【技术实现步骤摘要】
一种FRET蛋白质传感器、应用、重组菌株、重组质粒和构建方法
[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及重组蛋白LBP
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mTurquoise2和LBP
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mNeonGreen构成的FRET蛋白质传感器及其应用，以及相关的重组菌株、重组质粒和构建方法。
技术介绍
[0002]内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的产物，是常见的致热源，属于强免疫刺激因子，致使机体产生一系列炎症反应，对人体危害巨大。内毒素主要检测方法为鲎试验法(国家药典规定方法)，检测限为0.05EU/mL，原理为海洋节肢动物“鲎”的血液变形细胞，能被细菌内毒素激活而凝固，通过对凝胶的分析以达到对内毒素的定性定量检测。但是鲎试验法存在假阳型结果，所需鲎试剂需要捕杀国家保护动物鲎，与环境保护相悖。所以需要设计更合理的检测环境中细菌内毒素的方法。
[0003]荧光共振能量转移(FRET)：是一种光物理现象，通过偶极
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偶极相互作用，将供体荧光团的共振能量以非辐射方式转移到受体上。当供体和受体之间距离范围为1
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种由重组蛋白LBP
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mTurquoise2和重组蛋白LBP
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mNeonGreen构成的FRET蛋白质传感器，重组蛋白LBP
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mTurquoise2氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重组蛋白LBP
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mNeonGreen氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.根据权利要求1所述的FRET蛋白质传感器的用途为检测环境样品中的细菌内毒素。3.一种用于表达权利要求1所述重组蛋白LBP
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mTurquoise2的重组酵母菌GS115/pPIC9K
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LBP
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mTurquoise2和一种用于表达权利要求1所述重组蛋白LBP
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mNeonGreen的重组酵母菌GS115/pPIC9K
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LBP
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mNeonGreen。4.根据权利要求1所述的FRET蛋白质传感器，其特征在于构建用于表达重组蛋白LBP
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mTurquoise2和重组蛋白LBP
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mNeonGreen的重组菌株的方法为：用SalⅠ单酶切构建的重组载体pPIC9K
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LBP
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mTurquoise2和pPIC9K
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LBP
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mNeonGreen，电转化进入毕氏酵母GS115，使用抗遗传霉素G418筛选高拷贝转化子，对高拷贝转化子进行基因组PCR鉴定。5.根据权利要求4所述的FRET蛋白质传感器，其特征在于诱导重组菌株表达重组蛋白的方法为：通过重组毕氏酵母菌GS115/pPIC9K
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LBP
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mTurquoise2和GS115/pPIC9K
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LBP
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