具有融合的干扰素-β突变蛋白和抗体的重组蛋白以及包含其的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及：一种重组蛋白，在所述重组蛋白中氨基酸残基被取代的干扰素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有融合的干扰素
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β
突变蛋白和抗体的重组蛋白以及包含其的药物组合物


[0001]本申请要求享有于2020年4月29日提交的韩国专利申请No.10
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2020
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0052911的优先权，其全部内容为本申请的参考。
[0002]本专利技术涉及一种重组蛋白，其多核苷酸、其表达载体和其宿主细胞，以及一种包含所述重组蛋白作为活性成分的用于治疗癌症的药物组合物，所述重组蛋白中氨基酸残基被取代的干扰素
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β突变蛋白与结合特定抗原的抗体融合在一起。

技术介绍

[0003]干扰素(IFN)是在免疫中发挥重要作用的主要细胞因子之一，并且已知具有很强的抗癌作用。干扰素分为I型干扰素(IFN
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α和IFN
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β)、II型干扰素(IFN
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γ)和III型干扰素(IFN
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λ)。
[0004]I型干扰素表现出抗病毒和抗增殖作用，并且甚至在癌症免疫监视中也发挥着重要的作用，用以识别肿瘤特异性抗原，以消除肿瘤细胞。
[0005]I型干扰素的信号传导是通过干扰素受体的活性逐步激活多种酶，与此同时，诸如STAT1和STAT2的转录因子也发挥作用。这种信号传导激活了免疫系统，并且对于各种抗癌剂显示其抗癌效果是必需的，例如诸如蒽环类药物的化疗药物、靶向诸如人类表皮生长因子受体2(HER2)和表皮生长因子受体(EGFR)的生长因子受体的抗体、佐剂的施用，以及溶瘤病毒疗法等。特别地，曲妥珠单抗是靶向HER2的抗体癌症治疗剂，并且由于MUC4的过表达而会对治疗产生抗性。参与这种抗性机制的信号传导物质之一pSTAT3具有与两种相同物质聚合的形式(pSTAT3同源二聚体)，并且已知被pSTAT1抑制。因此，当激活pSTAT1的I型干扰素与曲妥珠单抗联合使用时，可以预期抗癌效力增加。
[0006]干扰素
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β(IFN
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β)具有比干扰素
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α(IFN
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α)更强的细胞生长抑制作用。特别地，当与抗癌剂一起使用时，干扰素
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β的抗增殖活性和协同作用是非常优异的。然而，已知的是，使用干扰素的治疗剂具有高细胞毒性，使接受治疗的受试者显示出诸如发烧(80％)、肌痛(73％)、头痛(50％)、疲劳(50％)、不适(50％)等症状。此外，干扰素
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β是一种具有强疏水性的蛋白质，并且易于聚集，从而会降低生物活性和生产率。此外，干扰素
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β的半衰期较短，因此存在需要频繁施用的缺点。因此，为了开发使用干扰素的治疗剂，需要最小化由干扰素引起的限制。
[0007]因此，本专利技术人开发了通过位点特异性突变而改变干扰素的物理性质，从而提高生产率和减少聚集的突变干扰素
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β。这种干扰素
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β突变蛋白可与抗体癌症治疗剂融合，用作表现出优异抗癌效果的新的抗癌治疗剂。
[0008]公开内容
[0009]技术问题
[0010]本专利技术的一个方面是提供一种重组蛋白，其包含干扰素
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β(IFN
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β)突变蛋白，在所述突变蛋白中第17位的氨基酸残基被丝氨酸取代，并且第27位的氨基酸残基被苏氨酸取
代；以及与所述干扰素
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β突变蛋白直接或间接共价结合的抗体或其片段。
[0011]本专利技术的另一方面是提供一种编码所述重组蛋白的多核苷酸。
[0012]本专利技术的另一方面是提供一种包含所述多核苷酸的表达载体。
[0013]本专利技术的另一方面是提供一种用所述表达载体转化的宿主细胞。
[0014]本专利技术的另一方面是提供一种用于治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物包含所述重组蛋白作为活性成分。
[0015]本专利技术的另一方面是提供一种用于治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物由所述重组蛋白组成。
[0016]本专利技术的另一方面是提供一种用于治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物基本由所述重组蛋白组成。
[0017]本专利技术的又一个方面是提供一种用于在重组蛋白的生产或分离和纯化期间提高蛋白稳定性的方法，所述方法包括：
