一种干细胞培养上清凝胶制备方法技术

本发明专利技术属于医用生物材料技术领域，尤其是涉及一种干细胞培养上清凝胶制备方法，包括步骤(一)：在不含血清的干细胞培养基中对间充质干细胞进行培养；步骤(二)：用乙酸乙酯溶液经过萃取和纯化后所得到的无细胞上清液制备乙酸乙酯提取液，对乙酸乙酯提取液经过离心、过滤和冻干，得到干细胞培养上清，并备用；步骤(三)：将步骤(二)所得干细胞培养上清中加入硫酸铵，并进行搅拌、静置和离心，最后取沉淀并加水溶解、过滤，随后得蛋白滤液。本发明专利技术将间充质干细胞和生物活性玻璃体相结合，可促进皮肤创面的快速愈合，也能够提高骨细胞诱导分化的效果，适用于常见的各种较难愈合的创面，适用范围较广，而且在使用时异物感不强烈。而且在使用时异物感不强烈。

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞培养上清凝胶制备方法


[0001]本专利技术属于医用生物材料
，尤其是涉及一种干细胞培养上清凝胶制备方法。

技术介绍

[0002]在目前的医学中，创面的愈合过程是一个精细复杂、严格有序的动态过程，包括炎症期、增生期和重塑期，其中任何一个过程出现问题，都会导致创面愈合障碍，目前修复创面最主要的方法就是手术治疗，将开放创口通过手术缝合转变为闭合伤口，从而加速创面愈合。
[0003]间充质干细胞是成体干细胞的一种，它对细胞的修复与再生作用已经被初步证实。其在创面愈合中起到了至关重要的关键作用，在间充质干细胞的培养过程中，需要使用干细胞培养上清凝胶，因此也需要一种干细胞培养上清凝胶的制备方法，而目前市面上常见的干细胞培养上清凝胶制备方法，不适用于各种创面及难愈合创面，且具有强烈的异物感，给操作带来不便。因此，急需对现有的干细胞培养上清凝胶制备方法进行改进，提供一种干细胞培养上清凝胶制备方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于针对现有技术中存在的不足，提供一种设计合理，结构简单，适用范围广、操作便捷的干细胞培养上清凝胶制备方法，用于解决现有技术中存在的不适用于各种创面及难愈合创面，且具有强烈的异物感，给操作带来不便等问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种干细胞培养上清凝胶制备方法，其包括
[0007]步骤(一)：在不含血清的干细胞培养基中对间充质干细胞进行培养；
[0008]步骤(二)：用乙酸乙酯溶液经过萃取和纯化后所得到的无细胞上清液制备乙酸乙酯提取液，对乙酸乙酯提取液经过离心、过滤和冻干，得到干细胞培养上清，并备用；
[0009]步骤(三)：将步骤(二)所得干细胞培养上清中加入硫酸铵，并进行搅拌、静置和离心，最后取沉淀并加水溶解、过滤，随后得蛋白滤液；
[0010]步骤(四)：将步骤(三)所得蛋白滤液经凝胶柱纯化，得纯化上清：
[0011]步骤(五)：将硅凝胶、硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂依次加入至盐酸水溶液中，置于50～60℃环境中，搅拌，将所得溶胶再置于55～66℃环境中陈化，得湿凝胶，将所述湿凝胶置于100～120℃环境中干燥，得干凝胶；将所述干凝胶置于450～550℃环境中焙烧2～4h，再经气流粉碎，即得纳米级的生物活性玻璃体，并备用；
[0012]步骤(六)：将步骤(四)所得纯化上清进行冻干，得到冻干上清，并备用；
[0013]步骤(七)：按照质量份数依次称取冻干上清、甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂、卡波姆以及纯净蒸馏水；
[0014]步骤(八)：将制备得到的冻干上清用纯净蒸馏水溶解，依次加入甲基纤维素、壳聚
糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂和卡波姆，并将上述原料进行搅拌混合均匀，即得干细胞培养上清凝胶。
[0015]作为一种优选的实施方式，所述步骤(五)中，所述硅凝胶、硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂的质量比为：55～63份、12～18份、1～2份、10～20份。
[0016]作为一种优选的实施方式，所述步骤(三)中离心条件依次为7000rpm
‑
8000rpm、4℃、10min
‑
20min和9000rpm
‑
10000rpm、4℃、10min
‑
20min。
[0017]作为一种优选的实施方式，所述步骤(三)中加入硫酸铵的过程在0℃冰浴中进行。
[0018]作为一种优选的实施方式，所述干细胞培养上清凝胶按照质量份数计，由冻干上清25～45份、甲基纤维素25～30份、壳聚糖20～25份、生物活性玻璃体5～15份、透明质酸钠7～10份、植物精油8～13份、医用凡士林5～7份、凝胶固化剂1～3份、卡波姆0.2～0.3份以及纯净蒸馏水组成。
