检测SARS-CoV-2感染的方法技术

本发明专利技术公开了一种寡核苷酸引物组，其包含：内部引物组，其包含如SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的引物；以及外部引物组，其包含如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的引物；其中寡核苷酸引物组适用于用环介导等温扩增方法扩增核酸。用于用环介导等温扩增方法扩增核酸。用于用环介导等温扩增方法扩增核酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测SARS
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CoV
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2感染的方法
专利

[0001]本专利技术涉及一种检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)感染的方法。更具体地，本专利技术涉及用于检测SARS
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CoV
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2感染的寡核苷酸引物和测定试剂盒。
[0002]专利技术背景
[0003]2019年冠状病毒疾病(COVID
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19)是一种由新型冠状病毒SARS
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CoV
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2引起的传染病，也称为严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2。据报道，这种疾病会引起从咳嗽、发烧等轻微症状到呼吸困难或死亡等严重疾病的呼吸道疾病。其他症状可能包括疲劳、肌肉疼痛、腹泻、喉咙痛、嗅觉丧失和腹痛。根据美国疾病控制和预防中心(CDC)的说法，症状可能会在接触后2至14天左右出现。在某些情况下，感染者可能无症状。
[0004]CDC和世界卫生组织(WHO)开发并推荐了几种实时逆转录聚合酶链反应(RT
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PCR)方法来检测SARS样冠状病毒。特别是使用RT
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PCT的方法具有高灵敏度和特异性，但在冷藏设施的试剂维护和高精度热循环仪的使用方面过于昂贵和繁琐。此外，RT
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PCT还需要由经验丰富的人员操作，以获得更好的结果准确性。期刊出版物，Corman等(2020)“Detection of 2019novel coronavirus(2019<br/>‑
nCoV)by real
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time RT
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PCR”，公开了一种在没有物理来源的病毒基因组核酸的情况下使用实时RT
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PCR检测2019
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nCoV的方法。
[0005]环介导等温扩增(LAMP)是核酸检测的另一种等温扩增方法，通常在恒温下不到一个小时即可完成。与RT
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PCR相比，LAMP不需要使用主要设备，其易于操作使其成为在稀缺诊断资源下使用的理想诊断工具。需要提供一种通过提供寡核苷酸引物组并通过LAMP方法扩增SARS
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CoV
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2特异性核苷酸序列来检测SARS
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CoV
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2感染的方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的是使用包含与SARS
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CoV
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2的N1核蛋白区域互补结合的引物的寡核苷酸引物组，提供严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)感染的快速检测，以及使用逆转录酶环介导等温扩增(RT
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LAMP)技术进行扩增反应，使得诊断是否存在病毒感染所需的时间比实时逆转录聚合酶链反应(RT
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PCR)快1.5倍。此外，本专利技术提供了扩增反应的比色检测，其中该检测防止了周围环境的污染并且提供了可通过肉眼检测到的阳性扩增反应的指示。此外，本专利技术省去了复杂设备的使用，使检测方法在资源不足的情况下也能方便地进行。
[0007]本专利技术的第一方面公开了一种寡核苷酸引物组，包括：内部引物组，其包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的引物；以及外部引物组，其包含如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的引物和如SEQ IDNO.4所示的核苷酸序列的引物；其中寡核苷酸引物组适用于用环介导等温扩增方法扩增核酸。
[0008]优选地，寡核苷酸引物组进一步包括一环状引物组，该环状引物组包含如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列的引物。
[0009]优选地，寡核苷酸引物组还包括一群引物组，该群引物组包含如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列的引物。
[0010]优选地，核酸具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。
[0011]本专利技术的第二个方面公开了一种检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2感染的方法，包括对病毒的靶核酸区域进行环介导等温扩增，其中扩增反应包括根据本专利技术的第一方面所述的寡核苷酸引物组。
[0012]优选地，靶核酸区域具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。
[0013]本专利技术的第三个方面公开了一种病毒检测方法，包括通过环介导等温扩增检测SARS
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CoV
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2靶核酸区域的扩增，其中扩增包括根据本专利技术第一个方面的寡核苷酸引物组，以及从而诊断是否存在SARS
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CoV
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2感染。
[0014]优选地，靶核酸区域具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。
[0015]本专利技术的第四方面公开了一种用于病毒检测的测定试剂盒，其包含根据本专利技术第一方面的寡核苷酸引物组。
[0016]本领域的技术人员将容易理解，本专利技术易于实现所述对象并获得所述目的和优点，以及其中固有的目的和优点。本文所描述的实施例并不旨在限制本专利技术的范围。
附图说明
[0017]为了便于理解本专利技术，在附图中举例说明了优选实施例，当结合以下描述考虑时，本专利技术、其构造和操作及其许多优点将很容易理解和领会。
[0018]图1示意了如SEQ ID NO.1
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8所示的寡核苷酸引物的核苷酸序列。
[0019]图2示意了如SEQ ID NO.9所示的、代表与寡核苷酸引物互补的N1核蛋白区域的核苷酸序列。
[0020]图3示意了如SEQ ID NO.10所示的、代表SARS
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CoV
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2(基因库登录号MN988713.1)的核苷酸序列。
[0021]图4示意了如SEQ ID NO.11所示的、代表SARS
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CoV
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2(基因库登录号LC528233.1)的核苷酸序列。
[0022]图5示意了如SEQ ID NO.12所示的、代表SARS
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CoV
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2(基因库登录号MT123293.1)的核苷酸序列。
具体实施方式
[0023]下面，根据本专利技术的优选实施例，并参照附图对本专利技术进行详细说明。然而，应当理解，将描述限制为本专利技术的优选实施例仅仅是为了便于讨论本专利技术，并且可以预见本领域的技术人员可以在不脱离所附权利要求的范围的情况下做出各种修改。
[0024]本专利技术公开了一种使用寡核苷酸引物组检测严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
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2)感染的方法，该引物组包含与如SEQ ID NO.9中所示的、代表SARS
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2的N1核蛋白区域的核苷酸序列互补结合的寡核苷酸引物。N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种寡核苷酸引物组，包括：内部引物组，其包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物和如SEQ IDNO.2所示核苷酸序列的引物；和外部引物组，其包含如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的引物和如SEQ IDNO.4所示核苷酸序列的引物；其中寡核苷酸引物组适用于用环介导等温扩增方法扩增核酸。2.根据权利要求1所述的寡核苷酸引物组，其进一步包含环状引物组，所述环状引物组包含如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的引物。3.根据权利要求1或2所述的寡核苷酸引物组，其进一步包含群引物组，所述群引物组包含如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列的引物和如SEQ ID NO.8所示核苷酸序列的引物。4.根据权利要求1所述的寡核苷酸引物组，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘依龄，李敏仪，努尔伊扎提宾提穆斯塔帕，伊利安娜博特伊斯梅尔，阿菲法哈吉哈山，卡莱埃拉苏ALM皮尔瑞亚萨米，
申请(专利权)人：马来亚大学，
类型：发明
国别省市：