一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌(Enterococcus faecium)EFA5，保藏编号为：GDMCC NO.62904，保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市广东省科学院微生物研究所。研究表明，该菌株具有显著的益生特性，生长迅速，具有较强的产酸能力，可以在猪肠道内定殖。此外，还具有较强的抗猪流行性腹泻病毒能力。该菌株可作为益生菌用于制作饲料或饲料添加剂，并且在制备抗猪流行性腹泻病毒药物上具有广阔的应用场景。猪流行性腹泻病毒药物上具有广阔的应用场景。猪流行性腹泻病毒药物上具有广阔的应用场景。

【技术实现步骤摘要】
一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，尤其涉及一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌及其应用。

技术介绍

[0002]肠道疾病是现代化养猪场内普遍存在的问题，而腹泻类疾病在仔猪阶段比较易发，包括细菌性腹泻，病毒性腹泻，营养性腹泻以及寄生虫引起的腹泻，其中病毒性腹泻发生率高，传播快，传播范围广，并且死亡率高，治疗效果不明显，主要以预防为主，特别是在2010年至今不断爆发的猪流行性腹泻病毒(PEDV)，流行性腹泻是一种急性高度传染性传染病，主要表现为腹泻，呕吐，脱水等临床症状，在部分规模化猪场死亡率居高不下，有的甚至可以达到80％以上，是引起新生仔猪肠炎和死亡的重要原因，给养殖业造成了重大的经济损失。
[0003]针对疾病来说，预防的效果要好于治疗效果，尤其是病毒性疾病，PEDV也不例外，PEDV具有严格的细胞趋性和宿主特异性。然而，由于病毒遗传变异，有效的疫苗保护受到了影响；抗病毒药物通常有严重的毒副作用，使用量和效果有限。因此，需要不断寻求可控制病毒性疾病的有效方法，益生菌因其无毒、无抗药性、无残留、抗菌、抗病毒、促生长、绿色安全的优点受到广泛关注。
[0004]尿肠球菌具有显著的益生菌特性，且大多数菌株安全可靠，因此成为1989年美国公布的种可直接词喂的益生菌菌种之一，也是我国农业部《饲料添加剂品种目录》相关文件中允许使用的益生菌菌种，许多制药公司和企业将其制成调整人或动物肠道微生态的益生菌制剂。屎肠球菌可以调节肠道菌群平衡、减少肠道致病菌感染、治疗腹泻和肠炎以及增强宿主的免疫功能，其正常代谢可以产生有机酸、过氧化氢和细菌素等能够抑制和杀灭病原菌和病毒。已有相关研究表明，屎肠球菌可以抑制猪传染性胃肠炎病毒和猪甲型流感病毒的复制，但在猪流行性腹泻病毒上未见报道。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术提供了一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌及其应用，该菌株可用于制备可用于预防PEDV的饲料、饲料添加剂和药物，为PEDV的预防和治疗提供新的方向。
[0006]本专利技术的第一方面，提供一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌(Enterococcus faecium)EFA5，保藏编号为：GDMCC NO.62904保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期2022年10月19日，保藏地址为广东省广州市广东省科学院微生物研究所。
[0007]本专利技术的屎肠球菌(Enterococcus faecium)EFA5的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。该菌株具有以下微生物学特性：菌株EFA5在培养基上的菌落呈乳白色，中央光滑凸起，边缘粗糙；菌株在镜下呈短杆状，革兰氏染色阳性，无芽孢；生长迅速，在培养基上生长18h即可进入稳定期；具有较强的产酸能力，培养基pH在20小时内从5.4趋近于4.0；具有
良好的耐酸能力和耐胆盐能力；对猪小肠上皮细胞黏附能力比较强。
[0008]所述屎肠球菌EFA5由健康陆川母猪及断奶仔猪粪便分离得到。
[0009]所述屎肠球菌EFA5对猪流行性腹泻病毒具有抑制作用，通过CCK8法间接检测屎肠球菌EFA5发酵上清液对PEDV的抑制率，发现屎肠球菌EFA5发酵上清液在细胞水平对PEDV具有很强的的抑制率作用，1/4稀释度的发酵上清液对PEDV的抑制率约为0.6；通过检测屎肠球菌EFA5发酵上清液对PEDV滴度的影响，发现添加发酵上清液的实验组的TCID
