【技术实现步骤摘要】
具有肝癌细胞毒性和
α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
丝
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缬
‑
亮
‑
亮肽及制备方法
[0001]本专利技术属于生物制品的提取制备
,涉及具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
‑
亮肽(Trp
‑
Ser
‑
Val
‑
Leu
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Leu环肽)提取和纯化。
技术介绍
[0002]环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
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亮肽是从一种蛙粪霉(Basidiobolussp. )培养物中分离制备得到的具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的生物活性物质。
[0003]蛙粪霉(Basidiobolussp. )为虫霉目蛙粪霉科蛙粪霉属的真菌;在我国常见的有蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉和裂孢蛙粪霉等。上述菌种可从土壤和两栖类动物粪便中分离得到。
[0004]细胞毒性:目前,癌症在中国患发率持续增长,已成为不可忽视的公共卫生挑战。据公开数据统计,2020年全国新发肿瘤病例和死亡人数均名列全球第一,肿瘤预防与治疗道阻且。在癌症的治疗过程中,相当重要的一个环节就是药物治疗,使用有效的抗癌药物,可以帮助患病的人获得更长的生存时间。通过细胞毒性实验可以评估药物的有效 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
‑
亮肽,其特征在于:所述环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
‑
亮肽的结构式如下:所述环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
‑
亮肽是由 色氨酸、丝氨酸、缬氨酸、亮氨酸和亮氨酸,以酰胺键连接而成的十五元环状五肽;所述环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
‑
亮肽具有肝癌细胞毒性和α
‑
葡萄糖苷酶抑制活性;对肝癌细胞HepG2的半抑制浓度(IC
50
)为:73.85 μg/mL,α
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葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC
50
)为:198.78 μg /mL。2.权利要求1所述具有肝癌细胞毒性和α
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葡萄糖苷酶抑制活性的环色
‑
丝
‑
缬
‑
亮
‑
亮肽的制备方法,其特征在于操作步骤如下:(1)菌种培养将蛙粪霉(Basidiobolussp.)经过斜面菌种培养、二级液体种子培养、三级液体种子培养和四级培养,得到液体的最终发酵物或固体的最终发酵物;所述蛙粪霉(Basidiobolussp.)为蛙生蛙粪霉、固孢蛙粪霉或裂孢蛙粪霉中的一种;(2)最终发酵物中有效成分的提取和精制用甲醇或乙醇提取最终发酵物中的有效成分,采用反相色谱方法纯化,得到白色粉末状的环色
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丝
‑
缬
‑
亮
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亮肽。3.根据权利要求2所述制备方法,其特征在于所述步骤(1)的具体操作如下:(1.1)斜面种子培养将蛙粪霉菌株接种于土豆琼脂(PDA)斜面培养基,于25~36℃恒温、培养4~8d,得到一级菌种;(1.2)二级液体种子培养将一级菌种接种至液体摇瓶培养基培养;在大于等于100 ml三角瓶中加入30~50%三角瓶体积的液体培养基,每个三角瓶接种1~3支斜面菌种,在恒温振荡培养箱中,温度25~36℃、转速150~250 rpm条件下,培养3~7d,即得到二级菌种;液体摇瓶培养基由葡萄糖25.0~50.0 g/L、麦芽提取物10.0~30.0 g/L、蛋白胨2.0~6.0 g/L、酵母浸出粉1.0~4.0 g/L、氯化钾(KCl)0.3~2.0 g/L、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)0.3~...
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