获得肿瘤特异性T细胞受体的方法技术

本发明专利技术的发明专利技术名称为获得肿瘤特异性T细胞受体的方法。本专利申请提供获得多种特异性识别来自个体的目标肿瘤抗原肽的T细胞受体的方法，该个体已在临床上受益于免疫疗法，诸如多抗原特异性细胞疗法。还提供肿瘤特异性TCR、表达此类TCR的经工程改造的免疫细胞、以及使用此类经工程改造的免疫细胞治疗疾病的方法。此类经工程改造的免疫细胞治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
获得肿瘤特异性T细胞受体的方法
[0001]本申请是申请日为2019年4月12日、申请号为201980025587.2、专利技术名称为“获得肿瘤特异性T细胞受体的方法”的专利申请的分案申请(其申请日为2019年4月12日、申请号为2021102958725、专利技术名称为“获得肿瘤特异性T细胞受体的方法”)的分案申请。
[0002]相关专利申请的交叉引用
[0003]本专利申请要求于2018年4月13日提交的国际专利申请号PCT/CN2018/082947的优先权权益，其公开内容全文以引用方式并入本文中。
[0004]以ASCII文本文件提交序列表
[0005]以下以ASCII文本文件提交的内容的全文以引用方式并入本文中：序列表的计算机可读取形式(CRF)(文件名：776902000342SEQLIST.TXT，记录日期：2019年4月11日，大小：426KB)。


[0006]本专利技术涉及癌症免疫疗法的领域。具体而言，本专利技术提供获得TCR的方法、肿瘤特异性TCR、经工程改造的免疫细胞、药物组合物、以及用于治疗癌症的试剂盒。