[0018](a)培养转化为表达包含与干扰素
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β突变蛋白直接或间接共价结合的抗体或其片段的重组蛋白的宿主细胞；以及
[0019](b)从所培养的宿主细胞或其培养产物中分离和纯化包含与所述干扰素
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β突变蛋白直接或间接共价结合的抗体或其片段的重组蛋白，
[0020]其中，在制备包含与干扰素
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β突变蛋白直接或间接共价结合的抗体或其片段的重组蛋白期间，转化所述宿主细胞以表达所述重组蛋白，在所述重组蛋白中，第17位的氨基酸—干扰素
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β突变蛋白的半胱氨酸被修饰为另一氨基酸。
[0021]本专利技术的再一个方面是提供所述重组蛋白用于制备抗癌剂的用途。
[0022]本专利技术的又一个方面是提供一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括使有此需要的受试者施用有效量的含有所述重组蛋白的组合物。
[0023]技术方案
[0024]根据本专利技术的示例性实施方式，提供了一种重组蛋白，其包含干扰素
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β(IFN
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β)突变蛋白，在所述突变蛋白中第17位的氨基酸残基被丝氨酸取代，并且第27位的氨基酸残基被苏氨酸取代；以及与所述干扰素
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β突变蛋白直接或间接共价结合的抗体或其片段。
[0025]干扰素
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β是一种具有5个α螺旋的球状蛋白，大小为22kDa。此外，干扰素
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β具有多种免疫活性，例如，抗病毒活性、细胞生长抑制或抗增殖活性、淋巴细胞细胞毒性增强活性、免疫调节活性、靶细胞分化诱导或抑制活性、巨噬细胞活化活性、细胞因子产产量活性增加、细胞毒性T细胞增效活性、自然杀伤细胞增加活性等。因此，据报道，它可以有效治疗癌症、自身免疫性疾病、病毒感染、HIV相关疾病、丙型肝炎、类风湿性关节炎等。然而，干扰素
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β是一种强疏水性蛋白质，表现出聚集现象，生物活性和生产率低，并且半衰期短，因此限制了干扰素
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β的应用。因此，在本专利技术中，通过诱导干扰素
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β基因的定点诱变，开发了一种与其中不发生突变的野生型干扰素
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β相比物理性质得到改善的干扰素
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β突变蛋白。
[0026]在干扰素
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β突变蛋白中，第17位的半胱氨酸(C)被丝氨酸(S)取代，第27位的精氨酸(R)被苏氨酸(T)取代，从而在第80位和第25位的氨基酸残基中包含糖基。在这种情况下，干扰素
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β突变蛋白可以由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或编码其的SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列定义。这种干扰素<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含干扰素
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β突变蛋白以及直接或间接与所述干扰素
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β突变蛋白共价结合的抗体或其片段的重组蛋白，在所述干扰素
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β突变蛋白中，第17位的氨基酸残基被丝氨酸取代，并且第27位的氨基酸残基被苏氨酸取代。2.权利要求1的重组蛋白，其中所述干扰素
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β突变蛋白在第80位和第25位的氨基酸残基中包含糖基。3.权利要求1的重组蛋白，其中所述干扰素
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β突变蛋白由SEQ ID NO:1的氨基酸序列定义。4.权利要求1的重组蛋白，其中所述抗体或其片段是选自以下的至少一种：曲妥珠单抗、西妥昔单抗和阿替利珠单抗。5.权利要求1的重组蛋白，其中所述干扰素
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β突变蛋白与抗体或其片段通过肽接头彼此连接。6.一种多核苷酸，其编码权利要求1的重组蛋白。7.权利要求6的多核苷酸，其中所述多核苷酸由SEQ ID NO:9、10或11的核苷酸序列定义。8.一种表达载体，其包含权利要求6的多核苷酸。9.一种宿主细胞，其用权利要求8的表达载体转化。10.一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含权利要求1的重组蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑该敏，李赞揆，李智善，崔俊英，金娜荣，李镕辰，
申请(专利权)人：瑷备恩有限公司，
类型：发明
国别省市：