采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法技术

本发明专利技术公开了一种采用除磷脂板和液相色谱

【技术实现步骤摘要】
采用除磷脂板和液相色谱
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质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法


[0001]本专利技术属于药物色谱、质谱分析
，涉及化学品的检测方法，具体涉及一种生物样品中二甲双胍和格列齐特的检测方法，特别涉及一种采用除磷脂板和液相色谱
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质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法。

技术介绍

[0002]二甲双胍为双胍类降糖药，可以提高靶细胞对胰岛素的敏感性，影响2型糖尿病患者脂肪代谢，提高葡萄糖的摄取和利用，同时具有改善血脂水平和纤溶蛋白活性作用。格列齐特属于磺脲类口服降糖药，通过与β细胞膜上的磺酰脲受体特异性结合，从而使钾离子通道关闭，引起膜电位改变，开启钙离子通道，使胞液内钙离子升高，促进胰岛素分泌，而降低血糖。两种药物作用机理互补，联合使用能提高治疗有效率，且药物不良反应发生风险并无明显增加。由江苏联环药业股份有限公司生产的二甲双胍格列齐特片(商品名：度和，含250mg二甲双胍和40mg格列齐特)，可以替代格列齐特片和二甲双胍片联用，治疗2型糖尿病患者。因此通过检测血浆中二甲双胍和格列齐特的浓度来调整给药剂量或时间，了解药物在体内的药代动力学特征，保证用药的安全性和有效性有重要意义。
[0003]目前同时检测人体血浆中二甲双胍和格列齐特浓度方法的文献仅一篇：Guo ping Zhong等于2005年发表的一篇“Simultaneous determinationmetformin andg1ic1azide in human plasma by liquid chromatography
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tandem mass spectrometry：application to a bioequivalence studytwo formulations in healthy volunteers”，但此文献采用的方法血浆用量大(200μL)，进样量大(20μL)，灵敏度较低(二甲双胍和格列齐特的定量限分别为7.8ng/mL和10ng/mL)，且样品中磷脂对二甲双胍测定有较明显的离子抑制，影响样品检测，无法满足二甲双胍和格列齐特联合用药后人体内浓度测定要求。针对上述文献方法的不足，需开发具有高灵敏度、低样品量、无离子抑制的液相色谱
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质谱法，用于二甲双胍和格列齐特联合用药后，血浆中二甲双胍和格列齐特浓度得测定。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的缺陷，本专利技术提供采用除磷脂板和液相色谱
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质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，本专利技术方法可专属、灵敏、快速地测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度，主要适用于二甲双胍和格列齐特联合用药后人体血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的测定。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]采用除磷脂板和液相色谱
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质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，包括以下步骤：
[0007]S1：配制混合标曲工作液：
[0008]S101：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍
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甲醇溶液，作为二甲双胍储备液1；
[0009]S102：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特
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甲醇溶液，作为格列齐特储备液1；
[0010]S103：将二甲双胍储备液1与格列齐特储备液1按体积比2：1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～32000ng/mL二甲双胍、40～16000ng/mL格列齐特的混合标曲工作液；
[0011]S2：配制标曲样品：将S1所得混合标曲工作液加入空白血浆中，控制混合标曲工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1600ng/mL二甲双胍、2～800ng/mL格列齐特的标曲样品；
[0012]S3：配制混合质控工作液：
[0013]S301：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍
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甲醇溶液，作为二甲双胍储备液2；
[0014]S302：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特
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甲醇溶液，作为格列齐特储备液2；
[0015]S303：将二甲双胍储备液2与格列齐特储备液2按体积比2：1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～24000ng/mL二甲双胍、40～12000ng/mL格列齐特的混合质控工作液；
[0016]S4：配制质控样品：将S3所得混合质控工作液加入空白血浆中，控制混合质控工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1200ng/mL二甲双胍、2～600ng/mL格列齐特的质控样品；
[0017]S5：配制混合内标工作液：
[0018]S501：配制0.2mg/mL二甲双胍
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d6‑
甲醇溶液，作为二甲双胍
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d6储备液；
[0019]S502：配制0.2mg/mL格列齐特
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d4‑
甲醇溶液，作为格列齐特
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d4储备液；
[0020]S503：按照体积比1：1将二甲双胍
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d6储备液、格列齐特
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d4储备液混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含500ng/mL二甲双胍
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d6、500ng/mL格列齐特
