AtramycinC的制备及其在药物研发中的应用制造技术

本发明专利技术涉及新化合物Atramycin C的化学结构、制备方法，以及在抗菌新药研发中的应用。Atramycin C是本发明专利技术申请人从海洋放线菌Streptomyces sp.strain KCB

【技术实现步骤摘要】
Atramycin C的制备及其在药物研发中的应用


[0001]本专利技术涉及Atramycin C的结构确定、制备方法，以及在抗菌新药研发中的前景。

技术介绍

[0002]进入21世纪，随着科学技术的快速发展，临床上用于预防和治疗细菌感染的抗菌药物日益增多，由此造成耐药菌株也同步增多，以及细菌对抗抗菌药物的不断升级强化与在病原微生物中得到广泛传播。另外，抗菌药物的不合理使用与滥用在带来一系列药物不良反应的同时，也带来抗细菌感染治疗面临更加严峻的挑战。因此，加快新型、高效抗菌药物的研发，以解决因耐药性而产生的无药可用的问题具有十分重要的临床意义。
[0003]抗菌药物一般来源于细菌、放线菌与真菌等微生物的发酵产物，化学半合成的化合物，以及通过化学反应全合成的结构相同或相似化合物。创新药物研发经验表明，从天然产物中寻找活性先导物进而创制新药是最有效途径之一，天然产物特有的化学结构复杂性和生物活性多样性，奠定了从天然产物中发现活性先导物进而创制新药的成功几率。海洋放线菌是一类重要的药源微生物，生活在大洋中的放线菌，因其生理生化和16S rRNA等分子生物学特征与陆生放线菌有明显差别，致使其次生代谢产物结构类型更加新颖、生物活性更加显著，因此，从海洋放线菌中寻找新型先导化合物进而研发抗菌药具有巨大的潜力。
[0004]本专利技术所涉及的Atramycin C为新化合物，是专利技术申请人从海洋活性放线菌Streptomyces sp.strain KCB
‑
032的次生代谢产物中分离得到的新化合物。药理活性实验发现，Atramycin C对2种细菌具有较好的生长抑制作用，因此，新化合物Atramycin C具有开发成新型抗菌药物的潜力。Atramycin C的化学结构、制备方法及其抗菌活性研究均为首次公开，因此具有突出的实质性特点。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供新化合物Atramycin C的化学结构确定方法、制备方法，以及在抗菌新药研发中的应用。
[0006]本专利技术所涉及的用于抗菌新药研发的化合物为新化合物，命名为Atramycin C，其分子式为C
25
H
24
O9，化学结构式如下：
[0007][0008]本专利技术所涉及的Atramycin C的制备方法为：将从海底沉积物分离的活性放线菌Streptomyces sp.strain KCB
‑
032划线接种于固体培养基上，于28℃培养3天，直至长出孢子，然后将孢子接种到液体培养基，在28℃条件下，摇床培养10天，收获发酵物。过滤发酵物获得发酵液和菌丝体，发酵液经大孔吸附树脂柱吸附、洗脱及减压浓缩；菌丝体经过超声破
碎，用乙酸乙酯提取、减压浓缩；合并减压浓缩物，利用有机溶剂萃取，减压浓缩得总浸膏。总浸膏通过硅胶柱层析，二氯甲烷
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甲醇梯度洗脱，借助薄层色谱检测获得15个洗脱组分。将洗脱组分1进行ODS反相柱层析，收集40％甲醇
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水洗脱部分，洗脱液浓缩得到1混合物。混合物通过手性填料的HPLC，利用异丙醇
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环己烷洗脱，并收集30:70洗脱部分，浓缩、重结晶得到纯度达98％以上的Atramycin C单体化合物。
[0009]本工艺中所用涉及的培养基，为半海水ISP2培养基、纯海水ISP2培养基的一种,优选为半海水ISP2培养基。
[0010]本工艺中所涉及的用作大孔吸附树脂柱洗脱为有机醇，是甲醇、乙醇中的一种，通过反复实验，优选甲醇作为洗脱溶剂。
[0011]本工艺中所涉及的大孔吸附树脂柱，为弱极性或非极性的大孔吸附树脂，优选XAD
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16弱极性型号。
[0012]本工艺中所涉及的萃取剂，为三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇中的一种，优选乙酸乙酯作为萃取剂。
[0013]本工艺中所涉及的重结晶溶剂，为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等溶剂中的一种或几种，优选甲醇作为重结晶溶剂。
[0014]本工艺中所涉及的手性分离填料，可用Chiralpak AS
‑
H、Chiralpak AD
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H、Chiralcel OD
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H及(R,R)WHELK 01，优选(R,R)WHELK 01作为分离填料。
[0015]本专利技术还提供了Atramycin C的抗菌实验方法、结果及新药研发中的应用前景。
[0016]本专利技术涉及的新化合物Atramycin C，其化学结构、制备方法及其抗菌活性研究，均为首次公开，不存在通过其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，且有望用于一种新型抗菌药物的开发。
