一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供的一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗及其制备方法，其中肿瘤多肽疫苗包括：多肽混合液：所述多肽混合液包括8条CD8

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤免疫的
，具体涉及一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗。

技术介绍

[0002]肿瘤疫苗是将肿瘤抗原以多种形式导入患者体内，使自身的免疫系统得到激活，以此来打破体内免疫抑制的状态，诱导机体自身的免疫反应，使得机体由被动抗癌向主动抗癌转变，从而对肿瘤进行抑制或者清除，达到癌症治疗的目的。
[0003]SWAP70是鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor，GEF)家族成员之一，分子量为70kDa，该蛋白结构较为复杂，由多个结构域组成，包括N端的EF
‑
hand结构域、PH结构域、DH结构域、Coiled
‑
coil结构域及C端可结合F
‑
actin的结构域。EF
‑
hand结构域是一个免疫受体酪氨酸激活的模体，具有结合Ca
2+
的能力，有助于Rac1的活化。PH结构域能够结合磷脂酰肌醇三磷酸(phosphatidylinositol(3，4，5)
‑
trisphosphate，PIP3)进而将蛋白锚定在细胞膜上。在Coiled
‑
coil结构域中包含了一个DH结构域，该DH结构域与其他经典的Rho
‑
GEFs排列相反，它是SWAP70蛋白的主要催化结构域，能与Rac
‑
GTP酶相互作用，促进其GDP/GTP交换。C末端的60个氨基酸残基能够结合F
‑
肌动蛋白参与细胞运动。
[0004]目前的治疗性肿瘤疫苗多为能够引起CD8
+
T细胞反应MHCⅠ限制性的新生抗原片段，但其抗肿瘤免疫的效果一般。

技术实现思路

[0005]针对相关技术中存在的不足，本专利技术所要解决的技术问题在于：提供一种能够有效地促进机体产生T细胞反应的用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗及其制备方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗，包括：多肽混合液：所述多肽混合液包括8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段与3条CD4
+
T细胞表位的多肽片段；所述8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1～8所示，所述3条CD4
+
T细胞表位的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：9～11所示；所述多肽片段均由肿瘤相关基因SWAP70的突变多肽序列合成。
[0007]优选地，所述肿瘤多肽疫苗还包括佐剂。
[0008]优选地，所述佐剂为聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液。
[0009]本专利技术还提供了一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0010]1)8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段的制备：
[0011]对肿瘤相关基因SWAP70的突变多肽序列进行CD8
+
T细胞表位预测，挑选出排名前20的突变多肽序列，然后将排名前20的突变多肽序列分别合成多肽片段，将20条多肽片段混合后再与佐剂混合，然后筛选出8条多肽片段即8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1～8所示。
[0012]2)多肽混合液的制备：
[0013]将筛选出的8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段与3条如SEQ ID NO：9～11所示的CD4
+
T细胞表位的多肽片段均使用无菌水制备成50mg/ml的溶液，然后将各制备好的溶液等质量混合在一起，使用PBS缓冲剂配制至浓度为15mg/ml，即可得到多肽混合液。
[0014]3)肿瘤多肽疫苗的制备：
[0015]将多肽混合液与佐剂按照等体积混合，即可得到肿瘤多肽疫苗。
[0016]优选地，所述佐剂为聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液。
[0017]优选地，步骤2)中所述聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液的浓度为0.5mg/ml。
[0018]优选地，所述聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液的制备方法为：将平均分子量为1.5～8kb的聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸粉末用无热原的去离子水配制成1mg/ml的母液；将母液在温度为65
‑
70℃的条件下水浴10分钟溶解，然后室温放置1小时冷却；然后用PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，即可得到聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液。
[0019]本专利技术的有益技术效果在于：
[0020]1、本专利技术提供的肿瘤多肽疫苗的肿瘤抑制率较高，能够达到57.8％；且能够有效地促进机体产生T细胞反应，产生的CD4
+
T细胞和CD8
+
T细胞都积极地参与抗肿瘤免疫反应。
[0021]本专利技术中将能够引起CD8
+
T细胞反应MHCⅠ限制性的新生抗原片段和能够引起CD4
+
T细胞反应MHCⅡ限制性的新生抗原片段共同制备成肿瘤多肽疫苗，由MHCⅡ限制性的新生抗原产生的CD4
+
T细胞能够增强CD8
+
T细胞的抗肿瘤能力，用于肿瘤的治疗。为临床上的肿瘤疫苗和免疫检查点抑制剂等药物的联合治疗提供了一个可靠的基础。
[0022]2、本专利技术中采用聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液作为佐剂，与多肽混合液共同制备肿瘤多肽疫苗，佐剂的获取方便，能够更好地制备肿瘤多肽疫苗。
[0023]3、本专利技术将筛选出来的8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段与设计的3条CD4
+
T细胞表位的多肽片段等质量混合在一起，然后与佐剂混合在一起即可得到肿瘤多肽疫苗。制备的方法简单、容易操作，不需要特殊的条件即可制备。
[0024]步骤2)中将筛选出的8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段与3条如SEQ ID NO：9～11所示的CD4
+
T细胞表位的多肽片段均使用无菌水制备成50mg/ml的溶液，采用无菌水，具有良好的溶解性，且不具有毒性更加安全。
附图说明
[0025]图1是本专利技术提供的ELISPOT筛选具有免疫原性的突变抗原多肽片段的结果示意图；
[0026]图2是本专利技术提供的乳腺癌异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予实施例一、对比例二和对比例三制备的肿瘤多肽疫苗后的肿瘤生长曲线；
[0027]图3是本专利技术提供的乳腺癌异种移植瘤模型荷瘤鼠在给予实施例一和对比例一中制备的肿瘤多肽疫苗后的肿瘤生长曲线；
[0028]图4是本专利技术中荷瘤鼠脾脏细胞的免疫分析流式图；
[0029]图5是本专利技术中荷瘤鼠肿瘤组织细胞的免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗，其特征在于：包括：多肽混合液：所述多肽混合液包括8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段与3条CD4
+
T细胞表位的多肽片段；所述8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1～8所示，所述3条CD4
+
T细胞表位的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：9～11所示；所述多肽片段均由肿瘤相关基因SWAP70的突变多肽序列合成。2.根据权利要求1所述的一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗，其特征在于：所述肿瘤多肽疫苗还包括佐剂。3.根据权利要求2所述的一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗，其特征在于：所述佐剂为聚肌苷酸
‑
聚胞嘧啶核苷酸稀释液。4.一种用于治疗乳腺癌的肿瘤多肽疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1)8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段的制备：对肿瘤相关基因SWAP70的突变多肽序列进行CD8
+
T细胞表位预测，挑选出排名前20的突变多肽序列，然后将排名前20的突变多肽序列分别合成多肽片段，将20条多肽片段混合后再与佐剂混合，然后筛选出8条多肽片段即8条CD8
+
T细胞表位的多肽片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1～8所示；2)多肽混合液的制备：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张腾飞，李欣阳，董一鸣，王文康，
申请(专利权)人：张腾飞，
类型：发明
国别省市：