一种从千里光中提取化合物的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种从千里光中提取化合物的方法及其应用，方法是从千里光中提取化合物3

【技术实现步骤摘要】
一种从千里光中提取化合物的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及有机物质提取
，特别涉及一种从千里光中提取化合物的方法及其应用。

技术介绍

[0002]由烟草花叶病毒(Tobacco mosa i c v i rus，TMV)引起的花叶病是烟草生产上分布最广、发生最为普遍的一类病害，除烟草之外，TMV还可以侵染番茄、辣椒、马铃薯等多种茄科植物，其寄主范围广，65科超过885种植物均可受其侵染，烟草及其他农作物感染TMV后，叶片叶绿素被破坏，光合作用减弱，生长受抑制，造成植株生长延缓，畸形、矮化，甚至死亡。目前在实践中只有少数抗病毒药物可用，几乎没有任何药剂可以完全有效的控制TMV。
[0003]而化学农药的滥用会导致及生态环境恶化和生物多样性水平降低等一系列问题，同时危害着人类的健康，而传统农艺措施对植物病毒病的防治效果甚微，投入也较高。因此开发高效、低毒的新型抗TMV药剂迫在眉睫。植物是活性化合物的宝库，其产生的次生代谢物超过40万种，其中不乏植物长期进化对抗外界病原物侵染的防御物质。从植物宝库中发掘高效、具有不同作用机制的抗TMV化学防御物质，是一条可行的开发植物病毒抑制剂的研究路线。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种从千里光中提取化合物的方法及其应用，从千里光中分离出生物碱类化合物3
‑
吲哚甲醛和单萜类化合物香茅醇的制备方法和在抗烟草花叶病毒药物应用，解决缺少高效、低毒的新型抗TMV药剂的问题。
[0005]本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0006]一种从千里光中提取化合物的方法，从千里光中提取化合物3
‑
吲哚甲醛和香茅醇。
[0007]进一步的，包括如下步骤:
[0008]步骤一、以千里光地上部分为原料,干燥后粉碎，采用95％乙醇回流提取3次，减压浓缩至浸膏状；
[0009]步骤二、将乙醇提取物用蒸馏水溶解后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次得到萃取物，乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱分离；
[0010]步骤三、以石油醚～乙酸乙酯在体积比为50:1
‑
1:1的范围内进行梯度洗脱，得到七个流份Fr1～Fr7；
[0011]步骤四、选取Fr6经硅胶柱层析，以石油醚～乙酸乙酯在体积比为30:1～2:1的范围内进行梯度洗脱，得到Fr6.1～Fr6.19；
[0012]步骤五、选取Fr6.17采用葡聚糖凝胶色谱划段，通过半制备液相色谱分析后用葡聚糖凝胶色谱纯化得到3
‑
吲哚甲醛；
[0013]步骤六、选取Fr5采用MCI小孔树脂除色素，以甲醇～水在体积比为20％～100％的
范围内进行梯度洗脱，90％部分采用葡聚糖凝胶色谱划段，经硅胶柱层析，以石油醚～乙酸乙酯在体积比为100:1～5:1的范围内进行梯度洗脱，得到香茅醇。
[0014]进一步的，步骤二中的硅胶粒度为100
‑
200目。
[0015]进一步的，步骤五中，划段时所使用的葡聚糖凝胶色谱为体积比为1:1的氯仿～甲醇，纯化时所使用的葡聚糖凝胶色谱为甲醇。
[0016]进一步的，步骤六中所使用的葡聚糖凝胶色谱为甲醇。
[0017]本专利技术所述的化合物在制备抗烟草花叶病毒药物中应用。
[0018]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]本专利技术提出了从千里光中分离出生物碱类化合物3
‑
吲哚甲醛和单萜类化合物香茅醇的制备方法和在抗烟草花叶病毒药物应用，经活性测试表明,3
‑
吲哚甲醛对烟草花叶病毒初侵染的保护作用最强，香茅醇对感染TMV的心叶烟治疗作用最强，均高于阳性对照组宁南霉素的抑制率。3
‑
吲哚甲醛和香茅醇结构简单,且具有较好的抗毒活性，提取分离和后续的人工合成容易实现可作为抗烟草花叶病毒的先导化合物，用于抗烟草花叶病毒药物制剂研发。
