由于长期、大量不合理使用农药，导致昆虫产生严重的抗药性，进一步增加了该虫防治难度。因此，监测灰茶尺蠖的抗药性情况，并对灰茶尺蠖制定耐药性管理，指导茶园科学本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.灰茶尺蠖(Ectropis grisescens Warren)VGSC基因C3037T突变作为分子标记在灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性检测中的应用。2.用于检测灰茶尺蠖VGSC基因C3037T突变的试剂在制备灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性检测的试剂盒中的应用。3.一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的引物对，其特征在于，包括上游引物和下游引物，序列为：上游引物：5
’‑
ATTATGTGGACCGATTCCCTGAC
‑3’
；下游引物：5
’‑
TTTACCAATATCTATGAGCAAGC
‑3’
。4.一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的试剂盒，其特征在于，包含权利要求3所述引物对。5.一种用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取灰茶尺蠖DNA或RNA模板，(2)以步骤(1)所得灰茶尺蠖DNA或RNA模板作为PCR扩增模板，使用权利要求3所述引物对进行PCR扩增，(3)将步骤(2)PCR扩增产物进行测序，如果其中对应于灰茶尺蠖VGSC基因3037位的核苷酸序列为C，则为野生型；如果其中对应于灰茶尺蠖VGSC基因3037位的核苷酸序列为T，则为耐药型；如果其中对应于灰茶尺蠖VGSC基因3037位的核苷酸序列包含C和T两种，则为杂合型。6.如权利要求5所述用于检测灰茶尺蠖对联苯菊酯抗药性的方法，其特征在于，步骤(1)中提取灰茶尺蠖DNA的方法包括：先将采集的灰茶尺蠖消毒和清洗，与裂解液混合研磨至灰茶尺蠖组织研磨充分；65℃金属浴消化60min。随后沸水浴10min使裂解液中的蛋白酶K失活；12000rpm离心1min，所获得的上清液即为灰...

【专利技术属性】
技术研发人员：王知知，陈学新，陈雨思，袁瑞忠，叶熹骞，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：