本发明专利技术公开了一种肝脏靶向载药外泌体及应用和治疗肝脏疾病的药物；由用于治疗肝脏疾病的药物导入到具有肝脏组织靶向性的外泌体中获得，具有肝脏组织靶向性的外泌体来源于胆囊或胆管部位的细胞；肝脏疾病治疗药物包含上述肝脏靶向载药外泌体。本发明专利技术使用胆囊或胆管部位的细胞分泌的外泌体不需要做任何修饰就可以在肝脏富集，用胆囊或胆管部位的细胞来源的外泌体，解决了外泌体产量的问题，具有很好的应用前景；而且用胆囊或胆管部位的细胞来源的外泌体可以装载不同药物或活性分子，通过靶向肝脏组织给药，提高肝脏疾病的治疗效果，降低药物毒副反应。低药物毒副反应。低药物毒副反应。
【技术实现步骤摘要】
一种肝脏靶向载药外泌体及应用和治疗肝脏疾病的药物
[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及一种肝脏靶向载药外泌体及应用和治疗肝脏疾病的药物。
技术介绍
[0002]肝脏疾病是发生在肝脏的所有疾病的总称。包括感染性疾病、肿瘤性疾病、血管性疾病、代谢性疾病、中毒性疾病、自身免疫性疾病、遗传性疾病、肝内胆管结石病等。感染性疾病又包括病毒感染、细菌感染、寄生虫感染等，如病毒性肝炎、肝包虫病等。肝癌是死亡率仅次于胃癌、食道癌的第三大常见恶性肿瘤，初期症状并不明显，晚期主要表现为肝痛、乏力、消瘦、黄疸、腹水等症状。临床上一般采取西医的手术、放化疗与中药结合疗法，但晚期患者因癌细胞扩散而治愈率较低。
[0003]传统的化学疗法由于药物非特异性分布，难以或较少到达目标部位，药物在体内的血药浓度低，往往达不到理想的治疗效果，并且可能产生一定的不良反应。肝主动靶向制剂作为一种新型给药系统，可将药物靶向输送至肝细胞，提高靶区的药物浓度，实现增效减毒的作用。近年来医药工作者一直致力于肝脏靶向递药系统的开发。现有的肝脏靶向系统可以分为，肝实质细胞靶向给药系统、肝非实质细胞靶向给药系统以及肝肿瘤细胞靶向给药系统。
[0004]例如肝实质细胞表面含有去唾液酸糖蛋白受体、甘草次酸受体等多种受体，利用受体与其相应的配体间的特异性结合，可实现药物的肝主动靶向。甘露醇受体属于C型凝集素样受体，以其与甘露糖的结合特性而得名，在肝内皮细胞表面大量存在，具有广泛的结合特异性，利用该机制用于靶向治疗。单克隆抗体简称单抗，是由一种识别特定抗原决定簇的杂交瘤细胞株分泌，具有特异性强、灵敏度高等特点，已被广泛用于生物医药领域。单克隆抗体可与放射性同位素、化疗药物及毒素等，结合形成免疫偶联物，是目前肝脏疾病的治疗途径之一。抗体介导的肝靶向给药系统中单抗是主要组成部分，抗体自身的强弱直接影响靶向治疗效果。以上的靶向系统均是在分子水平实现的靶向，靶向效果不大于30％，靶向效力低，存在脱靶现象。因此制备一种高效靶向肝组织的载药体系是治疗肝脏疾病尤其是肝癌的理想选择。
[0005]目前用于治疗肝癌的化疗药物有很多种，比如氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂、卡培他滨、吉西他滨、伊立替康、奥沙利铂等。化疗药虽然有良好的抗肿瘤作用，但因为较弱的靶向作用导致其临床上较强的毒副作用。
[0006]因此，制备一种高效的肝靶向外泌体载药体系对肝部相关疾病进行治疗是亟需的。
技术实现思路
[0007]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种肝脏靶向外泌体及应用和治疗肝脏疾病的药物，通过靶向肝脏组织给药，提高肝脏疾病的治疗效果，降低药物毒副
反应。
[0008]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0009]本专利技术第一方面提供了一种肝脏组织靶向外泌体，所述靶向外泌体来源于胆囊或胆管部位的细胞。
[0010]术语“外泌体”是一种囊泡，其从细胞向细胞外分泌，或具有由存在于细胞内的脂质双分子层构成的膜结构。外泌体的直径约为30
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1000nm，外泌体在多泡体与细胞膜融合时从细胞中释放出来，或直接从细胞膜中释放出来。已知外泌体发挥运输细胞内的生物分子蛋白、生物活性脂质和RNA(miRNA)的作用，以实现其在介导凝固、细胞间通讯和细胞免疫方面的功能性作用。
[0011]上述外泌体的概念包括微泡。已知外泌体的标记蛋白有CD63、CD81、TSG101等，除此之外，已知的还有细胞表面受体(如：EGFR)，信号传导相关分子、细胞粘附相关蛋白、MSC相关抗原、热休克蛋白、囊泡形成相关Alix等蛋白。
[0012]在一些实施方案中，外泌体直径为约30到约500、直径为约30到约300，直径为约30到约250、直径为约30到约220、直径为约40到约175、约50到约150、约30到约150或约30到约120nm。
[0013]进一步，所述细胞选自正常细胞或其衍生株、癌细胞。
[0014]进一步，所述细胞来源于人或非人类哺乳动物。
[0015]进一步，所述非人类哺乳动物包括非人灵长类动物、啮齿动物、牛、猪、羊、犬、兔、猫、马。
[0016]进一步，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠。
[0017]进一步，所述灵长类动物包括猴、猩猩、狒狒、猿。
[0018]在本专利技术中，所述胆囊或胆管部位的细胞是指来源于胆囊或胆管的细胞或者干细胞诱导分化的胆囊或胆管细胞。所述干细胞包括多能干细胞、胚胎干细胞。在本专利技术中，所述多能干细胞选自诱导多能干细胞。
[0019]诱导多能干细胞是通过诱导一种或多种干细胞特异性基因的表达而产生的非多能细胞(通常是成熟体细胞)的人工衍生干细胞。这样的干细胞特异性基因包括但不限于八聚体转录因子家族，即Oct
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3/4；Sox基因家族，即Sox1，Sox2，Sox3，Sox15和Sox 18；Klf基因家族，即Klf1，Klf2，Klf4和Klf5；Myc基因家族，即c
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myc和L
