提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开一种提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂及其制备方法和应用，所述益生菌制剂中含有嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)菌株，其中，所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为106～10

【技术实现步骤摘要】
提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及微生物
以及畜牧生产
，具体涉及一种提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肠道黏膜是动物体内最大的黏膜免疫器官，是肠道抵御病原微生物的第一道生理屏障。分泌型免疫球蛋白A(SIgA)是由肠道黏膜组织分泌的主要抗体，它可以促进肠道黏膜表面共生菌的粘附与定植，对维持肠道内稳态起着非常重要的作用；同时，它也通过识别特异性病原体，使肠腔内病原微生物凝集无法粘附于肠黏膜表面，限制其穿透上皮细胞的能力，一定程度上起着保护肠道微结构的作用。
[0003]肠道微生物是肠道黏膜免疫的重要调节因子，当微生物群环境遭到破坏导致肠道免疫系统失衡，引发疾病。益生菌可通过改善肠道微生物构成、产生抗炎因子、抑制病原菌群生长，从而预防和治疗一些消化道疾病。肠道内环境稳态及菌群结构失调会导致机体炎症、增加胃肠道疾病等代谢疾病的患病风险。益生菌可能通过刺激肠黏膜SIgA含量的升高或其包被菌比例的升高，降低肠道炎症等途径增强肠道黏膜免疫性能。
[0004]新生哺乳动物免疫系统发育不完善，需要从母乳中吸收SIgA以被动获得免疫。例如出生1周后仔猪被动免疫达到最强，随后逐步降低，3
‑
4周龄的早期断奶仔猪抗病能力往往较低。肠道中SIgA含量缺失或其包被菌比例下降导致肠道菌群失调及黏膜免疫异常。如果在断奶时通过添加益生菌的方式提高其肠道内SIgA含量或其包被菌比例，将有可能缓解早期断奶应激带来的腹泻等问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂及其制备方法和应用；基于益生菌是肠道微生物群的重要组成成分，本专利技术通过添加益生菌的方式提高小鼠肠道黏膜免疫性能。
[0006]为实现上述目的，本专利技术所设计一种提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂，所述益生菌制剂中含有嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)菌株，其中，所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为106～10
10
个/毫升。
[0007]进一步地，所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为108～109个/毫升。
[0008]上述嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)菌株的获得方法如下：
[0009]1.嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)菌株菌株能购于市场或保藏中心，如购于商城北纳创联生物科技有限公司、中国菌种资源库保藏中心。
[0010]2.将成年商品猪新鲜粪便置于液态MRS培养基稀释，涂布于MRS培养基平板，37℃倒置培养1～2d，挑取长势良好且有溶钙圈的单菌落接种于10mL MRS液体培养基中，挑取菌液进行16SrDNA的PCR扩增与测序，将其16S rDNA序列在GenBank中进行比对，结果显示该菌株为嗜淀粉乳酸杆菌(Lactobacillus amylovorus)菌株。
[0011]本专利技术还提供了一种上述益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0012]将嗜淀粉乳杆菌菌株接种到液态MRS培养基中，置于厌氧培养箱中培养新鲜菌液，即为益生菌制剂，其中，所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为106～10
10
个/毫升。
[0013]进一步地，所述嗜淀粉乳杆菌菌株的接种量为1～2％(V/V,按体积百分比1～2％接种到液态MRS培养基中)。
[0014]再进一步地，所述菌株的接种量为1％。
[0015]再进一步地，所述厌氧培养箱的气体环境为：90％ N2,5％ CO2,5％H2；培养温度为37℃。
[0016]再进一步地，所述益生菌制剂中，菌株的活菌数量为108～109个/毫升。
[0017]本专利技术还提供了一种上述的益生菌制剂在提高肠道粘膜免疫性能中的应用。
[0018]作为优选方案，所述应用的方法为：
[0019]将益生菌制剂灌喂4周龄伪无菌C57BL/6雌鼠，每日灌服一次，连续灌服4周。
[0020]本专利技术的有益效果：
[0021]1.减少肠道炎症水平：本专利技术提供的嗜淀粉乳杆菌菌株能够显著降低伪无菌小鼠空肠和结肠中IL
‑
1β分泌量。
[0022]2.对小鼠生长发育无显著影响：本专利技术提供的嗜淀粉乳杆菌菌株对小鼠体重，肝脏重量与体重比，胸腺重量与体重比以及脾脏重量与体重比均没有影响，表明益生菌的灌服不会影响小鼠的生长发育。
[0023]3.提高肠道中SIgA包被菌比例：本专利技术提供的嗜淀粉乳杆菌菌株能够显著提高伪无菌小鼠肠道中SIgA包被菌的比例。
[0024]因此，此益生菌制剂对降低早期断奶仔猪肠道应激，有巨大应用前景。
附图说明
[0025]图1为实施例1制备的益生菌制剂对小鼠肠道组织中IL
‑
1β的浓度的影响图；
[0026]图2为实施例1制备的益生菌制剂对小鼠生长发育的影响图
[0027]图3为实施例1制备的益生菌制剂对小鼠肠道中SIgA包被菌(SIgA
+
菌)比例的影响图。
具体实施方式
[0028]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细描述，以便本领域技术人员理解。
[0029]提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂，益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌菌株的活菌数量为108～109个/毫升。
[0030]上述益生菌制剂由以方法得到：
[0031]1)将嗜淀粉乳杆菌菌株接种到液体MRS培养基中，置于厌氧培养箱中培养新鲜菌液，厌氧培养箱的气体环境为：90％ N2,5％CO2,5％ H2；培养温度为37℃。采用活菌计数法对菌液中的活菌计数，并根据计数结果将菌液中活菌数量调整为为106～10
10
个/毫升；然后加入甘油得到细菌冻存液；置于液氮中低温保存。
[0032]2)通过37℃水浴快速复苏液氮冻存的菌液，接种到新鲜的液态培养基中富集培养。待液态培养基变浑浊，用接种环沾取适量菌液划线接种于固态培养基中。固态培养基中
长出单菌落后，挑取单菌落接种到新鲜的液态培养基中富集培养。待液态培养基变浑浊，提取菌液中细菌基因组DNA，PCR扩增16S rDNA全长并纯化回收。将回收的16S rDNA片段送至测序公司进行测序，经测序结果与NCBI数据库进行比对，验证挑取的单菌落是否为原菌株。将经测序比对验证成功的菌液接种到新鲜的液态培养基扩大培养。采用活菌计数法对菌液中的活菌计数，并根据计数结果将菌液中的活菌数量调整为106～10
10
个/毫升。置于液氮中低温保存。
[0033]3)使用前通过37℃水浴快速解冻菌液，然后将制得的细菌悬液分别离心获取细菌沉淀，用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬细菌沉淀，每毫升益生菌制剂2的活菌总量为10
8～9
个。
[0034本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高肠道黏膜免疫性能的益生菌制剂，其特征在于：所述益生菌制剂中含有嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)菌株，其中，所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为106～10
10
个/毫升。2.根据权利要求1所述的益生菌制剂，其特征在于：所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为108～109个/毫升。3.一种权利要求1所述益生菌制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将嗜淀粉乳杆菌菌株接种到液态MRS培养基中，厌氧培养箱中培养新鲜菌液，即为益生菌制剂，其中，所述益生菌制剂中，嗜淀粉乳杆菌的活菌数量为106～10
10
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【专利技术属性】
技术研发人员：晏向华，江芹，朱晓妍，孙玲玲，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：