一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法。用甲醇法提取代谢产物后，使用Nexera X2LC

【技术实现步骤摘要】
一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法


[0001]本专利技术属于血液标志物研究领域，具体涉及一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法，是一种稳定、重现性好的利用这种质谱方法鉴定差异标志物的应用。

技术介绍

[0002]疾病标志物是指能客观测量并评价疾病状态下，系统、器官、组织及细胞等结构或功能发生改变的生化指标。它对于疾病的诊断、预后判断以及药效评估都至关重要。肾病综合征是由于肾小球滤过膜对血浆蛋白通透性增高、大量血浆蛋白从尿中丢失及引发一系列病理改变的临床综合征(Saleem M A.Molecular stratification of idiopathic nephrotic syndrome[J].Nature reviews Nephrology,2019,15(12):750
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65.)。目前，肾病综合征的诊断主要还是基于对固醇类药物反应以及肾穿刺，而体液型生物标志物仍不明确。通过检测方法，我们发现甘露醇、山梨醇、半乳糖醇、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和胆红素或可作为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血液中肾病综合征差异标志物的纯化及质谱鉴定方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)甲醇法提取肾病综合征患者血液中的所有代谢物，用HPLC级甲醇提取血清样本，在真空旋干仪中旋干，测定前用复溶体系重新溶解，离心后取上清上液相质谱分析系统；(2)选择日本岛津的Nexera X2 LC
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30AD超高效液相系统和SCIEX QTRAP 6500+的LC
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MS系统进行分析，色谱柱为Waters Atlantis TMPremier BEH Z
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HILIC柱，2.1
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100mm，1.7μm；(3)根据标志物的理化性质选择合适的离子模式进行检测，正离子模式：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸或负离子模式：甘露醇、山梨醇、半乳糖醇、胆红素；设置标准品为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、甘露醇、山梨醇、半乳糖醇、胆红素，浓度梯度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、5、10、20、50、100、200、500、1000ng/mL；(4)根据质谱结果，设置流动相，使甘露醇、山梨醇、半乳糖醇三种糖物质同分异构体得以区分；(5)更换洗脱梯度时间，直到6个标志物都能被准确区分开。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中血清样本用真空旋干仪旋干或用N2在不加热或室温的情况下干燥。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)测定前不超过48h用复溶体系重新溶解...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡丽丹，毛建华，王卫华，陈祥军，陈佳，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：