50
为10
‑
3.50
/0.1ml，而不添加发酵上清液的对照组的TCID
50
为10
‑
4.33
/0.1ml；通过测定PEDV发酵上清液对病毒M基因拷贝数的影响，在培养24小时后，发现益生菌发酵上清液处理组的病毒M基因拷贝数极显著低于对照组。
[0010]本专利技术的第二方面，提供一种饲料或饲料添加剂，所述饲料或饲料添加剂含有屎肠球菌EFA5或其发酵产物。
[0011]本专利技术的第三方面，屎肠球菌EFA5在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的应用。
[0012]在其中一些实施例中，所述药物含有屎肠球菌EFA5和/或其发酵产物。
[0013]在其中一些实施例中，所述药物剂型为片剂、胶囊、粉剂、丸剂、颗粒剂或者溶液剂。
[0014]在其中一些实施例中，所述药物包含屎肠球菌EFA5以及药学上可以接受的辅料。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0016]本专利技术提供的屎肠球菌EFA5具有显著的益生特性，生长迅速，具有较强的产酸能力，可以在猪肠道内定殖，实验测定表明，本专利技术筛选到的屎肠球菌EFA5能够有效抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的复制，具有较强的抗病毒能力。本专利技术公开的一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌可作为益生菌用于制作饲料或饲料添加剂，并且在制备抗猪流行性腹泻病毒药物上具有广阔的应用场景。
附图说明
[0017]图1为屎肠球菌EFA5菌落形态图；
[0018]图2为屎肠球菌EFA5在100倍油镜下的革兰氏染色镜检图；
[0019]图3为屎肠球菌EFA5 16S rRNA遗传进化分析图；
[0020]图4为屎肠球菌EFA5生长曲线图；
[0021]图5为屎肠球菌EFA5产酸曲线图；
[0022]图6为屎肠球菌EFA5的酸和胆盐耐受测定结果图；
[0023]图7为屎肠球菌EFA5黏附IPEC
‑
J2细胞的黏附情况图；
[0024]图8为vero细胞的正常形态图；
[0025]图9为PEDV感染vero细胞以产生细胞病变的结果图；
[0026]图10为屎肠球菌EFA5发酵上清液的细胞毒性测定结果图；
[0027]图11为屎肠球菌EFA5发酵上清对PEDV抑制率测定结果图；
[0028]图12为屎肠球菌EFA5发酵上清对PEDV滴度的影响测定结果图；
[0029]图13为屎肠球菌EFA5发酵上清对PEDV M基因拷贝数的影响测定结果图。
具体实施方式
[0030]为了便于理解本专利技术，下面将参照相关附图对本专利技术进行更全面的描述。附图中给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0031]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与术语本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本专利技术。
[0032]本专利技术中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅起到非穷举式的列举描本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌(Enterococcus faecium)EFA5，保藏编号为：GDMCC NO.62904保藏在广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市广东省科学院微生物研究所。2.根据权利要求1所述的一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌EFA5，其特征在于，所述屎肠球菌EFA5由健康陆川母猪及断奶仔猪粪便分离得到。3.根据权利要求1所述的一株具有抗猪流行性腹泻病毒功能的屎肠球菌EFA5，其特征在于，所述屎肠球菌EFA5对猪流行性腹泻病毒具有抑制作用。4.一种饲料或饲料添加剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：李智丽，黄宗洋，赵云翔，苏朗驹，张琬玓，王一臣，伍俊杰，李英，郭锦玥，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：