一种改变巨噬细胞分化和免疫的方法技术

一种治疗癌症的方法，所述方法包括：提供基因修饰的巨噬细胞或单核细胞，其中含有编码Hom

【技术实现步骤摘要】
一种改变巨噬细胞分化和免疫的方法
[0001]分案说明
[0002]本案是申请日为2016年11月10日，申请号为201680066221.6，专利技术名称为“一种改变巨噬细胞分化和免疫的方法”的中国专利技术专利申请的分案申请。

技术介绍

[0003]免疫在肿瘤发生中的作用日益受到重视。巨噬细胞是先天免疫和适应性免疫的执行者，并且已被公认为肿瘤及其微环境的关键组分。大量的研究表明了肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在几乎所有肿瘤的生长，侵袭和转移中的作用。来自循环单核细胞的TAM显示出广泛的表型，范围从所选肿瘤的早期阶段的M1样表型到大多数晚期肿瘤中的M2样表型。与其在促进肿瘤发生中的作用一致，M2样TAM显示升高表达IL
‑
10，IL4，MMP和VEGF的特征表型，以及降低表达促炎性细胞因子和细胞毒性iNOs和ROI，后者涉及到肿瘤杀伤活性。除了其促进肿瘤发生的内在功能外，TAM还通过改变T细胞应答和肿瘤微环境中的平衡而有助于抑制抗肿瘤免疫。TAM的功能可塑性已被广泛认可。然而，由于人们对TAMs可塑性如何受细胞内在因素控制理解尚很有限，靶向TAMs在肿瘤治疗中的有效性和潜在应用受到了限制。

