一种模块化制备抗体的方法技术

本发明专利技术公开了一种模块化制备抗体的方法，包括载体设计、抗体库构建、抗体筛选、抗体分模块表达以及将分模块表达的抗体可变区和恒定区体外组装等步骤。该方法将SpyTag/SpyCatcher应用于抗体筛选和抗体表达环节，其中SpyTag标签插入抗体库展示载体实现标签和抗体可变区的融合表达，抗体恒定区部分与SpyCatcher融合表达形成通用的抗体组装模块，有效地解决了全长抗体需要哺乳表达的问题，可以实现抗体低成本，高通量，高效率制备。高效率制备。高效率制备。

【技术实现步骤摘要】
一种模块化制备抗体的方法


[0001]本专利技术属于抗体筛选与表达
，具体涉及一种抗体可变区和恒定区分模块表达后自动组装成完整抗体的方法。

技术介绍

[0002]机体是在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。抗体是由重链和轻链构成的异源四聚体，重链和轻链之间通过二硫键连接。轻链有κ和λ两种，重链有μ、δ、γ、ε和α五种。抗体的主要功能是结合抗原、激活补体和结合细胞等，是科学研究、疾病诊断、药物开发的重要原料。
[0003]抗体库技术是利用分子生物学方法，扩增抗体重链和轻链的可变区基因，重组到展示载体，并转化宿主细胞获得抗体文库，结合抗原亲和力筛选获得特定抗体及其序列的技术。抗体库技术模拟动物体内抗体产生的过程，通过抗原亲和力筛选获得单克隆抗体。相对于杂交瘤技术，抗体库技术无需免疫动物，理论上多样性达到10
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的抗体库，包含识别所有抗原的抗体。同时，由于抗体库技术无动物免疫过程，毒性蛋白、自身蛋白均可通过此技术获得抗体。按照抗体基因的来源，抗体库分为天然库、免本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种模块化制备抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、载体设计：将Spytag片段与第一质粒体连接得到第一重组载体，将SpyCatcher片段与第二质粒连接得到第二重组载体，所述第二质粒中含有抗体恒定区基因片段；S2、抗体库构建：将抗体可变区基因插入第一重组载体中，且所得连接产物转染宿主菌后，再与噬菌体混合培养，分离噬菌体后重悬即得噬菌体展示抗体库溶液；S3、抗体筛选：利用包被有抗原蛋白的树脂从噬菌体展示抗体库溶液中淘选识别该抗原蛋白的单链抗体，再通过酶联免疫法进一步淘选得到阳性的单克隆噬菌体；S4、抗体分模块表达：采用阳性的单克隆感染宿主菌，培养表达并纯化后得到可变区模块；将第二重组载体转染哺乳动物细胞，培养表达并纯化后得到恒定区模块；S5、将可变区模块和恒定区模块组装得到全长的抗体。2.根据权利要求1所述模块化制备抗体的方法，其特征在于，步骤S1具体为：以第一质粒为模板，用SEQ ID NO:1～2所示的引物对扩增得到片段1，再将片段1和第一质粒分别酶切后连接；以SEQ ID NO:3所示序列为模板，用SEQ ID NO:4～5所示的引物对扩增得到片段2，再将片段2和第二质粒分别酶切后连接。3.根据权利要求2所述模块化制备抗体的方法，其特征在于，所述第一质粒为pCantab 5E质粒，所述第二质粒为pSecTag2A
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Fc2质粒。4.根据权利要求1所述模块化制备抗体的方法，其特征在于，步骤S2所述的抗体可变区基因的制备方法为：用SEQ ID NO:6～7所示的引物对扩增天然纳米抗体库的FR1到FR3，得到片段3，再将片段3与CDR3基因拼接，即可获得抗体基因。5.根据权利要求4所述模块化制备抗体的方法，其特征在于，所述CDR3基因的合成方法为：用SEQ ID NO:8～9所示的引物对扩增天然纳米抗体库的FR4，得到片段4；片段4酶切后与NNNR1连接，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗绍祥，杨旭，高霞，杨洁，舒芹，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：