一种用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基及制备方法和应用，所述培养基包括：DMEM基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX添加剂、NEAA、bFGF和p38MAPK抑制剂。本发明专利技术创造性地将包括DMEM基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX添加剂、NEAA、bFGF和p38MAPK抑制剂的培养基用于鸡肌源性干细胞体外增殖，使用包含有上述六种成分的培养基进行鸡肌源性干细胞体外增殖培养，细胞增殖率、存活率高，肌管分化状态好。肌管分化状态好。肌管分化状态好。

【技术实现步骤摘要】
一种用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]细胞培养肉技术作为新兴的替代蛋白生产技术，有低碳环保、减少病原体传播、减少抗生素使用、避免动物福利问题等多方面优势，为肉类生产提供了新的途径。肌源性干细胞是骨骼肌中具有干性的细胞，对动物的肌肉生长发育和再生起到关键的作用，也是目前细胞培养肉的种子细胞。细胞培养肉是依据动物肌肉生长修复的原理，在体外进行干细胞培养获得的肉类，该技术不需要进行动物养殖，而是直接细胞工厂化生产肉类。细胞培养肉的体外生产技术主要分为种子细胞获得与扩增，细胞富集后的诱导分化，进而促使大部分细胞分化形成肌肉组织。
[0003]CN114958730A公开了一种肌肉干细胞增殖培养基、分化培养基及其应用。包括添加有3，2
’‑
二羟基黄酮的肌肉干细胞增殖培养基，添加有槲皮素的肌肉干细胞分化培养基。采用肌肉干细胞增殖培养基在体外短期培养猪肌肉干细胞时增殖速度显著提高，培养3天得到的细胞数量是正常培养基的1.35倍；在肌肉干细胞分化培养基中诱导分化5天，细胞的分化能力显著上升，肌肉特异性表蛋白肌球蛋白重链表达量显著上升。该专利技术还提供所述培养基的应用，以及基于该专利技术所述培养基制备培养肉的方法，提高肌肉干细胞在体外短期培养的扩增数量及分化能力，有利于培养肉的生产。
[0004]CN110938582A公开一种可提高细胞增殖活性的培养基，所述培养基是在基础培养基中加入细胞增殖活性组合物溶液配制而成，所述细胞增殖活性组合物由马齿笕提取物和茵陈提取物组成，所述细胞增殖活性组合物溶液是将马齿笕提取物和茵陈提取物溶于磷酸缓冲盐溶液中制备而成。该专利技术提供的培养基不仅具有刺激细胞增殖的功效，而且在不添加双抗的基础上还能有效减少细胞污染率。
[0005]传统肉类生产方式是以消耗大量粮食和水资源、严重污染环境为代价的。随着经济发展、人口大幅增加，肉制品需求正快速增加，传统肉类生产方式已越来越难以满足人类需求。因此研发体外促进肌源性干细胞增殖的培养基，制备高效、环保、可持续的细胞培养肉，以满足未来人类的肉品供应，是非常有意义的。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基及制备方法和应用。
[0007]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基，所述培养基包括：
[0009]DMEM基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX添加剂、NEAA、bFGF和p38MAPK抑制剂。
[0010]DMEM基础培养基是由Dulbecco改良的Eagle培养基，含有各种氨基酸和葡萄糖，其特点主要包括：(1)氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；(2)维生素含量为依格尔培养基的4倍；(3)含有糖酵解途径中的重要物质
‑
丙酮酸；(4)含有微量的铁离子。DMEM基础培养基广泛应用于疫苗生产和各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养。
[0011]胎牛血清常用于细胞的体外培养，在提供维持细胞指数生长的激素、补充基础培养基不能提供的营养物质和缓冲酸碱平衡等方面起到重要的作用。
[0012]GlutaMAX添加剂是一种稳定的L
‑
谷氨酰胺的替代品，与添加L
‑
谷氨酰胺相比，GlutaMAX添加剂可显著减少有毒氮的积累，可改善细胞活力和细胞生长，可在更宽泛的温度范围下稳定的保存，GlutaMAX添加剂广泛的应用于哺乳动物细胞的贴壁和悬浮培养。
[0013]NEAA(Non
‑
Essential Amino Acids)，即MEM非必需氨基酸溶液，包括L
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丙氨酸、L
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谷氨酸、L
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天冬酰胺、L