附图说明
[0020]图1是两种化合物心叶烟活体半叶枯斑法实验结果，左图为3
‑
吲哚甲醛的保护作用，右图为香茅醇的治疗作用；
[0021]图2为间接EL I SA检测结果OD405值比较，阴性对照代表健康烟叶，阳性对照代表带毒烟叶。
具体实施方式
[0022]实施例，一种从千里光中提取化合物的方法，从千里光中提取化合物3
‑
吲哚甲醛和香茅醇。
[0023]包括如下步骤:
[0024]步骤一、以千里光地上部分为原料,干燥后粉碎，采用95％乙醇回流提取3次，减压浓缩至浸膏状。
[0025]步骤二、将乙醇提取物用蒸馏水溶解后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次得到萃取物，乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱分离，硅胶粒度为100
‑
200目。
[0026]步骤三、以石油醚～乙酸乙酯在体积比为50:1
‑
1:1的范围内进行梯度洗脱，得到七个流份Fr1～Fr7。
[0027]步骤四、选取Fr6经硅胶柱层析，以石油醚～乙酸乙酯在体积比为30:1～2:1的范围内进行梯度洗脱，得到Fr6.1～Fr6.19。
[0028]步骤五、选取Fr6.17采用葡聚糖凝胶色谱划段，所使用的葡聚糖凝胶色谱为体积比为1:1的氯仿～甲醇，通过半制备液相色谱分析后用葡聚糖凝胶色谱纯化得到3
‑
吲哚甲醛，所使用的葡聚糖凝胶色谱为甲醇。
[0029]步骤六、选取Fr5采用MCI小孔树脂除色素，以甲醇～水在体积比为20％～100％的范围内进行梯度洗脱，90％部分采用葡聚糖凝胶色谱划段，所使用的葡聚糖凝胶色谱为甲醇，经硅胶柱层析，以石油醚～乙酸乙酯在体积比为100:1～5:1的范围内进行梯度洗脱，得
到香茅醇。
[0030]实验一：
[0031]1、实验方法
[0032]采用活体、离体半叶枯斑法、叶圆片法及间接EL I SA检测法测定化合物的抗TMV病毒活性，采取先施药、后施药和混合施药三种施药方式测定化合物的对TMV的保护作用、治疗作用和钝化作用。
[0033](1)保护作用测定
[0034]将化合物稀释成50μg/ml，备用。挑选健康长势一致的心叶烟，每株挑选叶龄和叶片大小相似的3片上部叶片，用毛笔在所挑选叶片左半叶均匀摩擦施用供试化合物作为处理，右半叶摩擦施用相应浓度的DMSO溶液作为对照，并打孔做标记，以左半叶摩擦施用50μg/ml阳性药宁南霉素，右半叶摩擦施用相应浓度的DMSO溶液的处理作为阳性对照；6h后整片叶片用200
‑
400目金刚砂摩擦接种TMV400倍稀释液。待叶片表面药液挥发后，用蒸馏水将叶片上残留的金刚砂冲洗干净，然后放在无虫温室培养，2
‑
3天后，待枯斑症状明显时统计枯斑数，并按下列抑制率计算公式计算抑制率：
[0035][0036](2)治疗作用测定
[0037]挑选生长良好的心叶烟，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从千里光中提取化合物的方法，其特征在于：从千里光中提取化合物3
‑
吲哚甲醛和香茅醇。2.根据权利要求1所述的一种从千里光中提取化合物的方法，其特征在于：包括如下步骤:步骤一、以千里光地上部分为原料,干燥后粉碎，采用95％乙醇回流提取3次，减压浓缩至浸膏状；步骤二、将乙醇提取物用蒸馏水溶解后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次得到萃取物，乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱分离；步骤三、以石油醚～乙酸乙酯在体积比为50:1
‑
1:1的范围内进行梯度洗脱，得到七个流份Fr1～Fr7；步骤四、选取Fr6经硅胶柱层析，以石油醚～乙酸乙酯在体积比为30:1～2:1的范围内进行梯度洗脱，得到Fr6.1～Fr6.19；步骤五、选取Fr6.17采用葡聚糖凝胶色谱划段，通过半制备液相色谱分析后用葡聚糖凝胶色谱纯化得到3

【专利技术属性】
技术研发人员：闫晓慧，胡世俊，李雅丽，符滔，张东华，冯玲，伍建榕，刘丽，曹明明，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：