附图说明
[0017]图
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1、新化合物Atramycin C的核磁共振氢谱
[0018]图
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2、新化合物Atramycin C的核磁共振碳谱
[0019]图
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3、新化合物Atramycin C的DEPT
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135图谱
[0020]图
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4、新化合物Atramycin C的氢
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氢相关图谱
[0021]图
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5、新化合物Atramycin C的HSQC图谱
[0022]图
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6、新化合物Atramycin C的HMBC图谱
[0023]图
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7、新化合物Atramycin C的NOESY图谱
[0024]图
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8、新化合物Atramycin C的高分辨质谱
[0025]图
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9、新化合物Atramycin C水解后鼠李糖结构片段的HPLC图[(a)L
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鼠李糖标准品衍生物的色谱图,(b)D
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鼠李糖标准品衍生物的色谱图,actetrophenone A水解产物的色谱图][0026]图
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10、新化合物Atramycin C水解后鼠李糖结构片段的LC/MS图[(a)L
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鼠李糖标准品衍生物的LC
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MS图,(b)D
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鼠李糖标准品衍生物的LC
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MS图,actetrophenone A水解产物的LC
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MS图]具体实施方式
[0027]下面的实施例用以解释本专利技术，但是并非对本专利技术实质内容的限制。
[0028]实施例1、新化合物Atramycin C的制备
[0029]将海洋放线菌Streptomyces sp.strain KCB
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032划线接种于ISP2半海水固体培养基上，28℃条件下培养3天后，取1cm2菌苔接种到ISP2半海水ISP2液体培养基中，于28℃及180转/分钟的条件下，摇床培养10天后收获发酵物。过滤发酵物获得发酵液和菌丝体，发酵液经X本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.新化合物的化学结构如下图所示：。2.权利要求1所述的新化合物的制备方法，其特征为：将海洋放线菌Streptomyces sp.strain KCB
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032划线接种于固体培养基上，于28℃培养3天，直至长出孢子，接种到液体培养基，在28℃及180转/分钟的条件下，摇床培养10天收获得发酵物；发酵液通过大孔吸附树脂柱层析吸附、洗脱、减压浓缩，菌丝体经超声破碎、有机溶剂提取、减压浓缩，浓缩物合并得总浸膏；总浸膏过硅胶柱层析，梯度洗脱，并根据薄层层析检测分为15个组分；将洗脱组分进行ODS反相柱层析，收集40％所述洗脱溶剂洗脱部分，洗脱部分浓缩得混合物；混合物借助手性填料HPLC分离及重结晶，即得到纯度达98％以上的权利要求1所述的新化合物。3.根据权利要求2所述的新化合物的制备方法，其特征为：工艺中所用涉及的培养基，为半海水ISP2培养基与纯海水ISP2培养基的一种,优选为半海水ISP2培养基。4.根据权利要求2所述的新化合物的制备方法，其特征为：用作洗脱溶剂是有机醇，为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张淑敏，谢则平，戴胜军，宫世周，曲承蕾，申胜标，赵明，高筱莎，
申请(专利权)人：‑，
类型：发明
国别省市：