改进的多重化抑制性RNA支架制造技术

本申请涉及RNA干扰领域，更具体地说，应用于免疫疗法例如过继性细胞疗法(ACT)的RNA干扰。在这里，提出了设计成下调多个靶标的多个shRNA。还提出了编码shRNA的多核苷酸、载体和表达此类shRNA的细胞，单独地或与感兴趣的蛋白如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)组合。这些细胞特别适合用于免疫疗法。这些细胞特别适合用于免疫疗法。这些细胞特别适合用于免疫疗法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改进的多重化抑制性RNA支架
专利

[0001]本申请涉及RNA干扰领域，更具体地说，应用于免疫疗法例如过继性细胞疗法(ACT)的RNA干扰。在这里，提出了设计成下调多个靶标的多个shRNA。还提出了编码shRNA的多核苷酸、载体和表达此类shRNA的细胞，单独地或与感兴趣的蛋白如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)组合。这些细胞特别适合用于免疫疗法。

技术介绍

[0002]在难以有效方式转导的细胞中同时下调多个靶标是一个已知问题。多重基因组工程化方法通常很麻烦。在寻求解决多重基因组工程化遇到的问题时，可以考虑提供敲低而不是基因敲除可能性的系统，这将带来更大的灵活性(例如，时间调控将成为可能)。理想情况下，这些系统也应该不那么麻烦(这样就不需要为每个靶标工程设计单独的蛋白，或者可以在单个转导步骤中实现下调)，并且应当是足够有效且特异的。
[0003]可以考虑的一种解决方案是RNA干扰(RNAi)。植物和动物中存在几种RNAi基因调节机制。第一种是通过表达小的非编码RNA，称为microRNA(微小RNA，“miRNA”)。miRN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种适合在工程化免疫细胞中表达的载体，其包含编码至少一个RNA干扰分子的核酸序列，所述至少一个RNA干扰分子具有选自以下的支架：miR
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106a支架、miR
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18b支架、miR
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20b支架、miR
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19b
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2支架、miR
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92
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2支架和miR
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363支架。2.根据权利要求1所述的载体，其中至少一个支架选自miR
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106a支架、miR
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18b支架和miR
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20b支架。3.根据权利要求1或2所述的载体，其中所述至少一个RNA干扰分子是至少两个多重化RNA干扰分子。4.一种工程化细胞，其包含：编码感兴趣的蛋白的第一外源核酸分子，和编码至少一个RNA干扰分子的第二核酸分子，所述至少一个RNA干扰分子具有选自以下的支架：miR
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106a支架、miR
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18b支架、miR
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20b支架、miR
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19b
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2支架、miR
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92
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2支架和miR
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363支架。5.根据权利要求4所述的工程化细胞，其中所述至少一个RNA干扰分子在所述支架内包含与其天然靶序列不同的靶序列。6.根据权利要求5所述的工程化细胞，其中所述靶序列为18至23个核苷酸。7.根据权利要求5或6所述的工程化细胞，其中所述RNA干扰分子通过靶序列的碱基对互补性针对工程化细胞中的靶标。8.根据权利要求4至7中任一项所述的工程化细胞，其是工程化免疫细胞。9.根据权利要求4至8中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞选自T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞、干细胞、祖细胞和iPSC细胞。10.根据权利要求4至9中任一项所述的工程化细胞，其中所述感兴趣的蛋白是受体，特别是嵌合抗原受体或TCR。11.根据权利要求4至10中任一项所述的工程化细胞，其中所述至少一个RNA干扰分子是至少两个多重化RNA干扰分子。12.根据权利要求11所述的工程化细胞，其中所述至少两个多重化RNA干扰分子是至少三个多重化RNA干扰分子。13.根据权利要求11或12所述的工程化细胞，其中所述至少两个多重化RNA干扰分子中的至少一个具有选自miR
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106a支架和miR
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20b支架的支架。14.根据权利要求11或12所述的工程化细胞，其中所述至少两个多重化RNA干扰分子中的至少一个具有miR
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18b支架，并且所述支架已被修饰以减少茎区中的错配和/或凸起。15.根据权利要求11至14中任一项所述的工程化细胞，其中所述至少两个多重化RNA干扰分子中的全部多重化RNA干扰分子都包含选自以下的miR
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【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：塞利亚德肿瘤股份公司，
类型：发明
国别省市：