基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物及其制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及肿瘤化疗与免疫联合治疗、纳米自组装体和药物递送系统，特别是指基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物及其制备方法。所述免疫化疗药物包括DNA立方体、位于DNA立方体相对面的胆固醇分子、肿瘤抗原分子及化疗药物。本发明专利技术提供的化疗药物（盐酸阿霉素）@DNA立方体

【技术实现步骤摘要】
基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物及其制备方法


[0001]本专利技术属于医药
，涉及肿瘤化疗与免疫联合治疗、纳米自组装体和药物递送系统，特别是指基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物及其制备方法。

技术介绍

[0002]肿瘤是威胁人类生命健康的主要疾病之一，化疗药是治疗肿瘤最常用的一类药物，但很多化疗药的理化性质不理想，进入细胞效率较低，缺乏对肿瘤组织的靶向性，且易产生耐药。
[0003]肿瘤的联合治疗具有增强抗肿瘤疗效、减轻毒副作用、规避单一化疗的耐药性、阻止肿瘤侵袭和转移的优势，化疗和免疫疗法联合治疗就是一种高效的新型联合疗法。目前的抗肿瘤免疫疗法包括免疫检查点抑制剂疗法、CAR
‑
T细胞疗法及肿瘤疫苗疗法等，这些疗法能通过不同机制逆转肿瘤中的免疫抑制，阻止肿瘤细胞的免疫逃逸，增强免疫系统对肿瘤细胞的杀伤等。而目前这些免疫疗法对实体瘤治疗效果较差，如何增强免疫系统对肿瘤组织和细胞的靶向杀伤作用十分关键。
[0004]为使联合疗法同时起效，增强其药效和减轻毒副作用，各类载药共递送系统相继出现，如脂质体、胶束、凝胶、DNA载体等。其中，DNA载体具有组织相容性好、易于修饰、结构精准可控等优点，常用作载体递送各类药物并发挥生物调节作用。专利CN 107469088 A公开了一种基于DNA折纸术的精确识别靶向纳米载体，该纳米载体在递送化疗药物的同时，表面修饰具有生物治疗功能的核酸适配体，通过生物治疗与化疗联合治疗，提高了抗肿瘤疗效，且利用DNA载体能精准载药的特点，优化了核酸适配体在DNA纳米载体表面的数量和位置，进一步增强了其抗肿瘤疗效。现实中的肿瘤细胞膜表面存在低表达抗原分子以降低其免疫原性、逃避免疫系统识别和杀伤的特点，因此，针对该特点如何采用DNA纳米自组装体递送药物，重塑肿瘤细胞免疫原性，增效化疗免疫联合抗肿瘤治疗，是本课题要解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提出一种基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物及其制备方法，以抗原标记肿瘤细胞膜重塑免疫原性的同时，向肿瘤细胞靶向递送化疗药，还能增强化疗药的入胞效率，实现高效低毒的新型免疫化疗联合治疗。
[0006]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物，所述免疫化疗药物包括DNA立方体、位于DNA立方体相对面的四个胆固醇分子、四个肿瘤抗原分子及化疗药物。
[0008]优选的，位于DNA立方体相对面的胆固醇分子不少于4个、肿瘤抗原分子不少于4个；
[0009]进一步的，位于DNA立方体相对面的胆固醇分子有4个、肿瘤抗原分子有4个；
[0010]优选的，所述DNA立方体由长链1AB、2BA、3AB、4BA和短链Cholesterol
‑
A20自组装制备得到；其中1AB的碱基序列如SEQ ID No.1所示，2BA的碱基序列如SEQ ID No.2所示，3AB的碱基序列如SEQ ID No.3所示，4BA的碱基序列如SEQ ID No.4所示；Cholesterol
‑
A20的碱基序列如SEQ ID No.5所示，其5
’
端修饰有胆固醇。
[0011]优选的，所述肿瘤抗原分子为含有表位的抗原肽、蛋白或多糖，其左端修饰有含有巯基的半胱氨酸。
[0012]优选的，所述肿瘤抗原分子与DNA短链B14经交联剂4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(sulfo
‑
SMCC)连接后再与DNA立方体相连，其中短链B14的碱基序列如SEQ ID No.6所示，其5
’
端修饰有氨基。
[0013]优选的，所述化疗药物均匀嵌入在DNA立方体的碱基对之间。
[0014]上述的基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物的制备方法，步骤为：
[0015](1)将DNA链1AB、2BA、3AB、4BA与Cholesterol