[0019]作为一种优选的实施方式，所述步骤(四)中采用的凝胶柱为葡聚糖G
‑
25凝胶柱。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0021]在本专利技术的方案中：
[0022]将间充质干细胞和生物活性玻璃体相结合，可促进皮肤创面的快速愈合，也能够提高骨细胞诱导分化的效果，适用于常见的各种较难愈合的创面，适用范围较广，而且在使用时异物感不强烈，操作起来也较为便捷。
具体实施方式
[0023]以下所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，并不代表与本专利技术相一致的所有实施例。现结合对示例性实施例进行如下说明：
[0024]本专利技术干细胞培养上清凝胶制备方法，其包括
[0025]步骤(一)：在不含血清的干细胞培养基中对间充质干细胞进行培养；
[0026]步骤(二)：用乙酸乙酯溶液经过萃取和纯化后所得到的无细胞上清液制备乙酸乙酯提取液，对乙酸乙酯提取液经过离心、过滤和冻干，得到干细胞培养上清，并备用；
[0027]步骤(三)：将步骤(二)所得干细胞培养上清中加入硫酸铵，并进行搅拌、静置和离心，最后取沉淀并加水溶解、过滤，随后得蛋白滤液；
[0028]步骤(四)：将步骤(三)所得蛋白滤液经凝胶柱纯化，得纯化上清：
[0029]步骤(五)：将硅凝胶、硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂依次加入至盐酸水溶液中，置于50～60℃环境中，搅拌，将所得溶胶再置于55～66℃环境中陈化，得湿凝胶，将所述湿凝胶置于100～120℃环境中干燥，得干凝胶；将所述干凝胶置于450～550℃环境中焙烧2～4h，再经气流粉碎，即得纳米级的生物活性玻璃体，并备用；
[0030]步骤(六)：将步骤(四)所得纯化上清进行冻干，得到冻干上清，并备用；
[0031]步骤(七)：按照质量份数依次称取冻干上清、甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂、卡波姆以及纯净蒸馏水；
[0032]步骤(八)：将制备得到的冻干上清用纯净蒸馏水溶解，依次加入甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂和卡波姆，并将上述原料进行搅拌混合均匀，即得干细胞培养上清凝胶。
[0033]作为优选的实施方式，在上述结构的基础上，进一步的，步骤(五)中，所述硅凝胶、
硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂的质量比为：55～63份、12～18份、1～2份、10～20份。
[0034]作为优选的实施方式，在上述结构的基础上，进一步的，步骤(三)中离心条件依次为7000rpm
‑
8000rpm、4℃、10min
‑
20min和9000rpm
‑
10000rpm、4℃、10min
‑
20min。
[0035]作为优选的实施方式，在上述结构的基础上，进一步的，步骤(三)中加入硫酸铵的过程在0℃冰浴中进行。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干细胞培养上清凝胶制备方法，包括步骤(一)：在不含血清的干细胞培养基中对间充质干细胞进行培养；步骤(二)：用乙酸乙酯溶液经过萃取和纯化后所得到的无细胞上清液制备乙酸乙酯提取液，对乙酸乙酯提取液经过离心、过滤和冻干，得到干细胞培养上清，并备用；步骤(三)：将步骤(二)所得干细胞培养上清中加入硫酸铵，并进行搅拌、静置和离心，最后取沉淀并加水溶解、过滤，随后得蛋白滤液；步骤(四)：将步骤(三)所得蛋白滤液经凝胶柱纯化，得纯化上清：步骤(五)：将硅凝胶、硝酸钠、磷酸三乙酯、四水硝酸钙和模板剂依次加入至盐酸水溶液中，置于50～60℃环境中，搅拌，将所得溶胶再置于55～66℃环境中陈化，得湿凝胶，将所述湿凝胶置于100～120℃环境中干燥，得干凝胶；将所述干凝胶置于450～550℃环境中焙烧2～4h，再经气流粉碎，即得纳米级的生物活性玻璃体，并备用；步骤(六)：将步骤(四)所得纯化上清进行冻干，得到冻干上清，并备用；步骤(七)：按照质量份数依次称取冻干上清、甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂、卡波姆以及纯净蒸馏水；步骤(八)：将制备得到的冻干上清用纯净蒸馏水溶解，依次加入甲基纤维素、壳聚糖、生物活性玻璃体、透明质酸钠、植物精油、医用凡士林、凝胶固化剂和卡波姆，并将上述原料进行搅拌混合均匀，即得干细...

【专利技术属性】
技术研发人员：董亮，刘柳，赵静敏，
申请(专利权)人：北京赛维森国际生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：