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myc；Nanog基因家族，即OCT4，NANOG和REX1。
[0020]进一步，所述胆囊或胆管部位的细胞包括胆囊细胞、胆管细胞、胆囊癌细胞、胆管癌细胞、诱导多能干细胞诱导的胆囊细胞或胆管细胞。
[0021]进一步，胆管细胞包括HIBEpiC，胆囊细胞包括胆囊上皮细胞、胆囊上皮永生化细胞，胆囊癌细胞包括GBC
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SD、NOZ、EH
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GB1、SGC
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996、OCUG
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1，所述人胆管癌细胞包括CCLP1、SK
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ch
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1、RBE、SK
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chA
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1、FRH
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0201、QBC939。
[0022]在本专利技术中，胆囊或胆管部位的细胞也可以进行基因修饰或改造或诱导以使其对肝脏组织具有靶向性，包括但不限于基因改造、基因修饰、基因过表达或删除、分子修饰等；胆囊或胆管部位的细胞分泌的外泌体也可以进行表面修饰或改造以使其对肝脏组织具有靶向性，包括但不限于表面蛋白修饰、表面蛋白改造、表面小分子修饰等。
[0023]本专利技术第二方面提供了一种本专利技术第一方面所述的靶向外泌体的制备方法，包括
以下步骤：
[0024]培养细胞，获取细胞培养液；
[0025]离心，取上清液；
[0026]二次离心，取上清液；
[0027]再次离心，缓冲液重悬沉淀获得靶向外泌体。
[0028]进一步，步骤2)离心条件为2000g离心10min。
[0029]进一步，步骤3)离心条件为10000g离心30min。
[0030]进一步，步骤4)离心条件为100000g离心2h。
[0031]进一步，步骤4)所述的缓冲液为PBS。
[0032]进一步，所述细胞选自胆囊或胆管部位的细胞。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种肝脏组织靶向外泌体，其特征在于，所述靶向外泌体来源于胆囊或胆管部位的细胞；优选地，所述细胞选自正常细胞或其衍生株、癌细胞；优选地，所述细胞来源于人或非人类哺乳动物；优选地，所述非人类哺乳动物包括非人灵长类动物、啮齿动物、牛、猪、羊、犬、兔、猫、马；优选地，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠。2.根据权利要求1所述的靶向外泌体，其特征在于，所述胆囊或胆管部位的细胞包括胆囊细胞、胆管细胞、胆囊癌细胞、胆管癌细胞、诱导多能干细胞诱导的胆囊细胞或胆管细胞；优选地，胆管细胞包括HIBEpiC，胆囊细胞包括胆囊上皮细胞、胆囊上皮永生化细胞，胆囊癌细胞包括GBC
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SD、NOZ、EH
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GB1、SGC
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996、OCUG
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1，所述人胆管癌细胞包括CCLP1、SK
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ch
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1、RBE、SK
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chA
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1、FRH
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0201、QBC939。3.权利要求1或2所述的靶向外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)培养细胞，获取细胞培养液；2)离心，取上清液；3)二次离心，取上清液；4)再次离心，缓冲液重悬沉淀获得靶向外泌体；优选地，其特征在于，步骤2)离心条件为2000g离心10min；优选地，步骤3)离心条件为10000g离心30min；优选地，步骤4)离心条件为100000g离心2h；优选地，步骤4)所述的缓冲液为PBS；优选地，所述细胞选自胆囊或胆管部位的细胞。4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1或2所述的靶向外泌体；和治疗剂/预防剂；优选地，所述治疗剂或预防剂包括小分子化学药物、肽类或蛋白质药物、抗体、酶、细胞因子、激素、抗生素、疫苗和/或核酸类药物；优选地，所述核酸类药物包括质粒DNA、mRNA、microRNA、小干扰RNA、shRNA、有义RNA、反义寡核苷酸、适配体...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜海涛，
申请(专利权)人：姜海涛，
类型：发明
国别省市：
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