技术实现思路

[0004]本专利技术一方面提供了一种治疗癌症的方法。所述方法包括：提供基因修饰的巨噬细胞或单核细胞，其含有编码含有Hom
‑
1同源异型框结构域的Hom
‑
1多肽或其片段的核酸序列，其中所述核酸序列可操作地连接于异源启动子，这样修饰的巨噬细胞或单核细胞表达Hom
‑
1多肽或其片段；并将修饰的巨噬细胞或单核细胞施用于患有癌症的受试者。在一个实施例中，修饰了的巨噬细胞或单核细胞的产生方法是将外源表达载体引入来自受试者或另一受试者的巨噬细胞或单核细胞。修饰了的巨噬细胞表现出M1表型。该方法可进一步包括，在施用步骤之前，与对照比较，受试者体内肿瘤相关巨噬细胞中Hom
‑
1检测出较低水平的表达。
[0005]本文在另一方面描述了一种治疗癌症的方法，其包括使巨噬细胞或单核细胞与一种或多种诱导Hom
‑
1表达的试剂接触，于是巨噬细胞或单核细胞中内源Hom
‑
1的表达水平高于在接触步骤之前；并将如此处理的巨噬细胞或单核细胞施用于患有癌症的受试者。
[0006]本文还描述了一种治疗癌症的方法，其包括使巨噬细胞或单核细胞与诱导M1基因表达的试剂或抑制M2基因表达的试剂接触，于是产生表现M1
‑
表型的巨噬细胞；并将产生的巨噬细胞施用于患有癌症的受试者。
[0007]在又一方面，本专利技术描述了鉴定受试者中的癌症的方法。该方法包括检测来自怀疑为癌症的组织区域的微环境中巨噬细胞的基因表达水平，该基因是Hom
‑
1基因，M1基因或M2基因，其中检测(i)与相应的对照水平相比，较低的Hom
‑
1基因或M1基因的表达水平；或(ii)更高表达水平的M2基因，表明疑似组织区域是癌症或有成为癌症的风险。
[0008]本专利技术还描述了用于鉴定治疗癌症的候选化合物的方法。该方法包括使测试细胞与测试化合物接触，其中测试细胞是巨噬细胞或单核细胞；在测试细胞中检测(i)Hom
‑
1，
(ii)与Hom
‑
1启动子可操作连接的报告基因，(iii)M1基因，或(iv)M2基因的表达水平；并选择与相应对照水平相比表达水平改变的测试化合物，其中所选化合物是用于治疗癌症的候选化合物。在一个实施例中，所述方法可以进一步包括使原瘤巨噬细胞与所选择的化合物接触，并测试接触了的原瘤巨噬细胞的抗肿瘤活性。原瘤巨噬细胞可以是肿瘤相关巨噬细胞或M2巨噬细胞。接触操作步骤中测试细胞可以在含有癌症样品的共培养物中一起接受接触。测试细胞可以选自M1巨噬细胞，M2巨噬细胞，肿瘤相关巨噬细胞，组织巨噬细胞和单核细胞衍生的巨噬细胞。
[0009]本专利技术一方面描述了用于鉴定治疗癌症的候选化合物的方法，其包括：提供含有测试细胞和癌症样品的共培养物，其中所述测试细胞是巨噬细胞或单核细胞；向共培养物中加入测试化合物，与一个参照物比较，这个测试化合物，(i)抑制癌症样品，(ii)增加测试细胞中与Hom
‑
1，或与Hom
‑
1启动子可操作连接的报告基因的表达水平，(iii)增加测试细胞中M1基因的表达，(iv)降低测试细胞中M2基因的表达，或(v)抑制Hom
‑
1，或与Hom
‑
1启动子可操作连接的报告基因的表达水平的显著降低；其中所选择的化合物是用于治疗癌症的候选化合物。在一个实施例中，癌症样品是癌症组织样品。在共培养中，测试细胞和癌症样本可以直接接触或彼此间接接触。测试细胞可以选自M1巨噬细胞，M2巨噬细胞，肿瘤相关巨噬细胞，组织巨噬细胞和单核细胞衍生的巨噬细胞。
[0010]另一方面，本专利技术描述了鉴定用于治疗癌症的候选化合物的方法，其包括：提供癌症组织样品，使组织样品与测试化合物接触，并选择测试化合物，与对照相比，该测试化合物(i)抑制组织样品(的生长)，(ii)增加组织样品中肿瘤相关巨噬细胞或单核细胞中Hom
‑
1的表达水平，(iii)增加组织样品中肿瘤相关巨噬细胞或单核细胞中M1基因的表达(iv)降低组织样品中肿瘤相关巨噬细胞或单核细胞中M2基因的表达，或(v)抑制在组织样品中的肿瘤相关巨噬细胞或单核细胞中Hom
‑
1表达水平的显著降低；其中所选择的化合物是用于治疗癌症的候选化合物。
[0011]在下面的描述中阐述了一个或多个实施例的细节。从以下描述和权利要求中，实施例的其他特征，目的和优点将显而易见。
具体实施方式
[0012]与从正常组织分离的巨噬细胞相比，TAM中的Hom
‑
1表达显著降低，这一发现是惊人的。进一步的发现也是惊人的：增加TAM中Hom
‑
1的表达将它们转化为具有肿瘤杀伤活性的M1样巨噬细胞。
[0013]Hom
‑
1是人类同源异型框转录因子，是典型的Wnt信号传导拮抗因素。Hom
‑
1的核苷酸序列(SEQ ID NO：1)及编码的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)如下所示：
[0014][0015][0016][0017]本专利技术描述了通过向受试者施用表现出抗肿瘤活性的巨噬细胞来治疗受试者的癌症的方法。除非另有说明，本文中所采用的术语“表现抗肿瘤活性的巨噬细胞”，“M1样巨噬细胞”和“表现M1表型的巨噬细胞”可以互换使用。
[0018]通过(1)增加巨噬细胞或单核细胞中的Hom
‑
1表达，(2)增加巨噬细胞或单核细胞中一种或多种M1基因的表达，与/或(3)在巨噬细胞或单核细胞中抑制一种或多种M2基因的表达，可以产生M1样巨噬细胞。
[0019]在该方法中可以使用单核细胞(例如源于受试者的外周血)，因为已经表明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗受试者癌症的药物组合物，包括一种基因修饰的巨噬细胞或单核细胞，其中含有编码Hom
‑
1同源异型框结构域的Hom
‑
1多肽或其片段的核酸序列，修饰了的巨噬细胞或单核细胞表达Hom
‑
1的多肽或其片段以显示抗肿瘤活性。2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述修饰的巨噬细胞或单核细胞通过将外表达载体引入(1)源自癌症受试者的巨噬细胞或单核细胞而产生的，或(2)HLA匹配的异源巨噬细胞或单核细胞而产生的。3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述核酸序列可操作地连接到内源性Hom
‑
1启动子或异源启动子，其中异源启动基因是组成型启动子或诱导型启动子。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的药物组合物，其中所述巨噬细胞表现出M1表型或表达升高水平的M1基因，如IL1β、IL6、IL12、IL23、TNFα、iNO、CD40、CD80、CD86、CD68、TLR4、TLR2、IL
‑
1R、MHCII、CCL15、CCL20、CXCL9、CXCL1或SOCS3。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的药物组合物，其中所述受试者在治疗之前被确定为与对照相比在受试者的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)中表达较低水平的Hom
‑
1。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的药物组合物，其中所述巨噬细胞在修饰获得表达升高的Hom
‑
1水平之前是原癌巨噬细胞，例如肿瘤相关巨噬细胞(TAM)或M2巨噬细胞。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的药物组合物，其中所述癌症与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)相关，所述肿瘤相关巨噬细胞表达比对照或具有癌症的受试者的正常组织中的巨噬细胞更低水平的Hom
‑
1，任选地，所述癌症是选自癌、肉瘤、白血病，肉瘤，骨肉瘤，淋巴瘤，黑素瘤，神经胶质瘤，恶性胶质瘤，嗜铬细胞瘤，肝细胞瘤，卵巢癌，皮肤癌，睾丸癌，胃癌，胰腺癌，肾癌，乳腺癌，前列腺癌，结直肠癌，头颈癌，脑癌，食管癌，膀胱癌，肾上腺皮质癌，肺癌，支气管癌，甲状腺癌，子宫内膜癌，鼻咽癌，宫颈癌，肝癌，转移癌和原发部位不明的癌症。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的药物组合物，其适合于通过输注或注射给予患有癌症的受试者，例如静脉内、鞘内、肌内、腔内、气管内、腹膜内、颅内或皮下给药。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的药物组合物，其适用于与放疗，化疗，...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱正崙，
申请(专利权)人：朱正崙，
类型：发明
国别省市：