一种利用多能干细胞诱导分化胆囊祖细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用多能干细胞诱导分化胆囊祖细胞的方法，所述方法包括以下步骤：诱导多能干细胞分化为定形内胚层细胞；诱导定形内胚层细胞分化为前肠后部细胞簇；诱导前肠后部细胞簇分化为胆胰共祖细胞簇；诱导胆胰共祖细胞簇分化为胆囊祖细胞簇。该方法以胆囊上皮发育阶段的关键分子特征为基础，依次实现人多能干细胞向内胚层、前肠后部细胞簇、胆胰共祖细胞簇、以及胆囊祖细胞的诱导分化；为胆囊上皮的发育机制探索与病理解析提供了一个全新的人源性工具。新的人源性工具。新的人源性工具。

【技术实现步骤摘要】
一种利用多能干细胞诱导分化胆囊祖细胞的方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体地，涉及一种利用多能干细胞诱导分化胆囊祖细胞的方法。

技术介绍

[0002]多能干细胞(Pluripotent stem cells，PSC)因具备无限增殖能力与多向分化潜力而成为再生医学的重要种子细胞。近年来，PSC向肝细胞、心肌细胞、胰岛β细胞等不同体细胞类型的体外诱导分化技术依次被成功建立，帮助人类在重难疾病的破译上产生了一系列突破。
[0003]胆囊作为人体内加工运输胆汁的脏器，其发育或功能异常会引发胆固醇结石、硬化性胆管炎、胆道闭锁等疾病。据统计，全球大部分新生儿的肝脏移植是由于患儿胆囊发育异常而引发胆道闭锁；还有一部分是由于原发性硬化性胆管炎造成的肝损伤。目前，用于肝外胆管疾病研究和药物开发的体外模型主要包括人原代细胞或肿瘤细胞系；然而，原代细胞不仅来源稀缺、难以获取，且由于个体差异致使批次间结果不稳定；而肿瘤细胞在病理机制与基因表达等多个方面的差异致使预测不可靠。这些问题严重限制了新药研发的速度与成功率。倘若存在一个方法可大量地产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用多能干细胞诱导分化胆囊祖细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.诱导多能干细胞分化为定形内胚层细胞；S2.诱导定形内胚层细胞分化为前肠后部细胞簇；S3.诱导前肠后部细胞簇分化为胆胰共祖细胞簇；S4.诱导胆胰共祖细胞簇分化为胆囊祖细胞簇。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，使用的培养基中添加有50～250μM rhActA和30～100ng/ml rhBMP4。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，依次使用如下培养进行诱导培养：培养基1为：含有50～250ng/ml rhActA+30～100ng/ml rhBMP4的IMDM培养基，培养基2为：含有50～250ng/ml rhActA的IMDM完全培养基，所述IMDM完全培养基含0.2％(v/v)FBS，培养基3为：含有50～250ng/ml rhActA的IMDM完全培养基，所述IMDM完全培养基含2％(v/v)FBS。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，使用的培养基中添加有1～10μM CHIR99021、100～500ng/ml rhFGF10和10～100ng/ml rhNOG。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，依次使用如下培养进行诱导培养：培养基3为：含有1～10μM CHIR99021+100～500ng/ml rhFGF10+10～100ng/ml rhNOG的IMDM完全培养基，所述IMDM完全培养基含2％(v/v)FBS，培养基4为：含有1～10μM CHIR99021+100～500ng/ml rhFGF10+10～1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴芬芳，吴迪，陈小妮，
申请(专利权)人：北京中医药大学深圳医院龙岗，
类型：发明
国别省市：