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d4的混合内标工作液；
[0021]S6：前处理：
[0022]S601：标曲、质控样品前处理：取不同浓度标曲、质控样品50μL至OstroTM96孔磷脂去除板中，加入50μL混合内标工作液，加入300μL沉淀剂乙腈，涡旋5min，负压操作10min，使用2mL的赛默飞96孔深孔板收集洗脱后的样品，样品在40℃的N2流中干燥，用300μL的纯乙腈溶液复溶，5μL进样分析；
[0023]S602：生物样品前处理：取50μL血浆至OstroTM 96孔磷脂去除板中，加入50μL混合内标工作液，加入300μL沉淀剂乙腈，涡旋5min，负压操作10min，使用2mL的赛默飞96孔深孔板收集洗脱后的样品，样品在40℃的N2流中干燥，用300μL的纯乙腈溶液复溶，5μL进样分析；
[0024]S7：液相色谱
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质谱法检测：通过液相色谱
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质谱法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中二甲双胍和格列齐特的浓度。
[0025]进一步地，所述S1混合标曲工作液中的二甲双胍浓度分别为80、160、800、3200、8000、16000、25600、32000ng/mL，格列齐特浓度分别为40、80、400、1600、4000、8000、12800、16000ng/mL。
[0026]进一步地，所述S2标曲样品中的二甲双胍浓度分别为4ng/mL、8ng/mL、40ng/mL、160ng/mL、400ng/mL、800ng/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.采用除磷脂板和液相色谱
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质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：配制混合标曲工作液：S101：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍
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甲醇溶液，作为二甲双胍储备液1；S102：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特
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甲醇溶液，作为格列齐特储备液1；S103：将二甲双胍储备液1与格列齐特储备液1按体积比2:1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～32000ng/mL二甲双胍、40～16000ng/mL格列齐特的混合标曲工作液；S2：配制标曲样品：将S1所得混合标曲工作液加入空白血浆中，控制混合标曲工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1600ng/mL二甲双胍、2～800ng/mL格列齐特的标曲样品；S3：配制混合质控工作液：S301：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍
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甲醇溶液，作为二甲双胍储备液2；S302：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特
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甲醇溶液，作为格列齐特储备液2；S303：将二甲双胍储备液2与格列齐特储备液2按体积比2:1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～24000ng/mL二甲双胍、40～12000ng/mL格列齐特的混合质控工作液；S4：配制质控样品：将S3所得混合质控工作液加入空白血浆中，控制混合质控工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1200ng/mL二甲双胍、2～600ng/mL格列齐特的质控样品；S5：配制混合内标工作液：S501：配制0.2mg/mL二甲双胍
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d6‑
甲醇溶液，作为二甲双胍
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d6储备液；S502：配制0.2mg/mL格列齐特
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d4‑
甲醇溶液，作为格列齐特
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d4储备液；S503：按照体积比1：1将二甲双胍
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d6储备液、格列齐特
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d4储备液混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含500ng/mL二甲双胍
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d6、500ng/mL格列齐特
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d4的混合内标工作液；S6：前处理：S601：标曲样品、质控样品前处理：取不同浓度标曲样品、质控样品各50μL至OstroTM96孔磷脂去除板中，加入50μL混合内标工作液，加入300μL沉淀剂乙腈，涡旋5min，负压操作10min，使用2mL的赛默飞96孔深孔板收集洗脱后的样品，样品在40℃的N2流中干燥，用300μL的纯乙腈溶液复溶，5μL进样分析；S602：待测样品前处理：取50μL血浆至OstroTM 96孔磷脂去除板中，加入50μL混合内标工作液，加入300μL沉淀剂乙腈，涡旋5min，负压操作10min，使用2mL的赛默飞96孔深孔板收集洗脱后的样品，样品在40℃的N2流中干燥，用300μL的纯乙腈溶液复溶，5μL进样分析；S7：液相色谱
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质谱法检测：通过液相色谱
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质谱法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中二甲双胍和格列齐特的浓度。2.根据权利要求1所述的采用除磷脂板和液相色谱
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质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，其特征在于，所述S1混合标曲工作液中的二甲双胍浓度分别为80、160、800、3200、8000、16000、25600、32000ng/mL，格列齐特浓度分别为40、80、400、1600、
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【专利技术属性】
技术研发人员：沈陈林，蔡璠璠，
申请(专利权)人：合肥市开凡检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：