抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用，涉及生物技术的技术领域。该抗体鉴定方法主要包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点，通过将待测抗体分别与四条鉴定多肽反应，依据检测结果判定待鉴定的抗体能否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点。其中四条鉴定多肽以基本多肽为基础，通过Tau蛋白的第217位磷酸化位点和潜在的磷酸化位点的磷酸化差异来判别待鉴定的抗体对目标磷酸化位点的特异性识别能力，缓解了现有技术中存在的识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点的抗体的筛选鉴定方法复杂的问题。杂的问题。

【技术实现步骤摘要】
抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用
[0001]本分案申请是基于申请号为2022109111199、申请日为2022年07月29日、专利技术名称为“抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物技术
，尤其是涉及一种抗体鉴定方法、多肽组合物、试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0003]异常过度磷酸化Tau蛋白(p
‑
Tau)形成的神经细胞内神经原纤维缠结是阿尔兹海默病(Alzheimer
’
s disease,AD)的病理特征之一。免疫学检测p
‑
Tau是目前辅助诊断AD应用较为广泛的一种方法，其中使用的p
‑
Tau抗体对磷酸化位点的特异性至关重要。
[0004]目前针对识别磷酸化位点的抗体的筛选鉴定方法中，需要根据推测的潜在的磷酸化位点，合成该位点定点磷酸化的多肽，以及其相应的该位点未磷酸化的多肽，两类多肽分别与待鉴定抗体反应，再降低有交叉反应的多肽浓度，得到反应性最强的多肽，判断为该抗体识别的磷酸化主要位点。因此，如何简化磷酸化位点的抗体的筛选鉴定方法是目前亟需解决的问题。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的在于提供一种多肽组合物，该组合物可以用于鉴定抗体能否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点，缓解了现有技术中存在的筛选识别Tau蛋白的第217的抗体过程复杂的技术问题。
[0007]本专利技术的第二目的在于提供一种使用上述多肽组合物鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点的方法。
[0008]本专利技术的第三目的在于提供一种包含上述多肽组合物的试剂盒、试剂盒的应用以及试剂盒的制备方法。
[0009]为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
[0010]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于抗体鉴定的多肽组合物，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点，所述多肽组合物包括四条鉴定多肽，所述四条鉴定多肽分别为：
[0011]第一鉴定多肽为基本多肽中只有Tau蛋白的第217位磷酸化的多肽；
[0012]第二鉴定多肽为基本多肽中无任何位点磷酸化的多肽；
[0013]第三鉴定多肽为基本多肽中Tau蛋白的第217位和潜在的磷酸化位点均磷酸化的多肽；
[0014]第四鉴定多肽为基本多肽中Tau蛋白的第217位未磷酸化，同时潜在的磷酸化位点磷酸化的多肽；
[0015]所述基本多肽由Tau蛋白的第217位氮端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；
[0016]所述潜在的磷酸化位点为：Tau蛋白的第217位氮端侧和碳端侧，分别与Tau蛋白的第217位相邻的第一个苏氨酸残基、丝氨酸残基或酪氨酸残基。
[0017]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种抗体鉴定方法，其中鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点；所述抗体鉴定方法包括：将待鉴定的抗体分别与四条鉴定多肽反应，检测结果同时满足(Ⅰ)～(Ⅲ)，则判定待鉴定的抗体是特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点的抗体：
[0018](Ⅰ)待鉴定的抗体与第一鉴定多肽和第三鉴定多肽反应为阳性；
[0019](Ⅱ)待鉴定的抗体与第二鉴定多肽反应为阴性；
[0020](Ⅲ)待鉴定的抗体与第四鉴定多肽反应为阴性或弱阳性；
[0021]所述四条鉴定多肽为上述多肽组合物。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0023]本专利技术提供的用于抗体鉴定的多肽组合物能够有效的判断待鉴定的抗体能否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点，特异性良好的识别上述目标磷酸化位点的抗体应具备以下特征：
[0024](1)识别Tau蛋白的第217位氨基酸磷酸化的多肽；(2)不识别Tau蛋白的第217位氨基酸未磷酸化的多肽，(3)Tau蛋白的第217位氨基酸相邻的T(苏氨酸残基)或S(丝氨酸残基)或Y(酪氨酸残基)的磷酸化不影响识别Tau蛋白的第217位氨基酸磷酸化的序列；(4)不和相邻的磷酸化T、S、Y有交叉反应，或和相邻的磷酸化T、S、Y有较弱交叉反应。满足这个特性的抗体识别的序列应在Tau蛋白的第217位氨基酸相邻潜在磷酸化氨基酸(T或S或Y)之间。
[0025]本专利技术依据上述规则设计的四条鉴定多肽能够有效的判断待鉴定的抗体能否特异性识别目标磷酸化位点，本专利技术通过实验验证了上述四条多肽能够筛选出特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点的抗体，并且由于第四鉴定多肽的存在，本专利技术提供的多肽组合物还能筛选出可能与Tau蛋白其他磷酸化位点产生非特异性反应的抗体，从而将其排除，在鉴定抗体是否特异性识别目标磷酸化位点的方法中第四条鉴定序列是必不可少的。
