一种重组大肠杆菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种重组大肠杆菌及其构建方法，所述重组大肠杆菌包含有基因重组质粒，所述基因重组质粒为pJUN

【技术实现步骤摘要】
一种重组大肠杆菌及其构建方法


[0001]本专利技术涉及生物发酵
，特别是涉及一种重组大肠杆菌及其构建方法。

技术介绍

[0002]丁二酸又称琥珀酸，其重要用途之一为制备五元杂环化合物，其脱水生成的琥珀酸苷是制备药物、染料和醇酸树脂的重要原料，同时，丁二酸在医药上有抗痉挛、祛痰和利尿作用，还可以应用于食品调味领域，正因为其应用广泛，所以每年全球对其需求量巨大。
[0003]目前市场中绝大部分的丁二酸为石化法制得，主要通过顺丁烯二酸酐或反丁烯二酸在催化剂作用下加氢反应制得，而石油资源紧缺，环境污染巨大，所以急需一种绿色的可替代的丁二酸制备方法。大肠杆菌发酵制备丁二酸生产成本具有竞争力；利用可再生的农业资源包括二氧化碳作为原料，避免了对石化原料的依赖；减少了化学合成工艺对环境的污染，但是现有技术中，大肠杆菌发酵制备丁二酸产率较低，规模化生产成本较高。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术中大肠杆菌发酵制备丁二酸产率低，规模化生产成本高的问题，而提供一种重组大肠杆菌。
[0005]本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌包含有基因重组质粒，所述基因重组质粒为pJUN
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galp
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glk、pACYC
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cgmdh
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ppc或pRSF
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pck中的一种或多种，所述pJUN
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galp
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glk、pACYC
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cgmdh
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ppc或pRSF
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pck的基因序列如Seq.ID No 1
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3所示。2.如权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组质粒为pACYC
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cgmdh
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ppc，所述重组大肠杆菌的保藏号为CGMCC NO.26002，保存地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存时间为2022年10月31日；所述重组质粒为pJUN
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galp
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glk，所述重组大肠杆菌的保藏号为CGMCC NO.26004，保存地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存时间为2022年10月31日；所述重组质粒为pRSF
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pck，所述重组大肠杆菌的保藏号为CGMCC NO.26005，保存地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存时间为2022年10月31日。3.如权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，通过以下方法构建：步骤1，构建基因重组质粒；步骤2，将步骤1构建得到的基因重组质粒通过化学转化的方法转入大肠杆菌中，得到所述重组大肠杆菌，将所述重组大肠杆菌的菌株保藏备用。4.如权利要求3所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组质粒通过以下方法构建：基于pRSF
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Duet1质粒，使用gibson组装，将来源于谷棒杆菌的cgmdh基因连接至所述pRSF
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Duet1质粒中，构成pACYC
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cgmdh
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ppc质粒；基于pACYC
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Duet
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1质粒，使用gibson组装，将来源于大肠杆菌的pck基因连接至所述pRSF
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Duet1质粒中，构成pRSF
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pck质粒；基于pJUN
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C5质粒，使用gibson组装，将来源于源于大肠杆菌的galp和glk基因连接至所述pRSF
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Duet1质粒中，构成pJUN
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galp
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glk质粒。5.如权利要求4所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述pRSF
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pck质粒通过以下方法构建：设计pck的正反向引物，结合质粒骨架，设计同源臂的引物pRSF
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F/R，PCR后胶回收，测量浓度后使用GIBSON连接，涂Kan板后挑取克隆验证，并使用T7正反向引物测序，验证正确后得到pRSF
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PCK；pJUN
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galp
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glk质粒通过以下方法构建：使用无缝克隆将galp连接至pJUN
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C5载体上，galp使用组成型启动子PUTR
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infc
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rplT表达，将glk连接至pJUN
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benM上，使用组成型启动子PL1986表达，之后将glk和启动子PL1986一起作为片段p下来连接至pJUN
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benM
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galp上得到pJUN
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galp
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glk质粒；所述pACYC
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cgmdh
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ppc质...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜睿康，薛怡芸，李承，张天元，
申请(专利权)人：苏州聚维元创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：