谷氨酸脱氢酶启动子突变体及其应用制造技术

本发明专利技术基于谷氨酸棒杆菌的gdh基因的野生型启动子，通过对其RBS区进行突变构建启动子文库，筛选获得具有增强活性的突变启动子，表现出比野生型更高的启动子活性。本发明专利技术的突变启动子可用于增强目的基因的表达，例如与gdh基因可操作地连接，可以增强谷氨酸脱氢酶的表达强度，由此提高了重组菌株的氨基酸例如谷氨酸生产效率，具有较高的应用价值。具有较高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
谷氨酸脱氢酶启动子突变体及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及谷氨酸脱氢酶基因启动子的突变体，包含启动子突变体的表达盒、重组载体、重组宿主细胞，以及增强目标基因表达的方法、制备蛋白的方法和生产氨基酸例如谷氨酸的方法。

技术介绍

[0002]谷氨酸作为重要的氨基酸之一，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，被广泛应用于医药、健康、食品、动物饲料和化妆品等行业中，主要采用微生物发酵法来生产。目前，由于棒杆菌的生理优越性，棒杆菌已成为工业中最重要的谷氨酸生产菌株。随着生物技术的不断发展，对棒杆菌进行代谢工程改造提高其谷氨酸产量的报道逐渐增多，这些改造包括加强谷氨酸合成途径相关酶的表达，减弱竞争性途径相关酶的表达等等。
[0003]谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase，由gdh基因编码），可催化α
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酮戊二酸生成谷氨酸，是谷氨酸生物合成的关键酶，同时由于谷氨酸是脯氨酸、赖氨酸等的合成前体或重要代谢物，已有文献报道，增强谷氨酸脱氢酶的表达可以提高菌株的谷氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸等的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有启动子活性的多核苷酸，特征在于，所述多核苷酸选自如下任一项：（i）如SEQ ID NO：2所示的核苷酸；（ii）包含与（i）所示的核苷酸序列的反向互补序列的多核苷酸；（iii）包含在高严格性杂交条件或非常高严格性杂交条件下，能够与（i）或（ii）所示的核苷酸序列杂交的序列的反向互补序列的多核苷酸。2.如权利要求1所述的具有启动子活性的多核苷酸的突变体，其特征在于，所述突变体在对应于SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的第789至第799位存在突变；优选地，所述突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO：3
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5所示。3.包含如权利要求1
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2任一项所述启动子的表达盒；可选地，所述表达盒还含有目标基因，所述目标基因与所述具有启动子活性的多核苷酸可操作地连接。4.包含如权利要求1
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2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸或权利要求4所述表达盒的重组载体。5.含有权利要求1
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2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸、或权利要求3所述的表达盒、或权利要求4所述重组载体的重组微生物宿主细胞；优选地，所述重组微生物宿主细胞选自肠杆菌或棒杆菌，优选谷氨酸棒杆菌或大肠杆菌，包括但不限于谷氨酸棒杆菌ATCC 13869、谷氨酸棒杆菌ATCC 13032、谷氨酸棒杆菌B253、谷氨酸棒杆菌ATCC 14067，以及由上述菌株制备的产生L
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氨基酸的突变体或菌株。6.一种增强目的基因表达的方法，所述方法包括将如权利要求1
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2任一项所述具有启动子活性的多核苷酸与目的基因可操作地连接。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述目的基因是氨基酸合成相关的基因，如谷氨酸脱氢酶Gdh，柠檬酸合酶GltA、酮戊二酸脱氢酶OdhA、丙酮酸羧化酶PYC、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC、天冬氨酸激酶LysC、苏氨酸操纵子ThrABC、天冬氨酸半醛脱氢酶Asd、天冬氨酸氨裂合酶AspB、高丝氨酸脱氢酶Hom、高丝氨酸O
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙际宾，陈久洲，李广玉，郑平，蔡柠匀，周文娟，李德衡，刘娇，刘世周，赵兰坤，
申请(专利权)人：呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：