【技术实现步骤摘要】
一种活体肿瘤细胞自噬水平的检测方法
[0001]本公开涉及生物
，尤其涉及一种活体肿瘤细胞自噬水平的检测方法。
技术介绍
[0002]自噬(Autophagy)是一个涉及到细胞自身结构通过溶酶体机制，负责将受损的细胞器、错误折叠的蛋白及其它大分子物质等运送至溶酶体降解并再利用的进化保守过程。自噬效应的发生取决于自噬流过程是否完成，而自噬流的意思是自噬的完整动态过程，包括自噬体形成、自噬体与溶酶体融合及后续内含物的降解和回收。
[0003]自噬与肿瘤有着多层次的关系，在正常细胞癌变前，细胞内自噬维持细胞的稳态，防止细胞转化：例如清除功能异常的线粒体、氧化还原活性的蛋白聚集体、病原体、导致基因损伤的物质，抑制基因毒性物质的累计；帮助DNA修复，保证有丝分裂的精准；保证细胞内部的代谢稳态等。对于癌变细胞，自噬能够帮助癌细胞在肿瘤微环境中保持代谢及氧化还原稳态，保留癌细胞干性，支持肿瘤的生长。在细胞外，自噬一方面能够通过降解内源性的促炎物质，限制癌前病变细胞产生的慢性炎症；另一方面自噬能够促进免疫原性死亡，释放ATP，...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种活体肿瘤细胞自噬水平的检测方法，其特征在于，所述方法包括：筛选稳定表达GFP
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mRFP
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LC3b和mCerulean的肿瘤细胞株；将稳定表达GFP
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mRFP
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LC3b和mCerulean的肿瘤细胞株接种到供体中，然后对供体的肿瘤区域进行活体成像；间隔数日后向供体中注射热量限制模拟药物以诱导肿瘤细胞自噬，对供体的肿瘤转移位点连续多天进行活体光学成像，确定肿瘤转移灶后，至少采集GFP、mRFP、mCerulean的荧光信号；根据不同时间点的活体光学成像和采集的荧光信号确定活体肿瘤细胞自噬水平。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，筛选稳定表达GFP
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mRFP
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LC3b和mCerulean的肿瘤细胞株，包括：构建包含mRFP
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GFP
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LC3b片段的PB载体质粒；将PB载体质粒转入表达mCerulean的肿瘤细胞对肿瘤细胞进行转染；培养转染后的肿瘤细胞，筛选多株稳定表达GFP
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mRFP...
【专利技术属性】
技术研发人员：张智红，祁淑红，代博雷，
申请(专利权)人：海南大学三亚研究院，
类型：发明
国别省市：
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