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天冬氨酸、L
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脯氨酸、L
‑
丝氨酸和甘氨酸7种非必需氨基酸，能有效改善细胞培养基配比，降低细胞培养时细胞自身生产非必需氨基酸的副作用，促进细胞增殖代谢，是细胞培养中常用的添加剂之一。
[0014]bFGF(Basic Fibroblast Growth Factor)，即碱性成纤维细胞生长因子，是一种传递发育信号，促进中胚层和神经外胚层细胞分裂的多肽，具有强烈的血管生成作用。在体外培养中，bFGF不仅能刺激细胞的增殖和迁移，而且可以诱导纤溶酶原激活物及胶原酶活性，是与肝素有高亲和力的细胞促分裂原。
[0015]p38信号通路是细胞内重要的信号通路，它在许多生物学反应包括细胞周期调控、细胞增殖、发育、分化、衰老、凋亡、免疫反应及肿瘤发生中起重要作用，p38 MAPK抑制剂通过结合到p38 MAPK与ATP结合的位置抑制p38 MAPK的催化活性及后续HSP27的磷酸化，从而抑制MAPKAPK
‑
2的激活，调控p38信号通路。在体外培养中p38 MAPK抑制剂可以提高卫星细胞的分化能力。
[0016]本专利技术创造性地将包括DMEM基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX添加剂、NEAA、bFGF和p38 MAPK抑制剂的培养基用于鸡肌源性干细胞体外增殖，其中胎牛血清、bFGF与NEAA三种成分相辅相成，在促进细胞增殖、改善细胞分化状态方面具有协同增效的作用；此外，P38MAPK抑制剂、GlutaMAX添加剂和NEAA组合应用，在促进鸡肌源性干细胞增殖与分化方面具有协同增效的作用，使用包含有DMEM基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX添加剂、NEAA、bFGF和p38 MAPK抑制剂成分的培养基进行鸡肌源性干细胞体外增殖培养，细胞增殖率、存活率高，肌管分化状态好。
[0017]优选地，所述胎牛血清占培养基的质量百分数为15
‑
25％。
[0018]所述15
‑
25％中的具体数值可以选择15％、17％、19％、21％、23％或25％等。上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0019]优选地，所述GlutaMAX添加剂占培养基的质量百分数为0.05
‑
2％。
[0020]所述0.05
‑
2％中的具体数值可以选择0.05％、0.5％、0.7％、0.9％、1.1％、1.3％、1.5％、1.7％或2％等。上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
[0021]优选地，所述NEAA占培养基的质量百分数为0.05
‑
2％。
[0022]所述0.05
‑
2％中的具体数值可以选择0.05％、0.5％、0.7％、0.9％、1.1％、1.3％、1.5％、1.7％或2％等。上述各项数值范围内的其他具体点值均本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基，其特征在于，所述培养基包括：DMEM基础培养基、胎牛血清、GlutaMAX添加剂、NEAA、bFGF和p38MAPK抑制剂。2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述胎牛血清占培养基的质量百分数为15
‑
25％；优选地，所述GlutaMAX添加剂占培养基的质量百分数为0.05
‑
2％；优选地，所述NEAA占培养基的质量百分数为0.05
‑
2％；优选地，所述培养基中bFGF的浓度为5
‑
15ng/mL；优选地，所述培养基中p38 MAPK抑制剂的浓度为1
‑
10μM；优选地，所述DMEM基础培养基包括KnockOut DMEM培养基、DMEM高糖型培养基或DMEM/F12型培养基中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述DMEM基础培养基为KnockOut DMEM培养基。3.一种鸡肌源性干细胞体外增殖培养方法，其特征在于，所述鸡肌源性干细胞体外增殖培养方法使用的培养基包括如权利要求1或2所述的用于鸡肌源性干细胞体外增殖的培养基。4.如权利要求3所述的鸡肌源性干细胞体外增殖培养方法，其特征在于，所述鸡肌源性干细胞体外增殖培养方法包括如下步骤：分离鸡肌源性干细胞，置于如权利要求1或2所述的培养基中培养。5.如权利要求4所述的鸡肌源性干细胞体外增殖培养方法，其特征在于，所述分离鸡肌源性干细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑勇，赖良学，
申请(专利权)人：超技良食深圳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：