‑
A20按1:1:1:1:8的物质的量比例混合，程序降温的条件为：95℃保持5分钟，然后经30分钟匀速降温至80℃并保持5分钟，再以2分钟/1℃的速度降温至40℃，最后以3分钟/1℃降温到4℃，得DNA立方体(C2.2)；
[0016](2)将氨基修饰NH2‑
短链B14与交联剂sulfo
‑
SMCC 25℃恒温震荡反应2小时，经超滤除去多余交联剂后，再与经巯基修饰的肿瘤抗原分子(Ag)在25℃恒温震荡反应8小时反应，经超滤除去多余的肿瘤抗原分子，即得B14
‑
肿瘤抗原分子(B14
‑
Ag)；
[0017](3)将步骤(1)的DNA立方体与步骤(2)的B14
‑
肿瘤抗原分子按1:8的物质的量比，混匀后，以升温至40℃然后30分钟内匀速降温至4℃为单次循环，共循环进行4次，得DNA立方体
‑
肿瘤抗原分子；
[0018](4)将步骤(3)的DNA立方体
‑
肿瘤抗原分子与化疗药物以化疗药物过量的比例恒温反应后，经离心弃上清，得化疗药物@DNA立方体
‑
肿瘤抗原分子。
[0019]进一步以盐酸阿霉素为例，实际中不限于盐酸阿霉素，制备一种盐酸阿霉素@DNA纳米结构
‑
Ag(DOX@C2.2
‑
Ag)，其空间结构如图1所示。
[0020]优选的上述DOX@C2.2
‑
Ag的制备方法，步骤为：
[0021]将NH2‑
修饰的B14与
‑
SH修饰的Ag利用交联剂sulfo
‑
SMCC连接起来，具体方法是将NH2‑
B14用PBS溶解后与sulfo
‑
SMCC按照1：100的摩尔比混合，在25℃的恒温震荡仪中反应2小时，再用超滤管离心除去多余sulfo
‑
SMCC，然后将产物与Ag按照1：100的摩尔比，在25℃的恒温震荡仪中反应8小时，再用超滤管离心除去多余Ag，即获得B14
‑
Ag。
[0022]将C2.2与B14
‑
Ag按照1：8的摩尔比混匀，从40℃匀速降温历经30分钟到达4℃，该降温过程共循环进行4次，即获得C2.2
‑
Ag；
[0023]将化疗药溶液与C2.2
‑
Ag以摩尔比1400：1混合，在恒温混匀仪中25℃、1000rpm孵育3小时，离心除去游离DOX，即得DOX@C2.2
‑
Ag沉淀。
[0024]本专利技术具有以下有益效果：
[0025]1、本专利技术提供了一种将化疗与免疫治疗联合起来的DNA纳米药物，通过在细胞膜上开孔，加快化疗药进入肿瘤细胞，并以抗原分子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物，其特征在于：所述免疫化疗药物包括DNA立方体、位于DNA立方体相对面的胆固醇分子、肿瘤抗原分子及化疗药物。2. 根据权利要求1所述的基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物，其特征在于：所述DNA立方体由DNA链1AB、2BA、3AB、4BA和Cholesterol
‑
A20自组装制备得到；其中1AB的碱基序列如SEQ ID No.1所示，2BA的碱基序列如SEQ ID No.2所示，3AB的碱基序列如SEQ ID No.3所示，4BA的碱基序列如SEQ ID No.4所示；Cholesterol
‑
A20的碱基序列如SEQ ID No.5所示，其5
’
端修饰有胆固醇。3.根据权利要求2所述的基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物，其特征在于：所述肿瘤抗原分子为含有表位的抗原肽、蛋白或多糖，其左端修饰有含有巯基的半胱氨酸。4. 根据权利要求3所述的基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物，其特征在于：所述肿瘤抗原分子与短链B14经交联剂sulfo
‑
SMCC连接后再与DNA立方体相连，其中短链B14的碱基序列如SEQ ID No.6所示，其5
’
端修饰有氨基。5.根据权利要求4所述的基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物，其特征在于：所述化疗药物均匀嵌入在DNA立方体的碱基对之间。6.权利要求2
‑
5任一项所述的基于重塑肿瘤细胞免疫原性策略的免疫化疗药物的制备方法，其特征在于，步骤为：（1）将DNA链1AB、2BA、3AB、4BA与Cholesterol
‑
A20按比例混合，经程序降温后，得DNA立方体；（2）将NH2‑
短链B14与交联剂sulfo
‑
SMCC恒温震荡反应，经超滤除去多余交联剂后所得产物，再与经巯基修饰的肿瘤抗原分子震荡反应，经超滤除去多余的肿瘤抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张楠，陈义兵，孙俊红，董卓林，李梦茹，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：