技术介绍

[0007]与血液性癌症不同，实体肿瘤缺乏由一般嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR)识别的细胞表面抗原。来自实体肿瘤的细胞内抗原必须通过HLA分子以HLA
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抗原表位复合物呈现在细胞表面上，此类HLA
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抗原表位复合物是由肿瘤特异性T细胞表面上的T细胞受体(T cell receptor,TCR)特异性识别，从而由肿瘤特异性T细胞引发抗肿瘤细胞毒性。
[0008]在2018年2月前，有75项关于过继(adoptive)免疫细胞的临床试验，此类过继免疫细胞经工程改造而具有肿瘤特异性TCR，以用于治疗癌症。靶标包括肿瘤相关抗原、肿瘤相关病毒抗原、以及新抗原。适应症包括许多常见类型的实体肿瘤。目前在临床试验中的TCR
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T细胞的示例包括靶向WT1/HLA
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A*0201复合物的TCR
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T(Juno Therapeutics)，其是用于治疗急性骨髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)和非小细胞肺癌；靶向MAGE
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A3/A6/HLA
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DPB1*0401复合物的TCR
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T(Kite)，其是用于治疗恶性实体肿瘤；以及靶向MAGE
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A4/HLA
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A*0201的TCR
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T(Adaptimmune)，其是用于治疗恶性实体肿瘤。
[0009]在本文中所参照的所有出版物、专利、专利申请案、以及已公开专利申请案的公开内容全文特此以引用方式并入本文中。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供方法、组合物、以及试剂盒以用于获得一种或多种特异性识别来自个体的肿瘤抗原肽的T细胞受体(TCR)，该个体已在临床上受益于免疫疗法，诸如多抗原特异性细胞疗法(Multiple Antigen Specific Cell Therapy，“MASCT”)。
[0011]本专利申请的一个方面提供一种获得多种特异性识别目标肿瘤抗原肽的T细胞受
体(TCR)的方法，其包括：a)第一共培养步骤，其包括将载有该目标肿瘤抗原肽的第一树突细胞(dendritic cell,DC)群与来自个体的T细胞群共培养，以获得第一共培养物；b)富集步骤，其包括使该第一共培养物经受富集过程，以获得经富集的活化T细胞；c)第二共培养步骤，其包括将此类经富集的活化T细胞与载有该目标肿瘤抗原肽的第二DC群共培养，以获得肿瘤抗原特异性T细胞群，其中至少约10％的此类肿瘤抗原特异性T细胞对该目标肿瘤抗原肽有特异性反应；以及d)测序步骤，其包括使此类肿瘤抗原特异性T细胞经受下一代测序，以识别多对编码TCRα和TCRβ的基因，从而基于编码TCRα和TCRβ的成对基因来提供该多种T细胞受体；其中该个体已在临床上受益于多抗原特异性细胞疗法(MASCT)，该MASCT包括向该个体施用有效量的活化T细胞，此类活化T细胞是通过将T细胞群与载有多种肿瘤抗原肽的树突细胞群共培养而制备，该多种肿瘤抗原肽包括该目标肿瘤抗原肽。在一些实施方案中，该第一共培养步骤是在该富集步骤之前进行约1至约3天。在一些实施方案中，该T细胞群与载有该目标肿瘤抗原肽的该第一DC群之间的比率不大于约30:1(诸如约10:1至约20:1、或约15:1、或约20:1)。在一些实施方案中，在该第一共培养步骤中的该T细胞群存在于PBMC中。在一些实施方案中，载有该目标肿瘤抗原肽的该第一DC群与该T细胞群是在第一共培养基中共培养，该第一共培养基包含一种或多种细胞因子(例如，IL
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2或多种细胞因子)以及免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，该第一共培养基包含IL
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2、IL
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7、IL
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15、以及IL
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21、以及抗PD
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1抗体。在一些实施方案中，该第一共培养基包含IL
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2和抗PD
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1抗体。
[0012]在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该富集步骤包括：使该第一共培养物与载有该目标肿瘤抗原肽的抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC)接触，以获得经刺激的共培养物；以及使用配体自该经刺激的共培养物分离经富集的活化T细胞群，该配体特异性识别细胞因子。在一些实施方案中，该细胞因子为IFNγ。在一些实施方案中，该经富集的活化T细胞群与载有该目标肿瘤抗原肽的该第二DC群之间的比率为约1:1至约20:1。在一些实施方案中，将该经富集的活化T细胞群与载有该目标肿瘤抗原肽的该第二DC群共培养约12至25天。
[0013]在一些根据上述方法中任一者的实施方案中，该第二共培养步骤包括：在初始第二共培养基中将载有该目标肿瘤抗原肽的该第二DC群与该经富集的活化T细胞群共培养，以提供第二共培养物，该初始第二共培养基包含免疫检查点抑制剂和可选地一种或多种细胞因子(例如，IL
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2或多种细胞因子)；以及将抗CD3抗体(例如，OKT3)和可选地一种或多种细胞因子(例如，IL
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2或多种细胞因子)添加至该第二共培养物，以获得肿瘤抗原特异性T细胞群。在一些实施方案中，在该第二共培养步骤开始后不多于约3天，将该抗CD3抗体添加至该第二共培养物。在一些实施方案中，该抗CD3抗体是OKT3。在一些实施方案中，在该第二共培养步骤开始后不多于约3天(例如，约2天)，将该一种或多种细胞因子添加至该第二共培养物。在一些实施方案中，该一种或细胞因子包括IL
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2。在一些实施方案中，该免疫检查点抑制剂是抗PD
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1抗体(例如，SHR
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1210)。在一些实施方案中，该初始第二共本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合主要组织兼容性复合体(MHC)/RGS5表位复合体的肿瘤特异性T细胞受体(TCR)，所述肿瘤特异性TCR包括：(1)TCRα链，该TCRα链包含由SEQ ID NO:266的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:267的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQID NO:46的氨基酸序列组成的CDR3；和TCRβ链，所述TCRβ链包含由SEQ ID NO:268的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ IDNO:269的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:49的氨基酸序列组成的CDR3；或(2)TCRα链，该TCRα链包含由SEQ ID NO:270的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO:271的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQID NO:52的氨基酸序列组成的CDR3；和TCRβ链，所述TCRβ链包含由SEQ ID NO:272的氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ IDNO:273的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO:55的氨基酸序列组成的CDR3。2.权利要求1所述的肿瘤特异性TCR，其中所述RGS5表位包含SEQ IDNO:82或83的氨基酸序列。3.权利要求1所述的肿瘤特异性TCR，其中所述MHC是HLA
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DPA1*02:02/DPB1*05:01、HLA
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DRA/DRB1*09:01或HLA
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DRA/DRB4*01:03。4.权利要求1所述的肿瘤特异性TCR，包括：(1)包含含...

【专利技术属性】
技术研发人员：周向军，韩研妍，梁小玲，陈锡和，
申请(专利权)人：恒瑞源正深圳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：