一种恶臭假单胞菌工程菌及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种恶臭假单胞菌工程菌及其制备方法和应用，该恶臭假单胞菌工程菌，包括恶臭假单胞菌和导入恶臭假单胞菌的重组质粒；恶臭假单胞菌的基因组中敲除了影响乙二醇代谢的关键基因；重组质粒包含SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.6所示的对苯二甲酸分解代谢模块；或SEQ ID NO.4所示的对苯二甲酸分解代谢模块和SEQ ID NO.3所示的对苯二甲酸转运模块。本发明专利技术以恶臭假单胞菌为出发菌株，通过敲除影响乙二醇代谢的关键内源基因，并在此基础上外源导入对苯二甲酸代谢模块和对苯二甲酸转运模块，得到了恶臭假单胞菌工程菌；该恶臭假单胞菌工程菌可以高效共利用对苯二甲酸与乙二醇。菌工程菌可以高效共利用对苯二甲酸与乙二醇。菌工程菌可以高效共利用对苯二甲酸与乙二醇。

【技术实现步骤摘要】
一种恶臭假单胞菌工程菌及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种恶臭假单胞菌工程菌及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]由对苯二甲酸(TPA)和乙二醇(EG)聚合而成的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)，是人类生活中最广泛使用的塑料之一。PET的不恰当回收会造成严重的环境问题，而生物法升级回收是近年来全球关注的热点问题。
[0003]PET的完全降解是从人工微生物联合体的模式开始发展的，即构建一个PET降解模块，一个EG转化模块和一个TPA转化模块来执行不同的功能，可以加速PET的降解，并实现其完全转化。然而微生物联合体需要较为复杂的混合模式，不利于实际应用。PET生物降解的瓶颈之一是利用同一株菌同时将TPA与EG高效分解代谢。
[0004]恶臭假单胞菌ATCC 47054(即Pseudomonas putida KT2440)是近年来引起学者广泛兴趣的一种新的合成生物学底盘，已被用于代谢难降解底物，包括木质素和石油基塑料等。但是，该菌株不能以对苯二甲酸为唯一碳源生长，极大地限制了其在PET生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种恶臭假单胞菌工程菌，其特征在于，包括恶臭假单胞菌和导入恶臭假单胞菌满足自我复制的重组质粒；所述恶臭假单胞菌的基因组中敲除了影响乙二醇代谢的关键基因；所述重组质粒为以下之一：(1)包含如SEQ ID NO.2所示的对苯二甲酸分解代谢模块；(2)包含如SEQ ID NO.6所示的对苯二甲酸分解代谢模块；(3)包含如SEQ ID NO.4所示的对苯二甲酸分解代谢模块和如SEQ ID NO.3所示的对苯二甲酸转运模块。2.如权利要求1所述的恶臭假单胞菌工程菌，其特征在于，所述恶臭假单胞菌的株型为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440 ATCC NO.4705。3.如权利要求1所述的恶臭假单胞菌工程菌，其特征在于，对于(3)，所述对苯二甲酸分解代谢模块和对苯二甲酸转运模块分别插入至两不同的重组质粒上，且两重组质粒均满足在恶臭假单胞菌中自我复制并相容。4.如权利要求1所述的恶臭假单胞菌工程菌，其特征在于，所述重组质粒的原始表达载体为pSEVA64。5.如权利要求1所述的恶臭假单胞菌工程菌，其特征在于，所述乙二醇代谢的关键基因为gclR，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。6.一种如权利要求1～5任一项所述的恶臭假单胞菌工程菌的制备方法，其特征在于，包括：(1)利用基因敲除技术将恶臭假单胞菌基因组影响乙二醇代谢的关键基因敲除，敲除后，进行实验室适应性进化，得到进化后的工程菌；(2)将对苯二甲酸分解代谢模块插入至原始表达载体上；或者，将对苯二甲酸分解代谢模块和对苯二甲酸转运模块分别插入至两原始表达载体上，得到重组质粒；(3)将重组质粒转化至敲除基因后的工程菌中，得到恶臭假单胞菌工程菌。7.如权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴坚平，梁天鑫，黄磊，张红玉，杨立荣，
申请(专利权)人：浙江大学杭州国际科创中心，
类型：发明
国别省市：