原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术属于医学免疫学和肿瘤学领域，公开了一种原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用，抗原表位肽分别是由HLA

【技术实现步骤摘要】
原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用
[0001]本案是针对专利技术专利名称为“原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用”、申请号为“201911286067.5”、申请日为“2019
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13”的分案。


[0002]本专利技术属于医学免疫学和肿瘤学领域，特别涉及三种原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用。

技术介绍

[0003]原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤和第3位肿瘤致死病因，严重威胁我国人民的生命和健康。原发性肝癌的病理类型，主要是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)，占到85％～90％；还有少数为肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)和HCC
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ICC混合型等，三者在发病机制、生物学行为、分子特征、临床表现、病理组织学形态、治疗方法以及预后等方面差异较大。
[0004]在我国，HCC的高危人群主要有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和/或丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染、长期酗酒(酒精性肝病)、非酒精脂肪性肝炎、食用黄曲霉毒素污染的食物、多种原因引起的肝硬化以及有肝癌家族史的人群，同时，年龄40岁以上的男性风险较大。近年的研究提示糖尿病、肥胖和吸烟等也是HCC的危险因素，值得关注。
[0005]AFP、GPC3、GP73是常见的几种在肝癌中存在过表达的肿瘤相关抗原，在肝癌的诊断、治疗、病程监测等发面被广泛研究。血清甲胎蛋白(alpha
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fetoprotein,AFP)阳性，是指AFP≥400μg，且排除慢性或活动性肝炎、肝硬化、睾丸或卵巢胚胎源性肿瘤以及妊娠等，高度怀疑肝癌。AFP低度升高者，应进行动态观察，并与肝功能变化对比分析。约30％的肝癌患者AFP水平正常，应检测甲胎蛋白异质体。GPC3是硫酸类肝素糖蛋白之一，高表达于原发性肝癌组织中，而其他正常组织中基本不表达或呈低表达。GPC3能够促进肿瘤细胞增殖、分化，通过结合细胞外基质、蛋白酶以及生长因子等，对肝癌肿瘤的形成、生长和转移发挥了促进作用。GP73是一种高尔基体II型跨膜蛋白，生理情况下在肝细胞中表达稀少。检测原发性肝癌患者血清GP73水平发现其呈显著高表达，且GP73的表达与患者肝功能和病情呈负相关，是肝细胞破坏严重程度的有效指标之一。本专利选用此三种肝癌相关肿瘤抗原进行研究。
[0006]细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)是介导适应性免疫应答的核心细胞，在抗感染、抗肿瘤以及超敏反应和自身免疫病的发生中起着至关重要的作用，其细胞膜上的T细胞受体(T cell receptor,TCR)能够特异性识别并结合抗原递呈细胞表面MHC I类分子与抗原肽的复合物，即MHC/抗原肽复合体分子。CTL表位是指与MHC I类分子结合的抗原肽，是抗原分子中能被TCR特异性识别的线性片段或空间构象性结构，是引起免疫应答反应的基本抗原单位，在CTL活化过程中扮演着关键角色。
[0007]MHC系统指主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)，是脊椎动物基因组中一组紧密连锁的基因群，编码表达MHC I类和II类蛋白分子。HLA(human leukocyte antigen)是人类的MHC系统，是人体最复杂的基因群，在人群中具有高度多态性。HLA在抗原识别、抗原呈递等机体免疫过程中发挥重要作用，是影响人体免疫反应的主要因素。对于人类肝癌而言，HLAI类分子主要负责将内源性肝癌相关抗原呈递给CD8
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CTL，活化的CTLs通过分泌穿孔素和颗粒酶等使表达肿瘤相关抗原的肿瘤细胞凋亡。因此，动态监测肝癌相关抗原特异性CD8
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T细胞的数量和功能可以准确反映肝癌患者针对肝癌相关抗原的特异性免疫功能状态。由于不同人的HLA分子型别不同，其对肝癌不同抗原的加工、处理和提呈能力也不相同，从而引起不同强度的肝癌相关抗原特异性T细胞免疫应答反应。根据肝癌患者不同的HLA分子型别，选择其所提呈的肝癌相关抗原的抗原肽，动态监测该肝癌相关抗原特异性的CD8
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T细胞的数量和反应活性，对肝癌患者的疾病进程监测、诊断与治疗方案的制定、疗效观察和预后转归的判断等都有重要意义，是实现肝癌精准医学治疗的重要技术手段。同时，利用这些HLA
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A分子高亲和力结合的肝癌相关抗原的抗原肽，还可以制备多肽疫苗或基因疫苗，预防和治疗肝癌。
[0008]但是，目前已明确的被各种HLA分子所提呈并能刺激机体引起T细胞应答反应的原发性肝癌相关抗原T细胞表位仍然极少，从而限制了对携带不同HLA等位基因的肝癌患者开展特异性T细胞检测，也限制了肝癌特异性T细胞在肝癌发生发展中的作用研究，更限制了基于HLA基因个体差异性及其提呈的肝癌相关抗原肽差异性的个性化检测和精准免疫治疗。

技术实现思路

[0009]本专利技术解决现有技术中存在的上述技术问题，提供肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽及其应用。
[0010]为解决上述问题，本专利技术的技术方案如下：肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽，其氨基酸序列为如下所示表位肽序列中的任一种：
[0011][0012][0013](GPC3)、高尔基体跨膜糖蛋白73(GP73)的抗原肽序列，上述序列分别与HLA
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A0201、HLA
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A1101、HLA
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A2402、HLA
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A3101、HLA
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A0206、HLA
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A0207、HLA
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A3303、HLA
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A3001、HLA
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A0203、HLA
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A1102、HLA
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A0301、HLA
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A0101、HLA
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A2601分子呈高亲和力结合，在抗原提呈细胞表面组成“HLA/抗原肽”复合体分子，与抗原肽特异性CD8
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T细胞克隆结合，刺激其活化、增殖和分化，发挥抗肝癌免疫效应作用。
[0017]原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽序列可用于制备肝癌多肽疫苗或基因疫苗：多肽疫苗制备：按照本专利技术的多肽序列人工合成一种或多种多肽，与佐剂混合制成可溶性制剂，或者由生物纳米材料装载制成纳米多肽疫苗，注入肝癌患者体内，激发患者肝癌相关抗原特异性T细胞活化、增殖，并增强其杀瘤细胞活性，从而制备成肝癌多肽疫苗。基因疫苗制备：按照本分明的多肽序列，构建一种多肽或多种多肽的重组DNA基因片段、重组质粒或者重组病毒载体，注入肝癌患者体内，使该重组基因在体内表达一种或多种多肽，激发患者肝癌相关抗原特异性T细胞活化、增殖，并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽的氨基酸序列为HLA
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A分子限制性的表位肽序列中的任意一种：FYSALPGYI、NYGRLQQDVL、LYQDEKAVL。2.一种利用要求1所述的原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽进行单个氨基酸的去除或者更换后所得抗原表位肽。3.如权利要求1所述的原发性肝癌相关抗原的胸腺依赖性淋巴细胞抗原表位肽和权利要求2所述的抗原表位肽在制备肝癌多肽疫苗或基因疫苗中...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈传来，金萧萧，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：