本发明专利技术提供了一株勒克氏菌CYIJM6及其应用，属于微生物技术领域。所述勒克氏菌CYIJM6于2022年10月12日保存到中国典型培养物保藏中心，保藏编号为M20221561。本发明专利技术提供的菌株溶磷能力强，适用干旱半干旱地区土壤中磷素的活化，利用该溶磷菌可以显著提高干旱半干旱地区土壤速效磷含量，减少磷肥的施用。本发明专利技术提供的溶磷菌株作用底物广泛，既可以释放有机酸等小分子活化固定态无机磷，也可以分泌磷酸酶水解有机磷，利用该溶磷菌可以显著提高土壤磷素活化能力。素活化能力。素活化能力。
【技术实现步骤摘要】
一株勒克氏菌CYIJM 6及其应用
[0001]本专利技术涉及微生物领域，特别是涉及一株勒克氏菌CYIJM 6及其应用。
技术介绍
[0002]磷肥施用是保证作物产量的必需措施之一，然而施入磷肥的75
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90％被土壤固定无法利用。大量磷素以无效态形式在土壤中积累，不仅影响土壤养分结构，还会提高面源污染的风险。更重要的是，磷肥的主要来源磷矿是不可再生资源，亟需有效的土壤磷素活化技术，能够高效利用土壤中积累的磷素，兼顾农业生产与磷素的可持续利用。
[0003]溶磷微生物能有效溶解土壤难溶磷、减少磷肥固定、增加作物吸磷量，从而提高磷肥利用率和提高作物产量，是目前世界上公认的安全、经济和有效的生物措施。然而，能够分离得到的高效溶磷微生物菌株种类和数量有限，筛选多与不同环境土壤的适配能力差。特别是干旱半干旱地区，土壤磷素有效性极低，水分胁迫导致大部分微生物活性与功能大幅减弱。因此，特异性耐旱溶磷微生物资源及其利用，对于活化土壤磷素、保障粮食产量以及减少环境污染和能源浪费具有重要的战略意义。
技术实现思路
[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一株勒克氏菌CYIJM 6及其应用，本专利技术提供的菌株溶磷能力强，适用干旱半干旱地区土壤中磷素的活化，利用该溶磷菌可以显著提高干旱半干旱地区土壤速效磷含量，减少磷肥的施用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一株勒克氏菌(Leclercia sp.)CYIJM 6，于2022年10月12日保存到中国典型培养物保藏中心，保藏编号为M 20221561。
[0007]本专利技术还提供了上述技术方案所述的勒克氏菌CYIJM 6在溶磷解磷中的应用。
[0008]优选的，所述溶磷解磷中的磷包括有机磷和/或无机磷。
[0009]优选的，所述有机磷包括植酸钙。
[0010]优选的，所述无机磷包括磷酸钙。
[0011]本专利技术的有益效果为：
[0012]本专利技术提供的菌株溶磷能力强，适用干旱半干旱地区土壤中磷素的活化，利用该溶磷菌可以显著提高干旱半干旱地区土壤速效磷含量，减少磷肥的施用。
[0013]本专利技术提供的溶磷菌株作用底物广泛，既可以释放有机酸等小分子活化固定态无机磷，也可以分泌磷酸酶水解有机磷，利用该溶磷菌可以显著提高土壤磷素活化能力。
[0014]本专利技术提供的溶磷菌Leclercia sp.CYIJM 6在磷酸钙(无机磷)固体培养基中培养5天后，溶磷指数为2.42，可溶性磷浓度达到430mg/L。
[0015]本专利技术提供溶磷菌Leclercia sp.CYIJM 6在植酸钙(有机磷)固体培养基中培养5天后，解磷指数为2.85，解磷量为228mg/L。
[0016]生物保藏说明
[0017]勒克氏菌(Leclercia sp.)CYIJM 6，于2022年10月12日保存到中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20221561，保藏地址：武汉大学。
附图说明
[0018]图1为以FastMinimum Evolution法构建序列进化树。
具体实施方式
[0019]本专利技术提供了一株勒克氏菌(Leclercia sp.)CYIJM 6，于2022年10月12日保存到中国典型培养物保藏中心，保藏编号为M 20221561。
[0020]本专利技术还提供了上述技术方案所述的勒克氏菌CYIJM 6在溶磷解磷中的应用。在本专利技术中，所述溶磷解磷中的磷优选包括有机磷和/或无机磷。在本专利技术中，所述有机磷优选包括植酸钙。在本专利技术中，所述无机磷包括磷酸钙。
[0021]为了进一步说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术进行详细地描述，但不能将它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0022]实施例1
[0023]1.菌株筛选与保存
[0024](1)采集朝阳双塔区农田耕层土壤，放置无菌袋低温保存。朝阳由于北部蒙古高原的干燥冷空气经常侵入，形成了半干旱半湿润易干旱地区，适合耐旱菌株的筛选。
[0025](2)将1g土壤放于100mL无机磷筛选液体培养基(葡萄糖：10g/L，Ca3(PO4)2：5g/L，MgCl2：5g/L，MgSO4·
7H2O：0.25g/L，KCl：0.2g/L，(NH4)2SO4：0.1g/L)，置于恒温培养箱28℃震荡培养24小时。
[0026](3)取1mL培养悬浊液接种于100mL新鲜配置的无机磷筛选液体培养基，置于恒温培养箱28℃震荡培养24小时。
[0027](4)重复(3)1次后，取培养悬浊液梯度稀释104和105倍，取200μL涂布无机磷筛选培养基平板，置于恒温培养箱28℃培养24
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48小时。
[0028](5)选择具有较大透明圈(即溶磷圈)的菌株，命名为CYIJM 6，计算溶磷指数(溶磷圈直径/菌落直径)。并将菌株在无机磷筛选平板纯化，单克隆纯化至少3次。纯化后的菌株用50％甘油与新鲜菌液1:1混合，于
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80℃超低温冰箱保存。
[0029]2.菌株鉴定
[0030]细菌基因组DNA快速抽提试剂盒提取菌株CYIJM 6的DNA，Qubit2.0检测提取DNA的浓度与纯度。以该DNA为模板，以16S rRNA 27F/1429R为引物，进行聚合酶链式反应(PCR)。PCR反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸90s，30个循环；72℃延伸10min。1.5％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物的质量后，扩增片段采用Sanger法测序，菌株16S rRNA序列如SEQ ID No.1所示。
[0031]序列在NCBI的16S rRNA数据库进行比对分析，将其与相似度较高的菌株序列以Fast Minimum Evolution法构建序列进化树(图1)，确定CYIJM 6为勒克氏菌(Leclercia)。
[0032]>Leclercia sp.CYIJM 6菌株16S rRNA序列(SEQ ID No.1)：
[0033]TCGAACGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTCTGGGAAACTGCCCGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGTGGGGGACC
TTCGGGCCTCACACCATCGGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCG本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株勒克氏菌(Leclercia sp.)CYIJM 6，于2022年10月12日保存到中国典型培养物保藏中心，保藏编号为M 20221561。2.权利要求1所述的勒克氏菌CYIJM 6在溶磷解磷中的应用。3.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜楠，胡菁旻，陈振华，张玉兰，陈利军，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：
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