一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法技术

本发明专利技术涉及生物化学工程技术领域，具体为一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法，包括如下步骤：步骤1、定量LDL：称取一定量新鲜的LDL，先用0.1mol/L的PBS缓冲液稀释，得到50mg/L的LDL溶液，再加入1μmol/L的铜锌超氧化物歧化酶和4μmol/L的ZnSO4，使LDL溶液的终浓度为5mmol/L；步骤2、合成OX

【技术实现步骤摘要】
一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法


[0001]本专利技术涉及生物化学工程
，具体为一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法。

技术介绍

[0002]动脉粥样硬化是引起冠心病死亡的主要原因之一。大量的体内外实验证明，动脉粥样硬化的形成过程中氧化低密度脂蛋白(OX
‑
LDL)是引起病理变化和损伤最主要的因子。OX
‑
LDL是多种具有生物活性物质的共存体，具有强免疫源性，能激发机体免疫反应，产生抗体，其介导的免疫反应在粥样斑块形成和发展中起重要作用。
[0003]天然低密度脂蛋白(LDL)中含有大量不饱和脂肪酸经过氧化引起一系列的连锁的自由基链式反应，最终生成多种活性醛，再与LDL中的载脂蛋白ApoB结合，产生新的抗原决定簇，最终形成Ox
‑
LDL。经过氧化修饰后形成的Ox
‑
LDL还可促进炎性因子和黏附分子的分泌，增加巨噬细胞摄入LDL的速度，导致胆固醇在巨噬细胞内的蓄积并使之转变为泡沫细胞。
[0004]授权公告号为CN101691562B的专利技术公开了一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法，该方法包括合成oxLig
‑
1改良方法；以oxLig
‑
1为刺激物用于促进PKC和NF
‑
κB信号通路的活化；以oxLig
‑
1能诱导单核细胞(THP
‑
1)分化成巨噬细胞。该专利技术建立既费时间又耗经费。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法，包括如下步骤：
[0007]步骤1、定量LDL：称取一定量新鲜的LDL，先用0.1mol/L的PBS缓冲液稀释，得到50mg/L的LDL溶液，再加入1μmol/L的铜锌超氧化物歧化酶和4μmol/L的ZnSO4，使LDL溶液的终浓度为5mmol/L；
[0008]步骤2、合成OX
‑
LDL：将LDL溶液于36.0
‑
37.0℃水浴24h后，转入透析袋中，先在含5mol/L CuSO4的PBS缓冲液中室温透析24h，然后在含0.1％EDTA
‑
2Na的PBS缓冲液中室温透析24h，除菌保存；
[0009]步骤3、建立泡沫细胞模型：将RAW264.7细胞置于含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液中，于36.0
‑
37.0℃恒温培养24h后，弃原液，加入含3％胎牛血清的RPMI 1640培养液和OX
‑
LDL，共同孵育24h，得到泡沫细胞。
[0010]可选的，步骤1中，制备得到的LDL溶液于2
‑
8℃保存。
[0011]可选的，步骤2中，第一次透析的温度为36.0
‑
37.0℃，第二次透析的温度为4℃。
[0012]可选的，步骤2中，透析后的溶液用0.22um微孔滤膜过滤除菌，制备得到的OX
‑
LDL
于4℃保存。
[0013]可选的，步骤2中，OX
‑
LDL的浓度为80mg/L。
[0014]可选的，步骤3中，泡沫细胞的细胞浓度控制在106个/mL，每两天换培养液一次，每四天传代一次，所述培养液为含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具备以下有益效果：
[0016]1.本专利技术科学合理，复制方法简单，模型稳定，建立了动脉粥样硬化疾病中的病理性细胞模型，为研究动脉粥样硬化的致病机制提供了研究平台，也为评价抗动脉粥样硬化药物的疗效及筛选新药提供了有力工具；
[0017]2.本专利技术通过铜锌超氧化物歧化酶和LDL共混，避免LDL在合成OX
‑
LDL前被氧化，提高LDL溶液存放时间，为平稳建立细胞模型提供基础，并通过ZnSO4和LDL共混，控制合成的OX
‑
LDL中的Cu/Zn比值平衡，避免OX
‑
LDL中Cu元素失衡，为研究冠心病与机体微量元素代谢变化提供基础。
具体实施方式
[0018]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]实施例：本专利技术提供了一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法，包括如下步骤：
[0020]步骤1、定量LDL：称取一定量新鲜的LDL，先用0.1mol/L的PBS缓冲液稀释，得到50mg/L的LDL溶液，再加入1μmol/L的铜锌超氧化物歧化酶和4μmol/L的ZnSO4，使LDL溶液的终浓度为5mmol/L；
[0021]步骤2、合成OX
‑
LDL：将LDL溶液于36.0
‑
37.0℃水浴24h后，转入透析袋中，先在含5mol/L CuSO4的PBS缓冲液中室温透析24h，然后在含0.1％EDTA
‑
2Na的PBS缓冲液中室温透析24h，除菌保存；
[0022]步骤3、建立泡沫细胞模型：将RAW264.7细胞置于含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液中，于36.0
‑
37.0℃恒温培养24h后，弃原液，加入含3％胎牛血清的RPMI 1640培养液和OX
‑
LDL，共同孵育24h，得到泡沫细胞。
[0023]在上述实施例的基础之上，步骤1中，制备得到的LDL溶液于2
‑
8℃保存。步骤2中，第一次透析的温度为36.0
‑
37.0℃，第二次透析的温度为4℃。步骤2中，透析后的溶液用0.22um微孔滤膜过滤除菌，制备得到的OX
‑
LDL于4℃保存。步骤2中，OX
‑
LDL的浓度为80mg/L。步骤3中，泡沫细胞的细胞浓度控制在106个/mL，每两天换培养液一次，每四天传代一次，所述培养液为含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液。
[0024]尽管已经示出和描述了本专利技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本专利技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本专利技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动脉粥样硬化细胞模型的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1、定量LDL：称取一定量新鲜的LDL，先用0.1mol/L的PBS缓冲液稀释，得到50mg/L的LDL溶液，再加入1μmol/L的铜锌超氧化物歧化酶和4μmol/L的ZnSO4，使LDL溶液的终浓度为5mmol/L；步骤2、合成OX
‑
LDL：将LDL溶液于36.0
‑
37.0℃水浴24h后，转入透析袋中，先在含5mol/LCuSO4的PBS缓冲液中室温透析24h，然后在含0.1％EDTA
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2Na的PBS缓冲液中室温透析24h，除菌保存；步骤3、建立泡沫细胞模型：将RAW264.7细胞置于含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液中，于36.0
‑
37.0℃恒温培养24h后，弃原液，加入含3％胎牛血清的RPMI 1640培养液和OX
‑
LDL，共同孵育24h，得到泡沫细...

【专利技术属性】
技术研发人员：张梦媛，
申请(专利权)人：江苏食品药品职业技术学院，
类型：发明
国别省市：