[0026]本专利技术提供的抗体鉴定方法操作简单，只需合成四条鉴定多肽，然后通过待检测抗体分别与四条鉴定多肽反应后的检测结果来判断待检测抗体对Tau蛋白的第217位磷酸化位点的特异性识别能力，该抗体鉴定方法简单有效。
具体实施方式
[0027]下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的
参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。
[0029]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于抗体鉴定的多肽组合物，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点，所述多肽组合物包括四条鉴定多肽，所述四条鉴定多肽分别为：
[0030]第一鉴定多肽为基本多肽中只有Tau蛋白的第217位磷酸化的多肽；
[0031]第二鉴定多肽为基本多肽中无任何位点磷酸化的多肽；
[0032]第三鉴定多肽为基本多肽中Tau蛋白的第217位和潜在的磷酸化位点均磷酸化的多肽；
[0033]第四鉴定多肽为基本多肽中Tau蛋白的第217位未磷酸化，同时潜在的磷酸化位点磷酸化的多肽；
[0034]所述基本多肽由Tau蛋白的第217位氮端侧相邻的第5～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于抗体鉴定的多肽组合物，其特征在于，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点，所述多肽组合物包括四条鉴定多肽，所述四条鉴定多肽分别为：第一鉴定多肽为基本多肽中只有Tau蛋白的第217位磷酸化的多肽；第二鉴定多肽为基本多肽中无任何位点磷酸化的多肽；第三鉴定多肽为基本多肽中Tau蛋白的第217位和潜在的磷酸化位点均磷酸化的多肽；第四鉴定多肽为基本多肽中Tau蛋白的第217位未磷酸化，同时潜在的磷酸化位点磷酸化的多肽；所述基本多肽由Tau蛋白的第217位氮端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5～7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；所述潜在的磷酸化位点为：Tau蛋白的第217位氮端侧和碳端侧，分别与Tau蛋白的第217位相邻的第一个苏氨酸残基、丝氨酸残基或酪氨酸残基。2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述基本多肽由Tau蛋白的第217位氮端侧相邻的第7个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第7个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；或，所述基本多肽由Tau蛋白的第217位氮端侧相邻的第6个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第6个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽；或，所述基本多肽由Tau蛋白的第217位氮端侧相邻的第5个氨基酸残基为起始，碳端侧相邻的第5个氨基酸残基为终点，以及之间的氨基酸残基组成的多肽。3.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，第一鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_13所示；第二鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_14所示；第三鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_15所示；第四鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_16所示。4.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，第一鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_17所示；第二鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_18所示；第三鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_19所示；第四鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_20所示。5.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，第一鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_21所示；第二鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_22所示；第三鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_23所示；第四鉴定多肽的氨基酸序列如Seq_24所示。6.抗体鉴定方法，其特征在于，所述鉴定包括鉴定抗体是否特异性识别Tau蛋白的第217位磷酸化位点；所述抗体鉴定方法包括：将待鉴定的抗体分别与四条鉴定多肽反应，检测结果同时满足(Ⅰ)～(Ⅲ)，则判定待鉴定的抗体是特异性识别Tau蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄聪，孙超，张鹏飞，陈文君，曾敏霞，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：